嵌合抗原受体T细胞及方法技术

对于癌症等增殖性疾病的免疫治疗，需要新的替代方案。这一需要可以通过提供具有胞外结构域的嵌合抗原受体来解决，该胞外结构域包含识别癌细胞相关蛋白Lgr5的结合域；跨膜结构域；以及激活细胞功能的胞内信号结构域。这种CART细胞可用于杀死癌细胞，治疗或预防受试者的癌症。的癌症。的癌症。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】嵌合抗原受体T细胞及方法
[0001]优先权声明
[0002]本申请要求澳大利亚临时申请2020904256的优先权，其全部内容并入本文。


[0003]本专利技术涉及嵌合抗原T细胞受体、表达嵌合抗原T细胞受体的免疫细胞、包含嵌合抗原T
‑
细胞受体的药物组合物、使用嵌合抗原
‑
T细胞受体和携带所述T细胞受体的T细胞的方法，以用于预防和/或治疗诸如癌症的增殖性疾病。

技术介绍

[0004]以下对本专利技术背景的讨论旨在促进对本专利技术的理解。然而，应当理解的是，该讨论并不是承认或承认所提及的任何材料在本说明书的任何一项权利要求的优先权日是公开的、已知的或公知常识的一部分。
[0005]免疫系统通过防止一系列机会性微生物感染和防止异常细胞生长(如肿瘤细胞或肿瘤前细胞)来主动维持受试者身体的完整性。由于免疫系统的特异性和有效性，已经有许多尝试操纵适应性免疫系统来特异性靶向肿瘤细胞。这些技术统称为免疫肿瘤学。
[0006]免疫肿瘤学包括许多不同的技术，包括抗体的使用、癌症抗原疫苗接种、细胞因子治疗和过继性T细胞转移。也许最常用的免疫肿瘤学形式是开发针对肿瘤相关抗原的特异性单克隆抗体。抗体表现出一系列特征，使其成为免疫肿瘤学的绝佳选择。在一个个体(人)内，估计可以产生至多10
11
至10
12
个独特的抗体，每个抗体具有不同的抗原特异性和亲和力。因此，几乎可以产生针对任何表面抗原的抗体。此外，使用永生化杂交瘤细胞系可以容易地在体外重组产生抗体。这意味着它们可以大量生产。此外，抗体可以配制(例如冷冻干燥)以在长时间内保持稳定，从而允许容易的储存和分发。最后，抗体的剂量可以很容易地控制，以提高反应性，或者在出现副作用时减少副作用。
[0007]抗体可用于通过抗体依赖性细胞毒性(ADCC)直接靶向细胞杀伤，其中抗体与靶标的结合指导抗体结合细胞的裂解。或者，抗体可用于抑制癌细胞上表达的受体和信号分子的功能。
[0008]由于上述特性，抗体在免疫肿瘤学中越来越受欢迎。然而，它们确实有一些局限性。例如，抗体的大小降低了它们进入实体瘤内细胞的能力，而实体瘤内的细胞通常血管化较差。此外，癌细胞会定期进行适应，以表达低水平或无目标抗原。因此，抗体通常会延长癌症感染者的生存期，而不是治愈患者。
[0009]最近，科学家和医生开始探索利用适应性免疫系统的细胞臂(cellular arm)来治疗癌症。例如，被称为肿瘤浸润白细胞(TIL)的T细胞已经从切除的肿瘤中分离出来。这些TILS可以基于对个体肿瘤相关抗原的反应性选择性地扩增，并给予患者。在某些情况下，当给予额外治疗时，这些TIL会导致患者完全缓解(NIH(2018)“New approach to immunotherapy leads to complete response in breast cancer patient unresponsive to other treatments”)。当其他一线治疗失败时，细胞治疗的成功可能归
因于T细胞主动浸润肿瘤并诱导和协调免疫系统其他部分反应的能力。
[0010]然而，这些细胞治疗的成功率变化很大，治疗在很大程度上依赖于单个肿瘤独特抗原特性的表征，以及对少数与这些独特抗原反应的TIL的鉴定。这导致了极高的成本，产生TIL的时间框架很长，在某些情况下，无法分离和扩增适当的TIL。
[0011]因此，对于癌症等增殖性疾病的免疫治疗，需要新的替代方案。

技术实现思路

[0012]本专利技术部分是基于识别肿瘤相关抗原Lgr5的嵌合抗原受体(CAR)T细胞的开发。
[0013]富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5(Lgr5)是一种受体，当与同源配体结合时，激活Wnt信号传导。Lgr5已被确定为癌症干细胞的标记物，其信号增强与癌症的发展和复发有关。
[0014]因此，本专利技术提供了一种嵌合抗原受体，包含：胞外结构域，其包括识别Lgr5的结合域；跨膜结构域；以及激活细胞功能的胞内信号结构域，或由它们组成。
[0015]嵌合抗原受体(CAR)是人工构建的蛋白质，在细胞表面表达后可诱导抗原特异性细胞反应。CAR利用胞内部分，当这些部分被激活时，会在宿主胞内引起信号级联。嵌合抗原受体还包括胞外结构域，所述胞外结构域具有决定CAR抗原特异性的结合域。因此，CAR可以被设计为模拟抗原受体(如T细胞受体)的功能，但具有可定制的抗原特异性和可定制的胞内信号传导。然而，与T细胞受体不同，CAR可以被设计为独立于主要组织相容性(MHC)分子(如人类白细胞抗原(HLA))而被激活，并且根据胞内部分的设计，独立于额外或外源性共刺激。
[0016]因此，当在适当的宿主细胞如T细胞中表达时，本专利技术的CAR可以诱导细胞活性，这可以导致表达Lgr5的细胞被杀死。因此，本专利技术的CAR可用于杀死或诱导杀死表达Lgr5的细胞。
[0017]Lgr5包括螺旋管(solenoid)蛋白结构域，其包含17个富含亮氨酸的重复序列，所述重复序列形成具有凸表面和凹配体结合表面的马蹄形。在一些实施方案中，CAR的结合域识别Lgr5的凸面上的表位。在一些实施方案中，表位在Lgr5的富含亮氨酸的重复序列6至9内。
[0018]包括结合Lgr5结合部分(例如CDR)的抗体已经生成。其中包括18G7H6A3(BNC101)、18G7H6A1和18G7.1。因此，在一些实施方案中，结合域包括选自18G7H6A3、18G7H6A1或18G7.1的抗体的至少一个结合部分。
[0019]如本领域所理解的，抗体包括由可变重(VH)链和可变轻(VL)链定义的可变区。这些可变区中的每一个都包括由三个互补决定区(CDR)间隔的四个框架区，从而产生总共六个CDR。然而，抗体的单链可以特异性地结合表位。主要可变重链可用于形成单结构域抗体(sdAb)。此外，可以产生单链可变片段(scFv)融合蛋白，其中可变重链和轻链通过融合肽(融合接头)融合在一起。或者，已知为Fab(片段抗原结合)的抗体的结合片段可以通过抗体的酶促消化产生，以从Fab片段中分离Fc片段。消化可以在铰链区从抗体产生两个Fab，或者在铰链下方产生F(ab)2，所述F(ab)2包括通过抗体二硫键连接的抗体的两个Fab区。
[0020]因此，在一些实施方案中，本专利技术的CAR的结合域是单结构域抗体，所述抗体包括与结合Lgr5的抗体的VH或VL链相同的序列，或与结合Lgr5的抗体Fab片段相同的序列，或与
包含结合Lgr5的抗体的VH和VL区的单链可变片段(scFv)相同的序列。
[0021]在一些实施方案中，CAR的结合域至少包括结合Lgr5的抗体的可变重链。然而，单结构域抗体形式的可变轻链也可以特异性结合抗原。因此，在一些实施方案中，结合域至少包括结合Lgr5的抗体的可变轻链。
[0022]如所公开的，每个可变链包括三个CDR。因此，在一些实施方案中，CAR的结合域包括：重链C本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种嵌合抗原受体，包含：胞外结构域，其包括识别Lgr5的结合域；跨膜结构域；和激活细胞功能的胞内信号结构域。2.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中所述结合域识别Lgr5凸表面上的表位。3.根据权利要求1或权利要求2所述的嵌合体抗原受体，其中所述结合区识别Lgr5的富含亮氨酸重复序列6至9位内的表位。4.根据权利要求1至3中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述结合域包括结合Lgr5的抗体的可变重链或可变重链的功能变体。5.根据权利要求1至4中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述结合域包括结合Lgr5的抗体的可变轻链或所述可变轻链的功能变体。6.根据权利要求1至5中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述结合域包括抗体18G7.1、18G7H6A1或18G7H6A3的结合部分或其功能变体。7.根据权利要求1至6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述结合域包含：重链CDR1，其具有SEQ ID No.37中所示氨基酸序列或具有SEQ IDNo.37中所示的具有至多2个氨基酸修饰的氨基酸序列，重链CDR2，其具有SEQ ID No.38中所示氨基酸序列或带有SEQ IDNo.38中所示的具有至多2个氨基酸修饰的氨基酸序列，和重链CDR3，其具有SEQ ID No.39中所示氨基酸序列，或具有SEQ IDNo.39中所示的具有至多2个氨基酸修饰的氨基酸序列。8.根据权利要求1至7中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述结合域包括：轻链CDR1，其具有SEQ ID No.40所示氨基酸序列或具有SEQ IDNo.40所示的具有至多2个氨基酸修饰的氨基酸序列，轻链CDR1，其具有SEQ ID No.41所示氨基酸序列或具有SEQ IDNo.41所示的具有至多2个氨基酸修饰的氨基酸序列，和轻链CDR3，其具有SEQ ID No.42中所示氨基酸序列或具有SEQ IDNo.42中所示的具有至多2个氨基酸修饰的氨基酸序列。9.根据权利要求1至8中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述结合域包含与单结构域抗体(sdAb)相同的序列，所述sdAb包含与结合Lgr5的抗体的VH或VL链相同的序列，或包含与衍生自结合Lgr5的抗体的抗原结合片段(Fab)相同的序列，或包含与单链可变片段(scFv)相同的序列，所述scFv包含结合Lgr5的抗体的VH和VL区。10.根据权利要求1至6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述结合域包括与可变轻(VL)链的N端连接的可变重(VH)链的C端，其中所述VH链包括：具有SEQ ID No.37序列的CDR1、具有SEQ IDNo.38序列的CDR2和具有SEQ ID No.39序列的CDR3，VL链包括：具有SEQ ID No.40序列的CDR1、具有SEQ ID No.41序列的CDR2和具有SEQ ID No.42序列的CDR3，并且其中每个CDR可以具有至多2个氨基酸修饰。11.根据权利要求1至6中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述单链可变片段包括连
接到所述可变轻(VH)链的N端的所述可变重(VL)链C端，其中所述VL链包括：具有SEQ ID No.40序列的CDR1、具有SEQ IDNo.41序列的CDR2和具有SEQ ID No.42序列的CDR3，VH链包括：具有SEQ ID No.37序列的CDR1、具有SEQ ID No.38序列的CDR2和具有SEQ ID No.39序列的CDR3，并且其中每个CDR可以具有至多2个氨基酸修饰。12.根据权利要求1至3中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述结合域包含SEQ ID No.49和/或SEQ ID No.50，或其与SEQ ID No.49或50具有至少90％序列同一性的变体。13.根据权利要求1至3中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述结合域包含SEQ ID No.53或SEQ ID No.54，或其与SEQ ID No.53或54具有至少90％的序列同一性的变体。14.根据权利要求1至13中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述胞外结构域包含连接所述结合域和所述跨膜结构域的接头结构域。15.根据权利要求14所述的嵌合抗原受体，其中所述接头结构域的长度为至少12个氨基酸，或长度为至少约12个氨基酸。16.根据权利要求14所述的嵌合抗原受体，其中所述接头结构域的长度为至少119个氨基酸，或长度为至少约119个氨基酸。17.根据权利要求14所述的嵌合抗原受体，其中所述接头结构域的长度为至少229个氨基酸，或长度为至少约229个氨基酸。18.根据权利要求15所述的嵌合抗原受体，其中所述接头结构域的长度为至多119个氨基酸，或至多约119个氨基酸。19.根据权利要求16所述的嵌合抗原受体，其中所述接头结构域的长度为至多229个氨基酸，或至多约229个氨基酸。20.根据权利要求14至19所述的嵌合抗原受体，其中所述接头结构域包含与IgG4铰链的序列相同的氨基酸序列，或包含与IgG4铰链具有至多2个氨基酸修饰的修饰版本相同的序列。21.根据权利要求14所述的嵌合抗原受体，其中所述接头结构域包含选自SEQ ID No.55、SEQ ID No.56或SEQ ID No.57的序列或其功能变体，或由它们组成。22.根据权利要求11所述的嵌合抗原受体，其中所述胞外结构域包含长度大于12个氨基酸、长度至少119个氨基酸、长度大于119个氨基酸或长度至少229个氨基酸的接头，并且所述接头将所述结合域连接至所述跨膜结构域，并且其中所述接头结构域连接至VH结构域的C端。23.根据权利要求1至22中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述胞内信号结构域包含与具有与活化受体的信号传导部分或其功能变体相同的氨基酸序列的部分。24.根据权利要求23所述的嵌合抗原受体，其中所述活化受体是所述CD3共受体复合物的成员。25.根据权利要求23所述的嵌合抗原受体，其中所述活化受体是CD3
‑
ζ(CD3 zeta)。26.根据权利要求1
‑
25中任一项所述的嵌合抗原受体，其中所述信号结构域包含与具有与共刺激受体的信号传导部分相同的氨基酸序列的部分。27.根据权利要求26所述的嵌合抗原受体，其中所述共刺激受体选自CD27、CD28、CD30、
CD40、DAP10、OX40、4

【专利技术属性】
技术研发人员：贾斯廷，
申请(专利权)人：卡丽娜生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：