补体C3抗原结合蛋白制造技术

本发明专利技术提供对补体C3及C3b具有特异性的抗原结合蛋白。还提供治疗补体C3介导的疾病及病症的方法；抑制补体经典途径(CP)、凝集素途径(LP)及/或替代途径(AP)的活性的方法；及抑制脉络膜局部补体C3的活性的方法。脉络膜局部补体C3的活性的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】补体C3抗原结合蛋白
专利

[0001]本专利技术涉及靶向补体C3的抗原结合蛋白及治疗补体C3介导的疾病的方法。
[0002]专利技术背景
[0003]在治疗某些眼部疾病及病症中的主要挑战是将治疗性分子递送至视网膜深层。递送受许多因素阻碍，包括眼睛内的许多物理边界。这些边界包括角膜及结膜上皮、血液
‑
房水障壁(BAB)及血液
‑
视网膜障壁(BRB)，诸如毛细管内皮细胞(内部BRB)及视网膜色素上皮细胞(RPE细胞，外部BRB)(参见例如Jiang等人,Int J Ophthalmol.2018；11(6):1038
‑
1044)。对视网膜进行的递送尤其具有重要性的眼部疾病为补体介导的疾病，诸如地图状萎缩(GA)。
[0004]地图状萎缩(GA)为年龄相关的黄斑变性(AMD)的晚期形式，其特征在于黄斑中的视网膜色素上皮细胞及光感受器受损。一旦GA涉及中央窝，则发生不可逆的视力损失。甚至在视力受影响之前，患有GA的早期阶段的患者通常经历视觉功能缺陷。
[0005]尚未完全知晓地图状萎缩的潜在病理生理学；然而，认为补体活性失调为一种促成因素。已证实与对照物相比，GA患者的玻璃体样品、布鲁赫膜(Bruch
’
s membrane)及脉络膜的其他部分中的若干补体活化产物(包括C3a、C5a、C5b
‑
9及补体因子H(CFH))的水平升高。此外，已报导，在GA中，补体抑制剂(如CD59，一种攻膜复合物(MAC)形成的膜结合抑制剂)及膜辅因子蛋白质(MCP，一种对补体因子I(CFI)具有辅因子活性的膜结合补体调节剂)的水平降低。
[0006]目前，尚无经批准的用于GA的治疗。已研究多种以补体途径为目标的研究性方法，但皆未获批准或被证实有效。此类方法的一些实例包括依库丽单抗(eculizumab)/SOLIRIS(Alexion)、LFG
‑
316(Novartis/MorphoSys)、ARC
‑
1905(Ophthotech)、POT
‑
4(AL
‑
78898A；Alcon)及兰帕珠单抗(lampalizumab)(FCFD45142)。
[0007]最近，APL
‑
2II期临床试验(临床试验NCT02503332，“地图状萎缩患者中的APL
‑
2疗法的研究(FILLY”))的结果进一步暗示GA的发病机制中的补体途径且证实经由补体抑制来减少GA恶化的积极治疗作用。这些结果还表明，以C3(其为所有补体途径的汇聚点；参见图1)为中心的补体级联的APL
‑
2抑制可具有比引起补体途径的部分抑制的抑制剂更有效地治疗GA的潜力。然而，通过APL
‑
2实现的GA中病变生长的减少仍是少量的。APL
‑
2具有可能限制其有效性的特征。APL
‑
2，一种环状十三肽坎普他汀(compstatin)(补体组分C3的抑制剂)的聚乙二醇化衍生物，具有350kDa的较大分子量当量及约7.8nm的流体力学半径，使得其难以深入地穿透至视网膜中。可能由于3.5mM的低浓度，APL
‑
2仅具有1个月的有效期。APL
‑
2也是聚乙二醇化分子，由此增加其黏度且可能使其难以注射至眼睛中。因此，需要更有效地减少GA恶化。
[0008]GA治疗中的一个主要挑战为所观察到的在视网膜较深层中发生的补体活性失调。我们假设可能需要对疾病相关视网膜组织(即，视网膜色素上皮细胞(RPE)、布鲁赫膜及脉络膜的其他部分)的更好穿透性以实现更大程度地减少GA中的病变生长。为此，小抗体片段与其他生物制剂及抗体相比具有若干优点。小抗体形式可实现：1)对相关视网膜组织的更
好的眼内穿透性；及2)以每mg或mL计，经由玻璃体内注射递送更多的药物。
[0009]专利技术概述
[0010]本专利技术提供对补体C3具有特异性的抗原结合蛋白。
[0011]在一个方面中，本专利技术提供结合补体C3上的表位的抗原结合蛋白或其片段，其中该抗原结合蛋白或其片段能够抑制补体活化途径，包括经典途径(CP)、凝集素途径(LP)及替代途径(AP)。
[0012]在某些实施方案中，该抗原结合蛋白或其片段能够结合补体C3及C3b。
[0013]在某些实施方案中，该抗原结合蛋白或其片段能够结合补体C3上的表位，其中此类结合阻止C3转化酶的形成。
[0014]在某些实施方案中，该抗原结合蛋白或其片段能够与一或多种抗原结合蛋白(包括M0122、M0123、M0124、M0228及M0251)竞争。
[0015]在某些实施方案中，该抗原结合蛋白或其片段包含单链可变片段(scFv)、Fab片段、Fab
’
片段、Fv片段、双功能抗体、小抗体模拟物或单域抗体，诸如sdAb、sdFv、纳米抗体、V
‑
Nar或VHH。在优选的实施方案中，该抗原结合蛋白或其片段包含scFv或VHH。
[0016]在某些实施方案中，该抗原结合蛋白或其片段包含与由以下组成的群中的序列具有至少80％同一性的CDR
‑
H3：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:15及SEQ ID NO:21。
[0017]在某些实施方案中，该抗原结合蛋白或其片段包含与由以下组成的群中的序列具有至少80％同一性的CDR
‑
H3：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:15及SEQ ID NO:21。
[0018]在某些实施方案中，该抗原结合蛋白或其片段包含可变重链(VH)及可变轻链(VL)，其中该VH包含选自由SEQ ID NO:1、4、7、13及19组成的组的CDR
‑
H1序列；选自由SEQ ID NO:2、5、8、14及20组成的组的CDR
‑
H2序列；选自由SEQ ID NO:3、6、9、15及21组成的组的CDR
‑
H3序列；且其中该VL包含选自由SEQ ID NO:10、16及22组成的组的CDR
‑
L1序列；选自由SEQ ID NO:11、17及23组成的组的CDR
‑
L2序列及选自由SEQ ID NO:12、18及24组成的组的CDR
‑
L3序列。
[0019]在某些实施方案中，该VH与由SEQ ID NO:25、26、27、29及31组成的组的序列具有至少80％相似性，及/或该VL与由SEQ ID NO:28、30及32组成的组的序列至少80％相似性。
[0020]在某些实施方案中，该VH与由SEQ ID NO:25、26、27、29及31组成的组的序列具有至少80％同一性，及/或该VL与由SEQ ID N本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种结合补体C3上的表位的抗原结合蛋白或其片段，其中该抗原结合蛋白或其片段能够抑制补体活化途径，包括经典途径(CP)、凝集素途径(LP)及替代途径(AP)。2.如权利要求1的抗原结合蛋白或其片段，其能够结合补体C3及C3b。3.如权利要求1的抗原结合蛋白或其片段，其能够结合补体C3上的表位，其中此类结合阻止C3转化酶的形成。4.如权利要求1至3中任一项的抗原结合蛋白或其片段，其能够穿透布鲁赫膜(Bruch's membrane)。5.如权利要求1至4中任一项的抗原结合蛋白或其片段，其能够与一或多种抗原结合蛋白竞争，所述一或多种抗原结合蛋白包括M0122、M0123、M0124、M0228及M0251。6.如权利要求1至5中任一项的抗原结合蛋白或其片段，其包含单链可变片段(scFv)、Fab片段、Fab'片段、Fv片段、双功能抗体(diabody)、小型抗体模拟物，或单域抗体，诸如sdAb、sdFv、纳米抗体、V
‑
Nar或VHH。7.如权利要求1至6中任一项的抗原结合蛋白或其片段，其包含与由以下组成的组的序列具有至少80％同一性的CDR
‑
H3：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:15及SEQ ID NO:21。8.如权利要求1至7中任一项的抗原结合蛋白或其片段，其包含可变重链(VH)及可变轻链(VL)，其中该VH包含选自由SEQ ID NO:1、4、7、13及19组成的组的CDR
‑
H1序列；选自由SEQ ID NO:2、5、8、14及20组成的组的CDR
‑
H2序列；选自由SEQ ID NO:3、6、9、15及21组成的组的CDR
‑
H3序列；及其中该VL包含选自由SEQ ID NO:10、16及22组成的组的CDR
‑
L1序列；选自由SEQ ID NO:11、17及23组成的组的CDR
‑
L2序列；及选自由SEQ ID NO:12、18及24组成的组的CDR
‑
L3序列。9.如权利要求1至8中任一项的抗原结合蛋白或其片段，其中该VH与由SEQ ID NO:25、26、27、29及31组成的组的序列具有至少80％同一性，及/或该VL与由SEQ ID NO:28、30及32组成的组的序列具有至少80％同一性。10.如权利要求1至9中任一项的抗原结合蛋白或其片段，其包含VH及VL，其中该VH包含SEQ ID NO:7的CDR
‑
H1序列、SEQ ID NO:8的CDR
‑
H2序列及SEQ ID NO:9的CDR
‑
H3序列；及其中该VL包含SEQ ID NO:10的CDR
‑
L1序列、SEQ ID NO:11的CDR
‑
L2序列及SEQ ID NO:12的CDR
‑
L3序列。11.如权利要求10的抗原结合蛋白或其片段，其中该VH包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列且该VL包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列。12.如权利要求1至9中任一项的抗原结合蛋白或其片段，其包含VH及VL，其中该VH包含SEQ ID NO:13的CDR
‑
H1序列、SEQ ID NO:14的CDR
‑
H2序列及SEQ ID NO:15的CDR
‑
H3序列；及其中该VL包含SEQ ID NO:16的CDR
‑
L1序列、SEQ ID NO:17的CDR
‑
L2序列及SEQ ID NO:18的CDR
‑
L3序列。13.如权利要求12的抗原结合蛋白或其片段，其中该VH包含SEQ ID NO:29的氨基酸序
列且该VL包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列。14.如权利要求1至9中任一项的抗原结合蛋白或其片段，其包含VH及VL，其中该VH包含SEQ ID NO:19的CDR
‑
H1序列、SEQ ID NO:20的CDR
‑
H2序列及SEQ ID NO:21的CDR
‑
H3序列；及其中该VL包含SEQ ID NO:22的CDR
‑
L1序列、SEQ ID NO:23的CDR
‑
L2序列及SEQ ID NO:24的CDR
‑
L3序列。15.如权利要求14的抗原结合蛋白或其片段，其中该VH包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列且该VL包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列。16.如权利要求1至9中任一项的抗原结合蛋白或其片段，其包含VHH域，其中该VHH域包含SEQ ID NO:1的CDR
‑
H1序列、SEQ ID NO:2的CDR
‑
H2序列及SEQ ID NO:3的CDR
‑
H3序列。17.如权利要求16的抗原结合蛋白或其片段，其中该VHH域包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列。18.如权利要求1至9中任一项的抗原结合蛋白或其片段，其包含VHH域，其中该VHH域包含SEQ ID NO:4的CDR
‑
H1序列、SEQ ID NO:5的CDR
‑
H2序列及SEQ ID NO:6的CDR
‑
H3序列。19.如权利要求18的抗原结合蛋白或其片段，其中该VHH域包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列。20.如权利要求1至19中任一项的抗原结合蛋白或其片段，其对C3及C3b的结合亲和力为至少约10
‑8M。21.如权利要求1至19中任一项的抗原结合蛋白或其片段，其对C3及C3b的结合亲和力为约10
‑9M至约10
‑
14
M。22.如权利要求1至19中任一项的抗原结合蛋白或其片段，其对C3及C3b的结合亲和力为约10
‑
10
M至约10
‑
12
M。23.如权利要求1至19中任一项的抗原结合蛋白或其片段，其对C3及C3b具有大致等效的结合亲和力。24.如权利要求1至19中任一项的抗原结合蛋白或其片段，其中对C3的结合亲和力在对C3b的结合亲和力的十分的一以内。25.如权利要求1至19中任一项的抗原结合蛋白或其片段，其对C3a、iC3b、C4、C4b、C5及/或C5b的结合亲和力为约10
‑4M或更弱。26.如权利要求1至19中任一项的抗原结合蛋白或其片段，相较于对C3及C3b的结合亲和力，其对C3a、iC3b、C4、C4b、C5及/或C5b的结合亲和力较弱。27.如权利要求1至19中任一项的抗原结合蛋白或其片段，其对C3a、iC3b、C4、C4b、C5及/或C5b没有结合亲和力。28.如权利要求1至27中任一项的抗原结合蛋白或其片段，其能够抑制由以下组成的组的任一者的活性：CP、LP及AP补体途径。29.如权利要求1至28中任一项的抗原结合蛋白或其片段，其能够抑制CP、LP及/或AP补体途径的活性至少约80％、至少约85％、至少约90％或至少约95％。30.如权利要求1至29中任一项的抗原结合蛋白或其片段，其能够大致等效地抑制CP、
LP及AP补体途径的活性。31.如权利要求30的抗原结合蛋白或其片段，其中抑制CP、LP及AP补体途径的活性至少约80％、至少约8...

【专利技术属性】
技术研发人员：L，
申请(专利权)人：CDR生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：