用于治疗由失调的血浆激肽释放酶介导的疾病的抗体的腺相关病毒载体递送制造技术

本公开提供了尤其是一种重组腺相关病毒(rAAV)载体，其包含编码抑制血浆激肽释放酶的蛋白水解活性的剂的经密码子优化的核苷酸序列。本公开还提供了一种编码抗血浆激肽释放酶抗体重链和抗血浆激肽释放酶抗体轻链的重组腺相关病毒(rAAV)载体。腺相关病毒(rAAV)载体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗由失调的血浆激肽释放酶介导的疾病的抗体的腺相关病毒载体递送
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年12月16日提交的美国临时申请第63/126,300号的优先权和权益，其内容据此通过引用方式以其整体并入。
[0003]序列表
[0004]本申请含有序列表，所述序列表已经以ASCII格式以电子方式提交并且特此通过引用整体并入。所述ASCII副本创建于2021年12月13日，命名为SHR
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2020US1_SL.txt，大小为63,250字节。

技术介绍

[0005]失调的血浆激肽释放酶活性可能导致促炎和血管活性肽缓激肽的过量产生。此种疾病的实例是遗传性血管性水肿(HAE)，这是一种罕见但可能危及生命的病症，其特征是表现为皮下和粘膜下血管性水肿的不可预测且反复的血管扩张发作。在一些情况下，HAE与C1抑制剂的低血浆水平相关(I型)，而在其他情况下，该蛋白质以正常或升高的量循环，但它是功能障碍(II型)。C1抑制剂是血浆激肽释放酶活性的主要调节剂。HAE发作的症状包括自发发生或由轻度外伤引发的面部、口腔和/或气道肿胀。影响气道的水肿发作可能是致命的。除了急性炎症发作外，过度的血浆激肽释放酶活性还与慢性疾患(诸如包括红斑狼疮在内的自身免疫性疾病)相关联。
[0006]已经考虑和开发了各种用于治疗C1
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INH缺乏或功能障碍的策略，包括例如抑制接触系统的成员。例如，拉那利尤单抗(lanadelumab)是血浆激肽释放酶的全人源化单克隆抗体抑制剂，该抑制剂已被批准用于治疗HAE。
[0007]使用在体内产生包括抗体在内的蛋白质的载体对于疾病的治疗是理想的，但受到包括递送给受试者后抗体产生不足在内的各种因素的限制。

技术实现思路

[0008]本专利技术提供了编码抗血浆激肽释放酶抗体的有效且稳健的重组腺相关病毒(rAAV)载体。本专利技术部分基于这样的令人惊讶的发现，即包含编码抗血浆激肽释放酶抗体重链和抗血浆激肽释放酶抗体轻链的经密码子优化的核苷酸序列的特异性重组AAV载体导致在体内产生高水平的功能性抗血浆激肽释放酶抗体。在一些实施方案中，对载体构建体进行密码子优化以减少CpG含量和重复序列。在一些实施方案中，对载体构建体进行工程改造以将GC含量百分比标准化为在天然的、未修饰的AAV8中发现的GC含量百分比。在一些实施方案中，评估该载体构建体中的每个载体构建体的CpG含量、密码子适应指数(CAI)、密码子上下文(CC)、GC含量和重复基序。因此，在一些实施方案中，评估载体构建体的CpG含量。在一些实施方案中，评估载体构建体的密码子适应指数(CAI)。在一些实施方案中，评估载体构建体的GC含量。在一些实施方案中，评估载体构建体的重复基序的量。具体而言，rAAV导致在体内稳健且持续地产生抗血浆激肽释放酶mAb，并且载体介导的表达的抗血浆激肽
释放酶抗体保留了与由传统重组表达方法(例如，CHO细胞)产生的抗体蛋白相当的靶向活性。在本专利技术之前，通过施用携带所需有效载荷的rAAV载体递送抗血浆激肽释放酶抗体导致未知量的活性抗体产生。因此，在本专利技术之前，使用编码抗血浆激肽释放酶的rAAV载体治疗C1
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INH缺乏或病症(包括例如遗传性血管性水肿)是不可预测或不可行的。
[0009]在一些方面，提供了一种包含经密码子优化的核苷酸序列的重组腺相关病毒(rAAV)载体，该rAAV载体编码包含抗血浆激肽释放酶抗体重链和抗血浆激肽释放酶抗体轻链的全长抗体，并且其中经密码子优化的核苷酸序列与SEQ ID NO:23
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36中的任一者具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或大于95％的同一性。因此，在一些实施方案中，经密码子优化的核苷酸序列与SEQ ID NO:23
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36中的任一者具有至少约75％的同一性。在一些实施方案中，经密码子优化的核苷酸序列与SEQ ID NO:23
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36中的任一者具有至少约80％的同一性。在一些实施方案中，经密码子优化的核苷酸序列与SEQ ID NO:23
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36中的任一者具有至少约85％的同一性。在一些实施方案中，经密码子优化的核苷酸序列与SEQ ID NO:23
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36中的任一者具有至少约90％的同一性。在一些实施方案中，经密码子优化的核苷酸序列与SEQ ID NO:23
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36中的任一者具有至少约95％的同一性。在一些实施方案中，经密码子优化的核苷酸序列与SEQ ID NO:23
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36中的任一者具有大于95％的同一性。在一些实施方案中，经密码子优化的核苷酸序列与SEQ ID NO:23
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36中的任一者是同一的。SEQ ID No:23
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36包括SEQ ID No:23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35或36中的任一者。SEQ ID NO:23
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36中的每一者均列于表3中。
[0010]在一些实施方案中，经密码子优化的核苷酸序列选自SEQ ID NO:23
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36中的任一者。因此，在一些实施方案中，经密码子优化的序列是SEQ ID NO:23。在一些实施方案中，经密码子优化的序列是SEQ ID NO:24。在一些实施方案中，经密码子优化的序列是SEQ ID NO:25。在一些实施方案中，经密码子优化的序列是SEQ ID NO:26。在一些实施方案中，经密码子优化的序列是SEQ ID NO:27。在一些实施方案中，经密码子优化的序列是SEQ ID NO:28。在一些实施方案中，经密码子优化的序列是SEQ ID NO:29。在一些实施方案中，经密码子优化的序列是SEQ ID NO:30。在一些实施方案中，经密码子优化的序列是SEQ ID NO:31。在一些实施方案中，经密码子优化的序列是SEQ ID NO:32。在一些实施方案中，经密码子优化的序列是SEQ ID NO:33。在一些实施方案中，经密码子优化的序列是SEQ ID NO:34。在一些实施方案中，经密码子优化的序列是SEQ ID NO:35。在一些实施方案中，经密码子优化的序列是SEQ ID NO:36。
[0011]在一些实施方案中，经密码子优化的核苷酸序列具有少于约50个CpG位点、少于约40个CpG位点、少于约35个CpG位点、少于约30个CpG位点、少于约25个CpG位点、少于约20个CpG位点、少于约15个CpG位点或少于约10个CpG位点的CpG含量。因此，在一些实施方案中，经密码子优化的核苷酸序列具有少于约50个CpG位点的CpG含量。在一些实施方案中，经密码子优化的核苷酸序列具有少于约45个CpG位点的CpG含量。在一些实施方案中，经密码子优化的核苷酸序列具有少于约40个CpG位点的CpG含量。在一些实施方案中，经密码子优化的核苷酸序列具有少于约35个CpG位点的CpG含量。在一些实施方案本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种包含经密码子优化的核苷酸序列的重组腺相关病毒(rAAV)载体，所述rAAV载体编码包含抗血浆激肽释放酶抗体重链和抗血浆激肽释放酶抗体轻链的全长抗体，并且其中所述经密码子优化的核苷酸序列与SEQ ID NO:23
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36中的任一者具有至少约75％、80％、85％、90％、95％或大于95％的同一性。2.如权利要求1所述的rAAV载体，其中所述经密码子优化的核苷酸序列选自SEQ ID NO:23
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36中的任一者。3.如权利要求1所述的rAAV载体，其中所述经密码子优化的核苷酸序列具有少于约50个CpG位点、少于约40个CpG位点、少于约35个CpG位点、少于约30个CpG位点、少于约25个CpG位点、少于约20个CpG位点、少于约15个CpG位点或少于约10个CpG位点的CpG含量。4.如权利要求2所述的rAAV载体，其中所述经密码子优化的核苷酸序列具有约5个CpG位点。5.如前述权利要求中任一项所述的rAAV载体，其中所述经密码子优化的核苷酸序列包含接头。6.如权利要求5所述的rAAV载体，其中所述接头包括可切割接头。7.如权利要求5所述的rAAV，其中所述接头包括不可切割接头。8.如前述权利要求中任一项所述的rAAV载体，其中所述抗血浆激肽释放酶抗体重链和所述抗血浆激肽释放酶抗体轻链由单一的启动子控制。9.如前述权利要求中任一项所述的rAAV载体，其中所述抗血浆激肽释放酶抗体重链和所述抗血浆激肽释放酶抗体轻链由分开的启动子控制。如权利要求5或6所述的rAAV载体，其中所述单一的启动子或所述分开的启动子选自遍在启动子、组织特异性启动子或可调节型启动子。10.如权利要求9所述的rAAV载体，其中所述组织特异性启动子是肝脏特异性启动子。11.如权利要求10所述的rAAV载体，其中所述肝脏特异性启动子包括选自以下的启动子：人转甲状腺素蛋白启动子(TTR)、经修饰的hTTR(hTTR mod.)、α
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抗胰蛋白酶启动子、肝脏启动子1(LP1)、TRM启动子、人凝血因子IX pro/肝转录因子反应性低聚物、LSP、CMV/CBA启动子(1.1kb)、CAG启动子(1.7kb)、mTTR、经修饰的mTTR、mTTR pro、mTTR增强子或碱性白蛋白启动子。12.如权利要求11所述的rAAV载体，其中所述肝脏特异性启动子是人转甲状腺素蛋白启动子(TTR)。13.如权利要求9所述的rAAV载体，其中所述可调节型启动子是诱导型或可阻遏型启动子。14.如前述权利要求中任一项所述的rAAV载体，其中所述载体还包含以下中的一者或多者：5'和3'反向末端重复体、所述序列上游的内含子和顺式作用调节性模块(CRM)。15.如前述权利要求中任一项所述的rAAV载体，其中所述载体还包含WPRE序列。16.如权利要求15所述的rAAV载体，其中所述WPRE序列是经修饰的。17.如权利要求16所述的rAAV载体，其中所述WPRE含有mut6delATG修饰。18.如权利要求14
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17中任一项所述的rAAV载体，其中所述CRM是肝脏特异性CRM。19.如权利要求14
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18中任一项所述的rAAV载体，其中所述CRM是CRM8。20.如权利要求14
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19中任一项所述的rAAV载体，其中所述载体包含至少三个CRM。
21.如权利要求14
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19中任一项所述的rAAV载体，其中所述载体包含三个CRM8。22.如前述权利要求中任一项所述的rAAV载体，其中所述rAAV载体包含IRES序列。23.如前述权利要求中任一项所述的rAAV载体，其中所述抗血浆激肽释放酶抗体轻链和/或重链包含提高所述抗体的半衰期和/或降低所述抗体的效应子功能的一种或多种突变。24.如权利要求23所述的rAAV载体，其中所述一种或多种突变包括LALA突变(L234A和L235A)和/或NHance突变(H433K和N434F)。25.如权利要求23或24所述的rAAV载体，其中所述一种或多种突变包括LALA突变(L234A和L235A)。26.如前述权利要求中任一项所述的rAAV载体，其中所述AAV载体选自AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11或AAVrh.10。27.如前述权利要求中任一项所述的rAAV载体，其中所述AAV载体是AAV8。28.如权利要求27所述的rAAV载体，其中所述rAAV载体具有这样的GC含量，其被工程改造成具有与天然存在的AAV8约相同的GC含量。29.如权利要求26或27所述的rAAV，其中所述rAAV载体衣壳是经工程改造的。30.如权利要求29所述的rAAV，其中所述经工程改造的rAAV载体包含具有经修饰的氨基酸序列的AAV衣壳序列。31.如权利要求30所述的rAAV，其中所述经修饰的氨基酸序列包含氨基酸序列的插入、缺失或取代。32.如权利要求26所述的rAAV载体，其中所述rAAV衣壳是天然来源的。33.如权利要求28所述的rAAV载体，其中所述rAAV载体衣壳是AAV8。34.如权利要求6所述的rAAV载体，其中所述可切割序列是弗林蛋白酶可切割序列。35.如权利要求34所述的rAAV载体，其中所述弗林蛋白酶可切割序列之后是接头和2A序列。36.如权利要求35所述的rAAV载体，其中所述接头是GSG接头。37.如权利要求35或36所述的rAAV载体，其中所述2A序列是T2A、P2A、E2A或F2A序列。38.如权利要求37所述的rAAV载体，其中所述2A序列是P2A序列。39.如前述权利要求中任一项所述的rAAV载体，其中所述载体还编码分泌信号。40.如权利要求39所述的rAAV载体，其中所述分泌信号是天然存在的信号肽。41.如权利要求39所述的rAAV载体，其中所述分泌信号是人工信号肽。42.如前述权利要求中任一项所述的rAAV载体，其中所述抗血浆激肽释放酶抗体重链和所述抗血浆激肽释放酶抗体轻链产生能够与血浆激肽释放酶结合的功能性抗血浆激肽释放酶抗体。43.如权利要求42所述的rAAV载体，其中所述抗血浆激肽释放酶抗体抑制血浆激肽释放酶的蛋...

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：武田药品工业株式会社，
类型：发明
国别省市：