用于通用细胞疗法的武装NK细胞制造技术

本发明专利技术涉及治疗性治疗领域，特别是基于CD16+细胞和NK(自然杀伤)细胞的细胞疗法。具体地，本发明专利技术涉及包含CD16+细胞、NK细胞或NK细胞前体以及重组多肽的药物组合物，该重组多肽包含修饰的Fc区、特别是修饰的C

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于通用细胞疗法的武装NK细胞


[0001]本专利技术涉及治疗性治疗领域，特别是基于CD16+细胞和/或NK(自然杀伤)细胞和/或NK细胞前体的细胞疗法。更具体地，本专利技术涉及包含CD16+细胞、NK细胞或NK细胞前体以及重组多肽的药物组合物，该重组多肽包含经修饰的Fc区、特别是经修饰的C
H
2结构域。

技术介绍

[0002]细胞疗法的发展正在全面扩展到治疗进行性疾病，例如癌症、严重感染或器官或干细胞移植后的移植物排斥。大多数科学和临床突破主要是针对癌症取得的。细胞疗法已成为一种非常有前途的抗癌治疗选择，这来自于通过称为CAR(嵌合抗原受体)的嵌合受体遗传改造的T细胞(CAR
‑
T细胞)而从临床上获得的成功，特别是在治疗B细胞淋巴增生性疾病中。
[0003]目前，FDA(食品和药物管理局)批准的CAR
‑
T细胞是基于在释放和重新输注到患者体内之前在认证参考中心进行遗传改造的自体T细胞(来自患者)。然而，在相当多的患者中，通过CAR
‑
T细胞进行的治疗与随后的副作用、甚至是致死效应相关(Santomasso B,Bachier C,Westin J,Rezvani K,Shpall EJ.The Other Side of CAR T
‑
Cell Therapy:Cytokine Release Syndrome,Neurologic Toxicity,and Financial Burden.Am Soc Clin Oncol Educ Book.2019；39:433
‑
444.doi:10.1200/EDBK_238691)。此外，这种治疗的后勤和成本有悖于其广泛使用。因此，为了让更多的患者能够从这些类型的细胞疗法中受益，设计替代方案以克服CAR
‑
T细胞的缺点并使得能够提供新的治疗选择是至关重要的。
[0004]所研究的替代方案之一是使用NK(自然杀伤)细胞：即，可以在没有预先抗原刺激的情况下破坏靶细胞的细胞毒性淋巴细胞。然而，许多基本的临床前和临床结局表明，单独的NK细胞不能有效治疗不同的血液学和非血液学恶性病状。具体而言，这些NK细胞不足以有效识别其靶标和/或细胞毒性不足以产生所需的治疗效果。为了提高其功效，这些NK细胞可以“被武装(armed)”以识别靶细胞特异性抗原(Sanchez
‑
Martinez et al.,Theranostics 8(14):3856
‑
3869,June 2018)。
[0005]然而，在细胞疗法中仍然需要不诱导或诱导很少的副作用、更便宜、随着时间的推移高度稳定并且适用于大多数患者和大多数病状的新型组合物。
[0006]还需要提供用于施用治疗性化合物的新的方式，例如治疗性抗体和其他治疗性化合物，它们可以可靠地针对相关靶标并具有减少的副作用。
[0007]本专利技术的目的是满足全部或部分这些需求。

技术实现思路

[0008]本专利技术涉及CD16+细胞、NK细胞或NK细胞前体与重组多肽的组合；其中所述重组多肽包含：(i)经修饰的Fc区域，优选地在C
H
2结构域中具有至少一个修饰，和(ii)配体结合结构域，所述经修饰的Fc区域能够与所述细胞或其前体结合。
[0009]如在下文的实施例中具体说明的，专利技术人已经注意到CD16+细胞、特别是NK细胞，
与能够结合一种或多种配体的重组多肽组合，在体外和体内保持稳定数天。此外，已经注意到这些武装的CD16+细胞，特别是NK细胞，因此能够通过识别适当的配体来特异性靶向靶细胞。
[0010]CD16细胞表面标志物在本文中也称为FCγRIII表面受体。
[0011]根据其目的之一，本专利技术涉及一种药物组合物，其包含CD16+细胞和重组多肽；其中所述重组多肽包含：(i)经修饰的Fc(可结晶片段)区域，和(ii)配体结合结构域，所述Fc区域能够与所述CD16+细胞结合。
[0012]根据其目的之一，本专利技术还涉及一种药物组合物，其包含NK(自然杀伤)细胞或NK细胞前体以及重组多肽；其中所述重组多肽包含：(i)经修饰的Fc(可结晶片段)区域，和(ii)配体结合结构域，所述Fc区域能够与所述NK细胞或NK细胞前体结合。
[0013]专利技术人已经出乎预料地注意到，取自个体并在体外用本专利技术定义的重组多肽武装的NK细胞(其是CD16+细胞)允许增加NK细胞对靶细胞的细胞毒性。令人惊讶的是，与Moore et al.2010的教导相反，NK细胞的Fc受体与根据本专利技术的重组多肽之间的结合在体外和体内均保持稳定和特异性数天，具体地至少7天。因此，本说明书中定义的NK细胞和重组多肽的这种组合，将被称为“武装NK细胞”，其被证明是针对疾病治疗意味着破坏目标靶细胞的任何疾病的有效治疗方案。这种治疗方案不需要对NK细胞进行遗传改造，这与Wang等人的综述(Luyao Wang,Mei Dou,Qingxia Ma,Ruixue Yao,Jia Liu；Chimeric antigen receptor(CAR)
‑
modified NK cells against cancer:Opportunities and challenges；International Immunopharmacology 74(2019)105695)中具体描述的NK
‑
CAR细胞不同，这使得这种组合比NK
‑
CAR细胞更易于使用。事实上，单个NK细胞样本，例如取自脐带血的样本，足以针对对其可以确定合适的配体的任何和所有靶向特异性来治疗任何个体。
[0014]因此，专利技术人提供了实验证据，证明可尤其对应于自然杀伤细胞谱系的CD16+细胞可以有效地并以稳定的方式与包含经修饰的Fc区域的重组多肽组合。
[0015]此外，本专利技术已经证明本文公开的重组多肽对CD16受体，特别是CD16a受体具有长期的高亲和力。
[0016]专利技术人还提供实验证据表明，当重组多肽非共价结合时，与所列举的细胞的附接也是稳定的，甚至适用于治疗。因此，所列举的重组多肽与CD16+细胞和/或NK细胞或NK前体的“结合”或“附接”优选被认为是“非共价的”。
[0017]专利技术人还提出相应的策略适用于以减少的剂量和/或减少的副作用施用治疗性化合物。
[0018]专利技术人还提出，在本专利技术的意义上，相应的策略适用于此类CD16+细胞和/或NK细胞和/或其前体与多个具有经修饰的Fc区域的重组多肽的结合、特别是非共价结合。
[0019]根据这些目的之一，本专利技术涉及一种组合物，其包含CD16+细胞和能够与FcγRIII(CD16)表面蛋白、优选FCγRIIIa/CD16a表面蛋白结合的重组多肽，其中该重组多肽与由CD16+细胞表达的FcγRIII(CD16)表面蛋白、优选FCγRIIIa/CD16a表面蛋白非共价结合，并本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种组合物，包含CD16+细胞和能够与FcγRIII(CD16)表面蛋白结合的重组多肽，其中所述重组多肽与由所述CD16+细胞表达的所述FcγRIII(CD16)表面蛋白非共价结合，并且其中所述重组多肽包括：(i)野生型人IgG1的经修饰的C
H
2结构域，(ii)配体结合结构域，所述经修饰的C
H
2结构域与所述配体结合结构域结合，可选地通过接头与所述配体结合结构域结合，其中所述配体结合结构域包含能够与靶配体结合的序列；其中所述经修饰的C
H
2结构域的特征在于相对于野生型人IgG1的C
H
2结构域包含突变S239D和I332E，并且其中所述野生型人IgG1的C
H
2结构域由SEQ ID NO：1或由与氨基酸序列SEQ ID NO：1具有至少85％同一性百分比的序列表示，并且包含根据EU编号的序列位置231
‑
340。2.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述经修饰的C
H
2结构域相对于SEQ ID NO：1所示的野生型人IgG1的C
H
2结构域进行了修饰。3.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述FcγRIII(CD16)表面蛋白是FcγRIIIa/CD16a表面蛋白。4.根据权利要求2所述的组合物，其中，相对于所述野生型人IgG1的C
H
2结构域，所述经修饰的C
H
2结构域包含至少一个选自由H268F、S324T、G236A和A330L组成的清单的额外突变。5.根据权利要求2所述的组合物，其中，相对于所述野生型人IgG1的C
H
2结构域，所述经修饰的C
H
2结构域包含至少一个选自由H268F、S324T和A330L组成的清单的额外突变。6.根据权利要求2所述的组合物，其中，相对于所述野生型人IgG1的C
H
2结构域，所述经修饰的C
H
2结构域包含至少一个选自由H268F和S324T组成的清单的额外突变。7.根据权利要求6所述的组合物，其中，相对于所述野生型人IgG1的C
H
2结构域，所述经修饰的C
H
2结构域包含根据EU编号的氨基酸取代S239D、I332E和S324T。8.根据权利要求6所述的组合物，其中，相对于所述野生型人IgG1的C
H
2结构域，所述经修饰的C
H
2结构域包含根据EU编号的氨基酸取代S239D、I332E和H268F。9.根据权利要求5所述的组合物，其中，相对于所述野生型人IgG1的C
H
2结构域，所述经修饰的C
H
2结构域包含根据EU编号的氨基酸取代S239D、I332E和A330L。10.根据权利要求6所述的组合物，其中，相对于所述野生型人IgG1的C
H
2结构域，所述经修饰的C
H
2结构域包含根据EU编号的氨基酸取代S239D、I332E、H268F和S324T。11.根据权利要求2或3所述的组合物，其中，相对于所述野生型人IgG1的C
H
2结构域的C
H
2结构域修饰由突变S239D和I332E组成。12.根据权利要求1至11中任一项所述的组合物，其中，所述CD16+细胞相对于有需要的个体是同种异体的。13.根据权利要求1至12中任一项所述的组合物，其中，所述重组多肽是抗体，并且C
H
2结构域中的修饰相对于构成所述抗体的C
H
2结构域的配对(或重链的配对)是对称的或不对称的。14.根据权利要求1至13中任一项所述的组合物，其中，所述重组多肽包含人IgG1 Fc
(可结晶片段)区域，所述区域包含经修饰的C
H
2结构域。15.根据权利要求1至14中任一项所述的组合物，其中，所述重组多肽是抗体或其片段，所述抗体或其片段包含如权利要求1至6中任一项所定义的经修饰的C
H
2结构域或如权利要求14所定义的Fc区域和选自以下任何抗体的配体结合结构域的配体结合结构域：阿巴伏单抗、阿巴西普、阿昔单抗、阿比妥珠单抗、阿利鲁单抗、阿克托舒单抗、阿达木单抗、阿德木单抗、阿杜那单抗、阿柏西普、Afutuzymab、阿拉赛珠单抗、阿来西普、阿仑珠单抗、阿利西尤单抗、阿妥莫单抗、阿麦妥昔单抗、麻安莫单抗、阿奈妥单抗、Anifromumab、安芦珠单抗、阿泊珠单抗、阿西莫单抗、阿伐苏单抗、阿塞珠单抗、阿特珠单抗、阿替奴单抗、Altizumab、阿托木单抗、巴匹珠单抗、巴利昔单抗、巴维昔单抗、贝妥莫单抗、贝戈洛单抗、贝拉西普、贝利木单抗、贝那利珠单抗、柏替木单抗、贝索单抗、贝伐珠单抗、贝洛托舒单抗、比西单抗、比马卢单抗、比美吉珠单抗、比伐珠单抗、博纳吐单抗、布索组单抗、伯考赛珠单抗、本妥昔单抗、Briakimumab、布罗达单抗、布洛赛珠单抗、Bronticizumab、卡那奴单抗、美坎珠单抗、卡拉西单抗、卡罗单抗、卡芦单抗、卡妥索单抗、西利珠单抗、塞妥珠单抗、西妥昔单抗、西他土珠单抗、西妥木单抗、克拉扎珠单抗、克立昔单抗、克利妥珠单抗、考曲妥珠单抗、考妥昔单抗、可那木单抗、康赛珠单抗、克雷内治单抗、达西珠单抗、达克珠单抗、达罗托组单抗、达匹利珠单抗、达雷木单抗、德屈库单抗、登西珠单抗、地宁妥珠单抗、地诺单抗、Derlotixumab、地莫单抗、达妥昔单抗、地利伏单抗、Dorlinomab、曲齐妥单抗、度匹鲁单抗、度伐单抗、度司妥单抗、依美昔单抗、依库珠单抗、埃巴单抗、依屈洛单抗、依法珠单抗、依芬古单抗、埃迪鲁单抗、依更妥单抗、依洛珠单抗、艾西莫单抗、依米妥珠单抗、依玛妥珠单抗、依那妥组单抗、恩诺单抗、恩莫单抗、依诺妥珠单抗、依诺凯组单抗、依诺苏单抗、恩妥昔单抗、依匹莫单抗、依帕珠单抗、厄利珠单抗、厄马索单抗、依那西普、埃达珠单抗、依曲利组单抗、依维苏单抗、依洛尤单抗、艾韦单抗、法索单抗、法拉莫单抗、法妥组单抗、法司努单抗、泛维珠单抗、Fezkimumab、非拉妥组单抗、芬妥木单抗、非利伏单抗、法兰妥单抗、夫来库单抗、芳妥珠单抗、福雷芦单抗、福拉韦单抗、夫苏木单抗、Fulramumab、伏妥昔单抗、加利昔单抗、加尼妥单抗、更汀芦单抗、加维莫单抗、吉妥珠单抗、吉伏组单抗、吉瑞昔单抗、格巴妥木单抗、戈利木单抗、戈利昔单抗、古塞库单抗、伊巴珠单抗、替伊莫单抗、艾芦库单抗、艾达赛珠单抗、伊戈伏单抗、伊玛鲁单抗、英西单抗、伊马曲单抗、Inclacumab、英达妥昔单抗、英度妥单抗、英夫利昔单抗、英妥木单抗、伊诺莫单抗、伊珠单抗、伊匹木单抗、伊妥木单抗、伊沙妥昔单抗、伊利组单抗、伊珠单抗、凯利昔单抗、拉贝珠单抗、兰博利珠单抗、兰帕利珠单抗、来金珠单抗、来马索单抗、仑兹鲁单抗、乐德木单抗、来沙木单抗、利韦单抗、利法妥珠单抗、利格利珠单抗、利洛托单抗、林妥珠单抗、利瑞鲁单抗、洛迪赛珠单抗、洛吉维单抗、洛沃妥珠单抗、鲁卡木单抗、鲁利珠单抗、鲁昔单抗、鲁妥珠单抗、马帕尼单抗、玛格妥昔单抗、马司莫单抗、玛弗利木单抗、马妥珠单抗、美泊珠单抗、美替木单抗、米拉珠单抗、Minetumomab、米妥昔单抗、米妥莫单抗、莫加珠单抗、莫罗木单抗、莫维珠单抗、莫塞妥莫单抗、莫罗单抗
‑
CD3、他那可单抗、那美芦单抗、那普妥莫单抗、那呐妥单抗、那他珠单抗、奈巴库单抗、耐昔妥珠单抗、奈莫利珠单抗、奈瑞莫单抗、奈伐苏单抗、尼妥珠单抗、纳武单抗、若莫单抗、奥托萨昔单抗、阿托珠单抗、奥卡妥珠单抗、奥瑞珠单抗、奥度莫单抗、奥法木单抗、奥拉单抗、奥洛组单抗、奥马珠单抗、奥那妥组单抗、昂妥昔珠单抗、奥匹努单抗、莫妥组单抗、奥戈伏单抗、奥替苏单抗、奥昔珠单抗、Oltertuzumab、奥塞芦单抗、奥扎奈珠单抗、奥利组单抗、帕昔单抗、帕利珠
单抗、帕尼单抗、Pankomab、帕诺库单抗、帕萨妥珠单抗、帕考珠单抗、帕妥昔珠单抗、帕利珠单抗、帕曲妥单抗、派姆单抗、Pemtumomab、珀雷吉珠单抗、培妥珠单抗、培克珠单抗、皮地利珠单抗、匹那妥珠单抗、平妥单抗、泊洛妥珠单抗、泊奈珠单抗、普立昔单抗、普立木单抗、奎利珠单抗、雷妥莫单抗、雷曲妥单抗、雷韦单抗、雷泮赛珠单抗、雷莫芦单抗、雷珠单抗、雷昔库单抗、瑞法奈珠单抗、瑞加韦单抗、瑞利珠单抗、利纳西普、利妥木单抗、利努苏单抗、利妥昔单抗、罗妥木单抗、罗来度单抗、罗莫单抗、罗利珠单抗、罗维珠单抗、芦利珠单抗、沙西妥珠单抗、沙马组单抗、沙利鲁、沙妥莫单抗、司库奇尤单抗、瑟瑞妥单抗、瑟托萨昔单抗、司韦单抗、西罗珠单抗、西法木单抗、司妥昔单抗、西利珠单抗、西鲁库单抗、索非妥珠单抗、苏兰珠单抗、索利托单抗、Sonepcizumab、松妥珠单抗、司他芦单抗、硫索单抗、舒维组单抗、他贝芦单抗、他珠单抗、他度珠单抗、他利珠单抗、他尼珠单抗、他利妥莫单抗、他瑞妥单抗、替非珠单抗、阿替莫单抗、替妥莫单抗、替奈昔单抗、替利珠单抗、特度鲁单抗、TGN 1412、Ticlimumab、替曲吉珠单抗、替加珠单抗、TNX
‑
650、托珠单抗、托利珠单抗、托萨托舒单抗、托西莫单抗、托维妥单抗、曲罗芦单抗、曲妥珠单抗、TRBS07、曲利组单抗、曲美木单抗、曲戈卢单抗、西莫白介素单抗、妥韦单抗、乌妥昔单抗、乌洛鲁单抗、乌瑞鲁单抗、乌珠单抗、优特克单抗、万多妥珠单抗、万替妥单抗、伐努赛珠单抗、伐利昔单抗、伐立鲁单抗、伐利组单抗、维多珠单抗、维妥珠单抗、维帕莫单抗、维森库单抗、维西珠单抗、伏洛昔单抗、沃瑟妥珠单抗、伏妥莫单抗、扎芦木单抗、扎木单抗、扎妥昔单抗、齐拉木单抗、阿柏西普和阿佐莫单抗。16.用作药品、优选用于治疗或预防有需要的个体的癌症、自身免疫性疾病或传染病的方法中的根据权利要求1至15中任一项所述的组合物。17.一种药物组合物，包含根据权利要求1至16中任一项所述的组合物，可选地还包含赋形剂或药理学上可接受的载剂。18.用作药品、优选用于治疗或预防有需要的个体的癌症、自身免疫性疾病或传染病的方法中的根据权利要求1至16中任一项所述的组合物或根据权利要求17所述的药物组合物，其中，所述CD16+细胞相对于有需要的个体是同种异体的。19.一种组合物，包含NK(自然杀伤)细胞和能够与FcγRIII(CD16)表面蛋白结合的重组多肽，其中所述重组多肽与由所述NK(自然杀伤)细胞表达的所述FcγRIII(CD16)表面蛋白非共价结合，并且其中所述重组多肽包括：(i)野生型人IgG1的经修饰的C
H
2结构域，(ii)配体结合结构域，所述经修饰的C
H
2结构域与所述配体结合结构域结合，可选地通过接头与所述配体结合结构域结合，其中所述配体结合结构域包含能够与靶配体结合的序列；其中所述经修饰的C
H
2结构域的特征在于相对于野生型人IgG1的C
H
2结构域包含突变S239D和I332E，并且其中所述野生型人IgG1的C
H
2结构域由SEQ ID NO：1或由与氨基酸序列SEQ ID NO：1具有至少85％同一性百分比的序列表示，并且包含根据EU编号的序列位置231
‑
340。20.根据权利要求19所述的组合物，其中，所述经修饰的C
H
2结构域相对于SEQ ID NO：1所示的野生型人IgG1的C
H
2结构域进行了修饰。21.根据权利要求20所述的组合物，其中，相对于所述野生型人IgG1的C
H
2结构域，所述
经修饰的C
H
2结构域包含至少一个选自由H268F、S324T、G236A和A330L组成的清单的额外突变。22.根据权利要求20所述的组合物，其中，相对于所述野生型人IgG1的C
H
2结构域，所述经修饰的C
H
2结构域包含至少一个选自由H268F、S324T和A330L组成的清单的额外突变。23.根据权利要求20所述的组合物，其中，相对于所述野生型人IgG1的C
H
2结构域，所述经修饰的C
H
2结构域包含至少一个选自由H268F和S324T组成的清单的额外突变。24.根据权利要求23所述的组合物，其中，相对于所述野生型人IgG1的C
H
2结构域，所述经修饰的C
H
2结构域包含根据EU编号的氨基酸取代S239D、I332E和S324T。25.根据权利要求23所述的组合物，其中，相对于所述野生型人IgG1的C
H
2结构域，所述经修饰的C
H
2结构域包含根据EU编号的氨基酸取代S239D、I332E和H268F。26.根据权利要求22所述的组合物，其中，相对于所述野生型人IgG1的C
H
2结构域，所述经修饰...

【专利技术属性】
技术研发人员：马丁，
申请(专利权)人：法国国家健康医学研究院INSERM蒙彼利埃大学区域医学中心CHUMICM蒙彼利埃癌症研究所，
类型：发明
国别省市：