一种樱桃花变叶植原体快速检测方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体而言，提供了一种樱桃花变叶植原体快速检测方法，其利用纤维素滤纸条快速提取植物样品DNA的方法与环介导等温扩增技术相结合，设计两对特异引物对特异序列区域进行识别，保证了LAMP扩增的高效性；LAMP只需在恒温条件下扩增，反应速度即可大大的提高；本发明专利技术成功建立不依赖PCR仪等设备的检测体系，实现户外（如田间）的快速鉴定，此方法检测特异性强，可快速获得检测结果，具有快速、高效、灵敏、结果可视化等优点。结果可视化等优点。

【技术实现步骤摘要】
一种樱桃花变叶植原体快速检测方法


[0001]本专利技术涉及生物
，具体而言，涉及一种樱桃花变叶植原体快速检测方法。

技术介绍

[0002]植原体(Phytoplasma)是一种没有细胞壁的原核细胞，只存在于植物韧皮部位和一些半翅目昆虫相关的唾液腺细胞中；寄主范围广，危害症状多样，严重威胁农林业生产及经济的发展。世界各地已报道植原体可引起1000余种各类植物系统性病害，涵盖农作物、园艺、花卉、果树和林木等。该病害传播性强、症状明显、危害较大，可不同程度引起植物生长发育异常或变异，甚至造成植株死亡。
[0003]樱桃花变叶植原体病害就是其中一种，近年来该病害已经成为威胁樱桃产业发展最为重要的病害之一，主要引起樱桃花变叶及花器官、叶片、果实的生长发育异常和变异，并最终导致植株2~5a（年）内迅速死亡，对我国乃至世界樱桃产业造成了非常重大的损失。早期的检测，及时发现感病植株中植原体的存在，为进一步开展樱桃植原体病害研究与防控具有重要意义，因此建立和应用先进的病原检测技术至关重要。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种樱桃花变叶植原体快速检测方法，其特征在于，检测步骤如下：S1、提取DNA：所述DNA为樱桃花变叶病株组织总DNA；S2、LAMP扩增：以步骤S1提取的樱桃总DNA为反应模板，并配置LAMP反应体系，然后对反应模板进行LAMP扩增，最后直接观测反应管中的颜色变化，判断樱桃花是否携带植原体病原菌；其中，用于检测樱桃花变叶植原体的LAMP引物包括外侧引物对和内侧引物对，所述外侧引物对命名为TUF
‑
F3、TUF
‑
B3；所述内侧引物对命名为TUF
‑
FIP、TUF
‑
BIP；所述外侧引物对和内侧引物对的序列如下：TUF
‑
F3:5
’‑
GGTTTTGATGGTGATAACATACC
‑3’
；TUF
‑
B3:5
’‑
CTTCTTCAGAAAGTTTTATTTGTCC
‑3’
；TUF
‑
FIP:5
’‑
GGTCCTCAACATATGTGTCCAAACTGCTTTACGTGTTGAAGGTA
‑3’
；TUF
‑
BIP:5
’‑
TGCCTATCGAAGGCGTTATTAACTCTTTCAACACGTCCTGTA
‑3’
。2.根据权利要求1所述的樱桃花变叶植原体快速检测方法，其特征在于，步骤S1包括：取樱桃组织加入到提取液中研磨，得提取组织液；然后将试纸条浸入提取组织液中吸附DNA，最后将试纸条漂洗、洗脱后，备用。3.根据权利要求2所述的樱桃花变叶...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋常美，朱淑珠，王林，杨媛，
申请(专利权)人：贵阳学院，
类型：发明
国别省市：