γδT细胞用于制备抗肿瘤药物的用途制造技术

本发明专利技术公开了γδT细胞用于制备抗肿瘤药物的用途。该技术方案通过实验手段发现，将γδT细胞疗法与DC

【技术实现步骤摘要】
γδ
T细胞用于制备抗肿瘤药物的用途


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体涉及γδT细胞用于制备抗肿瘤药物的用途。

技术介绍

[0002]T细胞表面存在诸多标记，如T细胞受体(TCR)、白细胞分化抗原(CD)等，可根据这些标记将T细胞分为不同类型的亚群。γδT细胞是执行固有免疫功能的T细胞亚群，其TCR由γ和δ链组成。γδT细胞是一种既能杀伤癌细胞，肿瘤干细胞，又能识别癌抗原的免疫细胞。同时，γδT细胞具有抗感染作用，在人体固有免疫系统中发挥重要作用。
[0003]构成T细胞受体的肽链有α、β、γ和δ四种，γδT细胞表面的TCR是由γ链和δ链组成的异二聚体(TCRγδ)。TCRγδ分子胞外区结构类似于免疫球蛋白，远离细胞膜的一端为可变区(V区)，而靠近细胞膜的一端为恒定区(C区)。TCRγδ分别由γ基因和δ基因编码。其中γ基因含有10个V基因片段、2个D基因片段和2个J基因片段，δ基因含有7个V基因片段和2个J基因片段。通过排列组合，理论上可以产生500种TCRγδ分子。实际上，γδT细胞往往只采用特定的6种Vγ和3种Vδ来编码TCRγδ分子，因此其多样性受到了限制。
[0004]在健康的成年人中，γδT细胞占外周血T细胞的1％～5％，它主要分布于肠道、呼吸道以及泌尿生殖道等黏膜和皮下组织，是构成表皮内淋巴细胞和黏膜组织上皮内淋巴细胞(IEL)的主要成分之一。
[0005]细胞毒性是γδT细胞的主要生物学效应，也是其发挥抗肿瘤作用的主要方式。TCRγδ能够识别在肿瘤细胞内积聚的异戊烯焦磷酸(IPP)和二甲基烯丙基焦磷酸，进而激活γδT细胞。
[0006]激活的γδT细胞能够通过多种途径杀伤肿瘤细胞。
[0007]1、通过凋亡诱导蛋白配体途径Fas
‑
FasL和相关凋亡诱导配体受体诱导肿瘤细胞凋亡。
[0008]2、分泌大量的细胞因子，如干扰素γ(IFN
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γ)、肿瘤坏死因子α(TNF
‑
α)和白细胞介素2(IL
‑
2)，作用于肿瘤细胞及其微环境。其中IFN
‑
γ是主要细胞因子，具有多种抗肿瘤作用如直接抑制肿瘤生长、阻断血管生成和刺激巨噬细胞，是γδT细胞介导的抗肿瘤反应中的关键细胞因子。
[0009]3、通过某些膜表面受体如FcγR，发挥抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(ADCC)。
[0010]目前，γδT细胞已经在肿瘤治疗方面备受关注。例如，基于Vγ9Vδ2T细胞的免疫疗法已被研究用于血液恶性肿瘤(NCT02656147)、头颈癌、肝细胞癌(NCT00562666)、肾癌、乳腺癌、前列腺癌、神经母细胞瘤和肺癌等。这些临床研究证实了γδT细胞的过继性转移是安全可行的。
[0011]尽管其抗肿瘤机制是确切的，但目前的临床试验结果并不乐观。在使用γδT细胞进行癌症治疗的临床试验中，其平均有效性只有21％，而且，目前影响γδT疗法有效性的机理尚不清楚。此外，γδT细胞同时具有抗肿瘤和亲肿瘤的特性，并能从抗肿瘤细胞极化为亲肿瘤细胞，这为γδT细胞疗法的有效性和安全性带来了一定的不确定性。

技术实现思路

[0012]本专利技术旨在针对现有技术的技术缺陷，提供γδT细胞用于制备抗肿瘤药物的用途，以解决目前，γδT细胞疗法对肿瘤治疗的有效率较低的技术问题。
[0013]为实现以上技术目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0014]γδT细胞用于制备抗肿瘤药物的用途，该药物包括γδT细胞，DC细胞和CIK细胞。
[0015]作为优选，所述γδT细胞为Vγ2Vδ2T细胞。
[0016]作为优选，每mL该药物含有Vγ2Vδ2T细胞0.5
×
107～0.8
×
107个，DC细胞1.2
×
107～1.8
×
107个，CIK细胞0.5
×
107～1
×
107个。
[0017]作为优选，所述抗肿瘤药物是抑制肿瘤细胞生长的药物。
[0018]作为优选，所述抗肿瘤药物的剂型是注射剂。
[0019]作为优选，所述抗肿瘤药物是食道癌治疗药物。
[0020]作为优选，所述抗肿瘤药物是卵巢癌治疗药物。
[0021]作为优选，所述抗肿瘤药物是乳腺癌治疗药物。
[0022]作为优选，所述抗肿瘤药物是胆囊癌治疗药物。
[0023]作为优选，所述抗肿瘤药物是胰腺癌治疗药物。
[0024]本专利技术公开了γδT细胞用于制备抗肿瘤药物的用途。该技术方案通过实验手段发现，将γδT细胞疗法与DC
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CIK细胞疗法联用，可有效改善肿瘤治疗效果，对包括食道癌、胆囊癌、胰腺癌等在内的多种实体肿瘤具有确切的抑制作用。本专利技术可诱导以CD3+CD56+(NKT)表型为主的T杀伤细胞群，促进γδT细胞向肿瘤局部迁移，进而通过穿孔素
‑
颗粒酶途径溶解癌细胞，同时，通过配体TRAIL和FasL途径对肿瘤细胞起到杀伤作用，这种协同作用有助于保证免疫细胞疗法的有效性。得益于以上有益的发现，本专利技术开发了基于Vγ2Vδ2T
‑
DC
‑
CIK的联合免疫细胞治疗药物。本专利技术不仅疗效确切，而且安全性好，具有广阔的应用前景。
具体实施方式
[0025]以下将对本专利技术的具体实施方式进行详细描述。为了避免过多不必要的细节，在以下实施例中对属于公知的结构或功能将不进行详细描述。以下实施例中所使用的近似性语言可用于定量表述，表明在不改变基本功能的情况下可允许数量有一定的变动。除有定义外，以下实施例中所用的技术和科学术语具有与本专利技术所属领域技术人员普遍理解的相同含义。
[0026]取肿瘤病人外周血50ml。从外周血得到单个核细胞(PBMC)在体外培养条件下，利用白细胞介素
‑
4、粒细胞和巨噬细胞集落刺激因子以及肿瘤坏死因子α诱导产生成熟DC细胞。用γ
‑
干扰素、白细胞介素
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2和抗CD3单克隆抗体诱导产生CIK细胞。DC细胞和CIK细胞按一定比例混合共培养，产生DC
‑
CIK细胞，与Vγ2Vδ2T在体外环境下共培养使其得到扩增和激活。以每mL药物含Vγ2Vδ2T细胞0.5
×
107～0.8
×
107个、DC细胞1.2
×
107～1.8
×
107个、CIK细胞0.5
×
107～1
×
107个的规格制成注射剂，密封保存于4℃环境，用于以下实验。
[0027]实施例1
[0028]1试验材料
[0029]1.1实验动物
[0030]Balb/c小鼠、DBA小鼠、615小鼠、KM小鼠均为SPF级实验动物。
[0031]1.2实验肿瘤细胞
[0032]用于实验的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.γδT细胞用于制备抗肿瘤药物的用途，其特征在于，该药物包括γδT细胞，DC细胞和CIK细胞。2.根据权利要求1所述的γδT细胞用于制备抗肿瘤药物的用途，其特征在于，所述γδT细胞为Vγ2Vδ2T细胞。3.根据权利要求2所述的γδT细胞用于制备抗肿瘤药物的用途，其特征在于，每mL该药物含有Vγ2Vδ2T细胞0.5
×
107～0.8
×
107个，DC细胞1.2
×
107～1.8
×
107个，CIK细胞0.5
×
107～1
×
107个。4.根据权利要求3所述的γδT细胞用于制备抗肿瘤药物的用途，其特征在于，所述抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘超，曹玉福，郑兵，梅景顺，于洋，肖家兴，张颖瑞，
申请(专利权)人：山东灵犀生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：