用于增强治疗性免疫细胞功效的方法和组合物技术

本公开文本总体上尤其涉及已经被工程化以表达介体复合物的降低水平的一个或多个亚基的重组免疫细胞，并且特别涉及展现出增强的效应子功能的工程化免疫细胞。还提供了用于产生具有增强的效应子功能的工程化免疫细胞的方法、包含所述具有增强的效应子功能的工程化免疫细胞的药物组合物、以及用于预防和/或治疗有需要的受试者的健康状况的方法和试剂盒。疗有需要的受试者的健康状况的方法和试剂盒。疗有需要的受试者的健康状况的方法和试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于增强治疗性免疫细胞功效的方法和组合物
关于联邦政府资助研发的声明
[0001]本专利技术是根据由美国国立卫生研究院授予的合同CA232568和CA049605在美国政府支持下完成的。政府享有本专利技术的一定权利。相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年11月4日提交的美国临时专利申请序列号63/109,517的优先权，将其公开内容通过引用以其整体并入本文，包括任何附图。序列表的并入
[0003]本申请包含序列表，其通过引用以其整体特此并入。所附的名称为“078430
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527001WO_Sequence Listing_ST25.txt”的序列表文本文件创建于2021年10月5日，并且为3.4KB。


[0004]本公开文本总体上尤其涉及已经被工程化以表达介体复合物的降低水平的一个或多个亚基的重组免疫细胞，并且特别涉及具有增强的效应子功能的工程化免疫细胞。还提供了用于产生具有增强的效应子功能的工程化免疫细胞的方法、包含所述具有增强的效应子功能的工程化免疫细胞的药物组合物、以及用于预防和/或治疗有需要的受试者的健康状况的方法和试剂盒。

技术介绍

[0005]免疫细胞具有靶向肿瘤细胞同时保留正常组织的潜力，因此免疫细胞可以是有效的和特异性的“活药物”。一些临床观察结果表明它们可能具有主要的抗癌活性。出于这个原因，基因修饰的免疫细胞的过继转移已经成为各种恶性肿瘤的有效疗法。例如，当前模式的过继T细胞疗法包括经修饰以表达癌症抗原特异性受体(如嵌合抗原受体(CAR)和高亲和力T细胞受体(TCR))的细胞。在过继T细胞疗法中，经修饰的T细胞典型地通过体外或离体暴露于同源抗原而被激活，扩增，然后将其施用于个体，在所述个体中它们扩增并展现出细胞溶解活性和/或发送信号以启动针对靶癌症的免疫应答。
[0006]使用CAR修饰的自体T细胞(CART)疗法(其依赖于将T细胞重定向到癌细胞(如B细胞恶性肿瘤)上合适的细胞表面分子)的最新研发在利用免疫系统的力量治疗B细胞恶性肿瘤和其他癌症方面显示出有希望的结果。例如，使用对B细胞恶性肿瘤上表达的CD19蛋白具有特异性的CAR
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T细胞进行的最新临床试验表明，在一部分患有晚期癌症的患者中疾病明显消退。这一成功导致FDA批准两种CD19
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CAR T细胞治疗剂(阿基仑赛()和替沙仑赛())以及在用于治疗大B细胞淋巴瘤(LBCL)和B细胞急性淋巴母细胞白血病(B
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ALL)的药物的临床开发中的其他疗法。
[0007]然而，将这种疗法扩展到其他类型的癌症(尤其是实体瘤)带来了一些挑战。例如，与血液恶性细胞(如表达CD19的B细胞，所述CD19几乎是要靶向的肿瘤独有抗原，这允许特异性和因此宽的治疗窗口)形成对照，实体瘤通常驻留在经由淋巴血管循环不易到达的部
位，所述部位被致密的基质和含有免疫抑制性白细胞和细胞因子的肿瘤微环境隔离。细胞毒性T细胞(CTL)迁移的障碍还包括偏好于非靶器官(如肺、肝和脾)、由于异常血管形成引起的膨胀压而导致的淋巴细胞外渗受限、肿瘤脉管系统上粘附分子的表达下调以及吸引淋巴细胞的趋化因子的释放减少。此外，实体瘤中的肿瘤异质性对抗原选择提出了挑战。此外，肿瘤微环境引发了许多耐受性和免疫抑制机制，所述机制可以降低过继细胞疗法的有效性。此外，除了CAR
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T细胞识别和破坏所靶向的细胞的能力外，成功的治疗性T细胞疗法还需要具有增殖、随着时间的推移持续存在以及进一步监测癌细胞逃逸物的能力。据报道，T细胞的可变表型状态(无论是呈无效能、抑制或耗竭状态)对CAR
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T细胞的功效具有多种影响。此外，为了有效性，CAR
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T细胞需要施用后在体内持续存在，例如存活，并维持响应于CAR抗原的增殖能力。
[0008]因此，需要新的组合物和策略来产生用于过继细胞疗法的改进的治疗性细胞。本专利技术公开的方面和实施方案解决了这些需求并提供了其他相关的优点。

技术实现思路

[0009]本文尤其提供了用于预防和/或治疗各种健康状况的新方法和组合物。特别地，本文描述了对例如癌症疗法具有增强的治疗功效的工程化免疫细胞。本公开文本的一些实施方案涉及已经被工程化以表达介体复合物的降低水平的一个或多个亚基的免疫细胞。在一些实施方案中，所述工程化免疫细胞展现出增强的效应子功能。还提供了用于产生具有增强的效应子功能的工程化免疫细胞群体的方法、和含有这种具有增强的效应子功能的工程化免疫细胞群体的药物组合物、以及用于预防和/或治疗有需要的受试者的健康状况的方法和试剂盒。
[0010]在一个方面，本文提供了用于产生具有增强的效应子功能的工程化免疫细胞的方法，所述方法包括将能够降低所述免疫细胞中介体复合物亚基的表达水平的核酸和/或多肽引入所述免疫细胞中。
[0011]所公开的方法的非限制性示例性实施方案可以包括以下特征中的一个或多个。在一些实施方案中，所述介体复合物亚基选自所述介体复合物的中部模块亚基、尾部模块亚基和细胞周期蛋白依赖性激酶8(CDK8)模块亚基。在一些实施方案中，所述介体复合物亚基选自CCNC、CDK8、CDK19、MED12、MED12L、MED13、MED13L、MED19、MED24和MED26。在一些实施方案中，所述介体复合物亚基是中部模块亚基。在一些实施方案中，所述中部模块亚基是MED19或MED26。在一些实施方案中，所述介体复合物亚基是尾部模块亚基。在一些实施方案中，所述尾部模块亚基是MED15、MED16或MED24。在一些实施方案中，所述介体复合物亚基是CDK8模块亚基。在一些实施方案中，所述CDK8模块亚基选自CCNC、CDK18、CDK19、MED12、MED12L和MED13。在一些实施方案中，将所述核酸掺入以下中的一种或多种中：(i)CRISPR/Cas基因组编辑系统的指导RNA(gRNA)、(ii)TALEN(转录激活因子样效应物核酸酶)基因组编辑系统，(iii)用NgAgo(格氏嗜盐碱杆菌(Natronobacterium gregoryi)Argonaute)进行的DNA指导的核酸内切酶基因组编辑、(iv)反义核酸分子、(v)双链RNAi分子、或(vi)能够诱导mRNA的抑制或降解的发夹RNA分子。在一些实施方案中，所述核酸包括与内源性基因组基因座内编码所述介体复合物亚基的靶序列具有足够序列互补性的多核苷酸序列。
[0012]在一些实施方案中，所述免疫细胞是T淋巴细胞、自然杀伤(NK)细胞或自然杀伤T
细胞(NKT)。在一些实施方案中，所述T淋巴细胞是选自以下的CD8+T细胞毒性淋巴细胞：幼稚CD8+T细胞、中枢记忆CD8+T细胞、效应记忆CD8+T细胞、效应CD8+T细胞、CD8+干记忆T细胞、大量CD8+T细胞。在一些实施方案中，所述T淋巴细胞是选自以下的CD4+T辅助性淋巴细胞：幼稚CD4+T细胞、中枢记忆CD4+T细胞、效应记忆CD4+T细胞、效应CD4+T细胞、CD4+干记本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于产生具有增强的效应子功能的工程化免疫细胞的方法，所述方法包括将能够降低所述免疫细胞中介体复合物亚基的表达水平的核酸和/或多肽引入所述免疫细胞中。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述介体复合物亚基选自所述介体复合物的中部模块亚基、尾部模块亚基和细胞周期蛋白依赖性激酶8(CDK8)模块亚基。3.根据权利要求1
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2中任一项所述的方法，其中所述介体复合物亚基选自CCNC、CDK8、CDK19、MED12、MED12L、MED13、MED13L、MED19、MED24和MED26。4.根据权利要求1
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3中任一项所述的方法，其中所述介体复合物亚基是中部模块亚基。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述中部模块亚基是MED19或MED26。6.根据权利要求1
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3中任一项所述的方法，其中所述介体复合物亚基是尾部模块亚基。7.根据权利要求4所述的方法，其中所述尾部模块亚基是MED15、MED16或MED24。8.根据权利要求1
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3中任一项所述的方法，其中所述介体复合物亚基是CDK8模块亚基。9.根据权利要求8所述的方法，其中所述CDK8模块亚基选自CCNC、CDK18、CDK19、MED12、MED12L和MED13L。10.根据权利要求1
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9中任一项所述的方法，其中将所述核酸掺入以下中的一种或多种中：(i)CRISPR/Cas基因组编辑系统的指导RNA(gRNA)、(ii)TALEN(转录激活因子样效应物核酸酶)基因组编辑系统、(iii)用NgAgo(格氏嗜盐碱杆菌Argonaute)进行的DNA指导的核酸内切酶基因组编辑、(iv)反义核酸分子、(v)双链RNAi分子、和(vi)能够诱导mRNA的抑制或降解的发夹RNA分子。11.根据权利要求1
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10中任一项所述的方法，其中所述核酸包含与内源性基因组基因座内编码所述介体复合物亚基的靶序列具有足够序列互补性的多核苷酸序列。12.根据权利要求1
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11中任一项所述的方法，其中所述免疫细胞是T淋巴细胞、自然杀伤(NK)细胞或巨噬细胞。13.根据权利要求12所述的方法，其中所述T淋巴细胞是：选自幼稚CD8+T细胞、中枢记忆CD8+T细胞、效应记忆CD8+T细胞、效应CD8+T细胞、CD8+干记忆T细胞、大量CD8+T细胞的CD8+T细胞毒性淋巴细胞；或选自幼稚CD4+T细胞、中枢记忆CD4+T细胞、效应记忆CD4+T细胞、效应CD4+T细胞、CD4+干记忆T细胞和大量CD4+T细胞的CD4+T辅助性淋巴细胞。14.根据权利要求1
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13中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括将一种或多种重组免疫受体引入所述免疫细胞中。15.根据权利要求14所述的方法，其中所述一种或多种重组免疫受体包括嵌合抗原受体(CAR)和/或T细胞受体(TCR)。16.一种工程化免疫细胞，所述工程化免疫细胞由根据权利要求1
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14中任一项所述的方法产生。17.一种工程化免疫细胞，所述工程化免疫细胞包含能够降低所述免疫细胞中介体复合物亚基的表达水平的核酸和/或多肽。18.根据权利要求17所述的工程化免疫细胞，其中所述介体复合物亚基选自CCNC、CDK8、CDK19、MED12、MED12L、MED13、MED13L、MED19、MED24和MED26。19.根据权利要求16
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18中任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述免疫细胞是在体
外、离体或体内的。20.根据权利要求16
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19中任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述免疫细胞是T淋巴细胞。21.根据权利要求16
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20中任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述免疫细胞是耗竭性免疫细胞或非耗竭性免疫细胞。22.一种细胞培养物，所述细胞培养物包含至少一种根据权利要求16
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21中任一项所述的工程化免疫细胞和培养基。23.一种药物组合物，所述药物组合物包含药学上可接受的赋形剂和：a)根据权利要求16
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22中...

【专利技术属性】
技术研发人员：C，
申请(专利权)人：小利兰，
类型：发明
国别省市：