包含T细胞抗原偶联物的细胞及其用途制造技术

提供了包含一种分子的γδT细胞，该分子包含(i)靶特异性抗原结合结构域，(ii)结合与TCR复合物缔合的蛋白的抗原结合结构域，和(iii)T细胞受体信号传导结构域多肽。(iii)T细胞受体信号传导结构域多肽。(iii)T细胞受体信号传导结构域多肽。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含T细胞抗原偶联物的细胞及其用途
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年11月6日提交的美国临时专利申请第63/110,902号的权益和优先权，其出于所有目的通过引用以其整体并入本文。
[0003]序列表
[0004]本申请包括序列表，所述序列表已经以ASCII格式电子提交并且特此通过引用以其整体并入。创建于2021年11月3日的所述ASCII副本被命名为TMV
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005WO_SL.txt，并且大小为130,056字节。
[0005]概述
[0006]在某些实施方案中，本文公开了治疗有相应需要的个体中的癌症的方法。在一些实施方案中，方法包括向个体施用治疗有效量的：(i)包含T细胞抗原偶联物(TAC)多肽的γδT细胞；和(ii)唑来膦酸(zoledronate)。在一些实施方案中，唑来膦酸在γδT细胞之前、之后或同时施用。在一些实施方案中，TAC多肽包含：(a)靶特异性抗原结合结构域；(b)结合与TCR复合物缔合的蛋白的抗原结合结构域；以及(c)TCR共受体胞质结构域和跨膜结构域。在一些实施方案中，TAC多肽按顺序(例如，从N
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末端到C
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末端)包含：(a)靶特异性抗原结合结构域；(b)结合与TCR复合物缔合的蛋白的抗原结合结构域；以及(c)TCR共受体胞质结构域和跨膜结构域。在一些实施方案中，TAC多肽由核酸编码，所述核酸按顺序(例如，从5
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到3
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)包含：(a)编码靶特异性抗原结合结构域的第一多核苷酸；(b)编码结合与TCR复合物缔合的蛋白的抗原结合结构域的第二多核苷酸；以及(c)编码TCR共受体胞质结构域和跨膜结构域的第三多核苷酸。在一些实施方案中，靶特异性抗原结合结构域是结合(例如，选择性结合)CD19抗原、HER2抗原或BCMA抗原的抗原结合结构域。在一些实施方案中，靶特异性抗原结合结构域是设计的锚蛋白重复(DARPin)多肽、单链可变片段(scFv)、单结构域抗体、双体(diabody)、亲和体(affibody)、adnectin、affilin、phylomer、fynomer、affimer、肽适配体、knottin、centyrin、anticalin或纳米抗体(nanobody)。在一些实施方案中，靶特异性抗原结合结构域是设计的锚蛋白重复(DARPin)多肽或单链可变片段(scFv)。在一些实施方案中，与TCR复合物缔合的蛋白是CD3蛋白，例如，γδT细胞上的TCR复合物的CD3蛋白。在一些实施方案中，CD3蛋白是CD3γ蛋白、CD3δ蛋白和/或CD3ε蛋白。在一些实施方案中，CD3蛋白是CD3ε蛋白。在一些实施方案中，CD3蛋白的结合诱导γδT细胞的激活。在一些实施方案中，结合与TCR复合物缔合的蛋白的抗原结合结构域来源于选自UCHT1、OKT3、F6A和L2K的抗体。在一些实施方案中，结合与TCR复合物缔合的蛋白的抗原结合结构域是UCHT1抗原结合结构域，例如，来源于UCHT1的scFv。在一些实施方案中，UCHT1抗原结合结构域在对应于SEQ ID NO:14的氨基酸182的位置处包含Y到T的突变(Y182T)。在一些实施方案中，UCHT1抗原结合结构域是UCHT1的人源化变体(huUCHT1)，例如，在对应于SEQ ID NO:44的氨基酸177的位置处包含Y到T的突变的UCHT1的人源化变体(huUCHT1(Y177T))。在一些实施方案中，UCHT1抗原结合结构域包含与SEQ ID NO:14(UCHT1)、SEQ ID NO:72(UCHT1(Y182T))、SEQ ID NO:44(huUCHT1)、或SEQ ID NO:46(huUCHT1(Y177T))具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些
实施方案中，结合与TCR复合物缔合的蛋白的抗原结合结构域是OKT3，例如，结合与TCR复合物缔合的蛋白的抗原结合结构域包含与SEQ ID NO:22(OKT3)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，结合与TCR复合物缔合的蛋白的抗原结合结构域是F6A，例如，结合与TCR复合物缔合的蛋白的抗原结合结构域包含与SEQ ID NO:24(F6A)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，结合与TCR复合物缔合的蛋白的抗原结合结构域是L2K，例如，结合与TCR复合物缔合的蛋白的抗原结合结构域包含与SEQ ID NO:26(L2K)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，胞质结构域是CD4胞质结构域，并且跨膜结构域是CD4跨膜结构域，或者其中胞质结构域是CD8胞质结构域，并且跨膜结构域是CD8跨膜结构域。在一些实施方案中，TCR共受体胞质结构域和跨膜结构域包含与SEQ ID NO:18(CD4跨膜和胞质结构域)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，组分(a)、(b)和/或(c)以任何合适的方式连接，诸如以任何合适的顺序连接和/或包含任何合适的接头。在一些实施方案中，(a)、(b)和(c)彼此直接融合或由至少一种接头连接。在一些实施方案中，(a)和(c)融合到(b)。在一些实施方案中，(b)和(c)融合到(a)。在一些实施方案中，至少一种接头将(a)连接到(b)。在一些实施方案中，至少一种接头是G4S柔性接头、大蛋白结构域、长螺旋结构或短螺旋结构。在一些实施方案中，至少一种接头包含与SEQ ID NO:12(基于(G4S)4的接头)、SEQ ID NO:16(基于G4S的接头)、SEQ ID NO:20(基于CD4的接头)、SEQ ID NO:28(短螺旋连接头)、SEQ ID NO:30(长螺旋连接头)、SEQ ID NO:32(大结构域连接头)、SEQ ID NO:69(柔性连接头)、SEQ ID NO:73(G4S柔性接头)、或SEQ ID NO:74(G4S3柔性接头)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，TAC多肽不包含共刺激结构域和/或激活结构域。在一些实施方案中，TAC多肽还包含前导序列，例如，包含与SEQ ID NO:6(muIgG前导)、SEQ ID NO:48(huIgG前导)、或SEQ ID NO:50(huCD8a前导)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种治疗有相应需要的个体中的癌症的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的：(i)包含T细胞抗原偶联物(TAC)多肽的γδT细胞，所述T细胞抗原偶联物(TAC)多肽包含：(a)结合CD19抗原、HER2抗原或BCMA抗原的抗原结合结构域；(b)结合与TCR复合物缔合的蛋白的抗原结合结构域；以及(c)TCR共受体胞质结构域和跨膜结构域；其中(a)、(b)和(c)彼此直接融合或由至少一种接头连接；以及(ii)唑来膦酸。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述唑来膦酸在所述γδT细胞之前、之后或同时施用。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述结合CD19抗原、HER2抗原或BCMA抗原的抗原结合结构域是设计的锚蛋白重复(DARPin)多肽或单链可变片段(scFv)。4.根据权利要求1
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3中任一项所述的方法，其中所述与TCR复合物缔合的蛋白是CD3蛋白。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述CD3蛋白是所述γδT细胞上的TCR复合物。6.根据权利要求4或5所述的方法，其中所述CD3蛋白的结合诱导所述γδT细胞的激活。7.根据权利要求1
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6中任一项所述的方法，其中所述结合与TCR复合物缔合的蛋白的抗原结合结构域选自UCHT1、OKT3、F6A、L2K或其任何变体。8.根据权利要求7所述的方法，其中所述结合与TCR复合物缔合的蛋白的抗原结合结构域是UCHT1抗原结合结构域。9.根据权利要求8所述的方法，其中所述UCHT1抗原结合结构域是单链抗体。10.根据权利要求8或9所述的方法，其中所述UCHT1抗原结合结构域在对应于SEQ ID NO:14的氨基酸182的位置处包含Y到T的突变(Y182T)。11.根据权利要求8
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10中任一项所述的方法，其中所述UCHT1抗原结合结构域是UCHT1的人源化变体(huUCHT1)。12.根据权利要求11所述的方法，其中所述UCHT1抗原结合结构域是在对应于SEQ ID NO:44的氨基酸177的位置处包含Y到T的突变的UCHT1的人源化变体(huUCHT1(Y177T))。13.根据权利要求8
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12中任一项所述的方法，其中所述UCHT1抗原结合结构域包含与SEQ ID NO:14(UCHT1)、SEQ ID NO:72(UCHT1(Y182T))、SEQ ID NO:44(huUCHT1)、或SEQ ID NO:46(huUCHT1(Y177T))具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列。14.根据权利要求7所述的方法，其中所述结合与TCR复合物缔合的蛋白的抗原结合结构域是OKT3。15.根据权利要求14所述的方法，其中所述结合与TCR复合物缔合的蛋白的抗原结合结构域包含与SEQ ID NO:22具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列。16.根据权利要求7所述的方法，其中所述结合与TCR复合物缔合的蛋白的抗原结合结构域是F6A。
TAC)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列。35.根据权利要求32
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34中任一项所述的方法，其中所述TAC多肽由包含与SEQ ID NO:63(CD19 TAC)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的核苷酸序列的核酸编码。36.根据权利要求1
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31中任一项所述的方法，其中所述TAC多肽包含结合HER2抗原的抗原结合结构域。37.根据权利要求36所述的方法，其中所述结合HER2抗原的抗原结合结构域包括选自曲妥珠单抗、帕妥珠单抗、拉帕替尼、来那替尼、Ado曲妥珠单抗Emtansine、甘妥单抗、玛格妥昔单抗、替米妥珠单抗和厄妥索单抗的抗体的抗原结合结构域。38.根据权利要求36或37所述的方法，其中所述结合HER2抗原的抗原结合结构域包含与SEQ ID NO:8(HER2 DARPin)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列。39.根据权利要求36
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38中任一项所述的方法，其中所述TAC多肽包含与SEQ ID NO:66(HER2 TAC:huIgG前导序列；huUCHT1 CD3结合结构域)、SEQ ID NO:68(HER2 TAC:CD8a前导；huUCHT1 CD3结合结构域)、或SEQ ID NO:76(HER2 TAC:muIgG前导；huUCHT1 CD3结合结构域)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列。40.根据权利要求36
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39中任一项所述的方法，其中所述TAC多肽由包含与SEQ ID NO:65(HER2 TAC:huIgG前导；huUCHT1 CD3结合结构域)、SEQ ID NO:67(HER2 TAC:CD8a前导；huUCHT1 CD3结合结构域)、或SEQ ID NO:75(HER2 TAC:muIgG前导；huUCHT1 CD3结合结构域)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的核苷酸序列的核酸编码。41.根据权利要求1
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31中任一项所述的方法，其中所述TAC多肽包含结合BCMA抗原的抗原结合结构域。42.根据权利要求41所述的方法，其中所述结合BCMA抗原的抗原结合结构域包括Belantamab mafodotin的抗原结合结构域。43.根据权利要求41或42所述的方法，其中所述结合BCMA抗原的抗原结合结构域包含与SEQ ID NO:34(BCMA scFv)、SEQ ID NO:52(3625BCMA scFv,Vh
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Vl)、或SEQ ID NO:54(3625BCMA scFv,Vl
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Vh)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列。44.根据权利要求41
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43中任一项所述的方法，其中所述TAC多肽包含与SEQ ID NO:56(BCMA TAC:3625BCMA scFv,Vh
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Vl，螺旋接头；huUCHT1 CD3结合结构域)、SEQ ID NO:58(BCMA TAC:3625BCMA scFv,Vl
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Vh，螺旋接头；huUCHT1 CD3结合结构域)、SEQ ID NO:60(BCMA TAC:3625BCMA scFv,Vh
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Vl，G4S接头；huUCHT1 CD3结合结构域)、或SEQ ID NO:62(BCMA TAC:3625BCMA scFv,Vl
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Vh，G4S接头；huUCHT1 CD3结合结构域)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列。45.根据权利要求41
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44中任一项所述的方法，其中所述TAC多肽由包含与SEQ ID NO:
55(BCMA TAC:3625BCMA scFv,Vh
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Vl，螺旋接头；huUCHT1 CD3结合结构域)、SEQ ID NO:57(BCMA TAC:3625BCMA scFv,Vl
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Vh，螺旋接头；huUCHT1 CD3结合结构域)、SEQ ID NO:59(BCMA TAC:3625BCMA scFv,Vh
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Vl，G4S接头；huUCHT1 CD3结合结构域)、或SEQ ID NO:61(BCMA TAC:3625BCMA scFv,Vl
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Vh，G4S接头；huUCHT1 CD3结合结构域)具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的核苷酸序列的核酸编码。46.一种制备包含TAC多肽的γδT细胞的方法，所述方法包括：(a)使从个体分离的γδT细胞与唑来膦酸和IL
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2接触；(b)使所述γδT细胞与包含编码所述TAC多肽的核酸的表达载体接触；(c)培养所述细胞；以及(d)从培养物中去除αβT细胞。47.一种γδT细胞，所述γδT细胞通过权利要求46所述的方法制备。48.一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求47所述的γδT细胞。49.一种治疗有相应需要的个体中的癌症的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的权利要求48所述的药物组合物。50.根据权利要求49所述的方法，所述方法还包括向所述个体施用唑来膦酸。51.根据权利要求50所述的方法，其中所述唑来膦酸在所述γδT细胞之前、之后或同时施用。52.一种γδT细胞，所述γδT细胞包含T细胞抗原偶联物(TAC)多肽，所述T细胞抗原偶联物(TAC)多肽包含：(a)结合CD19抗原、HER2抗原或BCMA抗原的抗原结合结构域；(b)结合与TCR复合物缔合的蛋白的抗原结合结构域；以及(c)TCR共受体胞质结构域和跨膜结构域；其中(a)、(b)和(c)彼此直接融合或由至少一种接头连接。53.根据权利要求52所述的γδT细胞，，其中结合CD19抗原、HER2抗原或BCMA抗原的抗原结合结构域是设计的锚蛋白重复(DARPin)多肽或单链可变片段(scFv)。54.根据权利要求52或53所述的γδT细胞，其中所述与TCR复合物缔合的蛋白是CD3蛋白。55.根据权利要求54所述的γδT细胞，其中所述CD3蛋白是所述γδT细胞上的TCR复合物。56.根据权利要求54或55所述的γδT细胞，其中所述CD3蛋白的结合诱导所述γδT细胞的激活。57.根据权利要求52
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56中任一项所述的γδT细胞，其中所述结合与TCR复合物缔合的蛋白的抗原结合结构域选自UCHT1、OKT3、F6A、L2K或其任何变体。58.根据权利要求57所述的γδT细胞，其中所述结合与TCR复合物缔合的蛋白的抗原结合结构域是UCHT1抗原结合结构域。59.根据权利要求58所述的γδT细胞，其中所述UCHT1抗原结合结构域是单链抗体。60.根据权利要求58或59所述的γδT细胞，其中所述UCHT1抗原结合结构域在对应于SEQ ID NO:14的氨基酸182的位置处包含Y到T的突变(Y182T)。
61.根据权利要求58
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60中任一项所述的γδT细胞，其中所述UCHT1抗原结合结构域是UCHT1的人源化变体(huUCHT1)。62.根据权利要求61所述的γδT细胞，其中所述UCHT1抗原结合结构域是在对应于SEQ ID NO:44的氨基酸177的位置处包含Y到T的突变的UCHT1的人源化变体(huUCHT1(Y177T))。63.根据权利要求58
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62中任一项所述的γδT细胞，其中所述UCHT1抗原结合结构域包含与SEQ ID NO:14(UCHT1)、SEQ ID NO:72(UCHT1(Y182T))、SEQ ID NO:44(huUCHT1)、或SEQ ID NO:46(huUCHT1(Y177T))具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列。64.根据权利要求57所述的γδT细胞，其中所述结合与TCR复合物缔合的蛋白的抗原结合结构域是OKT3。65.根据权利要求64所述的γδT细胞，其中所述结合与TCR复合物缔合的蛋白的抗原结合结构域包含与SEQ ID NO:22具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列。66.根据权利要求57所述的γδT细胞，其中所述结合与TCR复合物缔合的蛋白的抗原结合结构域是F6A。67.根据权利要求66所述的γδT细胞，其中所述结合与TCR复合物缔合的蛋白的抗原结合结构域包含与SEQ ID NO:24具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列。68.根据权利要求57所述的γδT细胞，其中所述结合与TCR复合物缔合的蛋白的抗原结合结构域是L2K。69.根据权利要求68所述的γδT细胞，其中所述结合与TCR复合物缔合的蛋白的抗原结合结构域包含与SEQ ID NO:26具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：乔纳森，
申请(专利权)人：特拉姆维拉免疫美国有限公司，
类型：发明
国别省市：