本发明专利技术涉及鼠抗GDH杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用，通过小鼠杂交瘤单克隆抗体筛选及RT
【技术实现步骤摘要】
鼠抗GDH杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用
[0001]本专利技术属于抗体制备领域，尤其是涉及鼠抗GDH杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用。
技术介绍
[0002]艰难梭菌（Clostridioidesdifficile）是一种专性厌氧的革兰染色阳性芽孢杆菌，1935年Hall和O'Toole首次从新生儿粪便中分离出该菌。1978年，Bartlett等报道了艰难梭菌分泌的细胞毒素是引起抗生素相关腹泻、伪膜性肠炎的主要病因。近20年来，由于抗生素的普遍使用与老龄人口比例增加，艰难梭菌感染（Clostridioidesdifficileinfection,CDI）的发病率、复发率和严重程度呈上升趋势。特别是近年来，随着艰难梭菌强毒力型菌株的出现，CDI的发病率显著增加，严重威胁公共卫生安全。
[0003]目前CDI已成为重要的医院感染之一，及早、正确的根据相关症状及检验结果诊断CDI，不仅有助于临床诊断和疾病预防，还可以指导合理使用抗生素以及减少不必要的医疗费用支出。2021年，由中华预防医学会制定的《艰难梭菌感染诊断（T/CPMA008
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2020）》标准中提出临床样本的快速诊断方法，首先对样本中的谷氨酸脱氢酶（GDH）和毒素A/B同时进行检测，如果二者结果不一致，需结合PCR检测tcdB基因，判断样本中有无产毒型艰难梭菌。谷氨酸脱氢酶（glutamatedehydrogenase,GDH）是艰难梭菌的一种膜蛋白，稳定性好，且在各型艰难梭菌中具有高保守性，但该蛋白并不是产毒型艰难梭菌特有的，非产毒型菌株和梭菌属其他细菌也可产此酶，所以不能单独作为诊断方法，常作为初筛诊断性抗原。目前国内尚无获得医疗器械注册批件的艰难梭菌GDH检测试剂盒，而进口注册产品价格昂贵，有些还需要配合相应的仪器设备进行检测，因此亟需开发同类国产试剂盒替代进口产品，以便能在国内开展常规临床检测，及早监控疾病进展。
[0004]开发胶体金法的艰难梭菌谷氨酸脱氢酶抗原及毒素检测试剂盒，首先需要分别获得谷氨酸脱氢酶抗原(GDH）及其毒素A和毒素B抗原，获得高纯度的抗原后，在小鼠体内激起良好的免疫反应后，采用杂交瘤技术，筛选高亲和力和特异性的抗体，用于相关体外诊断试剂的开发。
技术实现思路
[0005]为解决上述技术问题，本专利技术提供鼠抗GDH杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用。
[0006]本专利技术采用的技术方案是：鼠抗GDH杂交瘤细胞株，命名为1HF9，保藏编号为CGMCCNo.45517，或者命名为1GE10，保藏编号为CGMCCNo.45516。
[0007]鼠抗GDH单克隆抗体，抗体1HF9包括重链可变区和轻链可变区，重链可变区包括如SEQIDNO:1所示的CDRH1、SEQIDNO:2所示的CDRH2和SEQIDNO:3所示的CDRH3，轻链可变区包括如SEQIDNO:4所示的CDRL1、SEQIDNO:5所示的CDRL2和SEQIDNO:6所示的CDRL3；SEQIDNO:1CDRH1:GFTFNTNAMS
SEQIDNO:2CDRH2:RIRSKSDNHGTFYADSVKDSEQIDNO:3CDRH3:SWFGFSEQIDNO:4CDRL1:SASSSVSSIYLYSEQIDNO:5CDRL2:RTSHLASSEQIDNO:6CDRL3:LQWSSYPYT或者，抗体1GE10包括重链可变区和轻链可变区，重链可变区包括如SEQIDNO:11所示的CDRH1、SEQIDNO:12所示的CDRH2和SEQIDNO:13所示的CDRH3，轻链可变区包括如SEQIDNO:14所示的CDRL1、SEQIDNO:15所示的CDRL2和SEQIDNO:16所示的CDRL3；SEQIDNO:11CDRH1:GFTFNTNSMSSEQIDNO:12CDRH2:RIRSRNNNFETYYADSVKDSEQIDNO:13CDRH3：SWFGYSEQIDNO:14CDRL1:SASSSVSSSYLYSEQIDNO:15CDRL2:RTSNLASSEQIDNO:16CDRL3:LQWNSYPFT优选地，抗体1HF9重链可变区氨基酸序列为SEQIDNO:7所示，轻链可变区氨基酸序列为SEQIDNO:9所示；SEQIDNO:7QVQLQQSGGGLVQPKGSLTLSCEASGFTFNTNAMSWVRQAPGKGLEWIARIRSKSDNHGTFYADSVKDRLTISRDDLQNILYLQMNNLKTEDTAMYYCVDSWFGFWGQGTLVTVSASEQIDNO:9DIVLTQSPEIMSASPGEKVTLTCSASSSVSSIYLYWYQQKPGSSPKLWIYRTSHLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAASYFCLQWSSYPYTFGGGTKLEIK或者，抗体1GE10重链可变区氨基酸序列为SEQIDNO:17所示，轻链可变区氨基酸序列为SEQIDNO:19所示；SEQIDNO:17EVQLQESGGGLVQPKGSLKLSCAASGFTFNTNSMSWVRQAPGKGLEWVARIRSRNNNFETYYADSVKDRFTISRDDSQSMLYLQMNNLKSEDTAMYYCVDSWFGYWGQGTLVTVSASEQIDNO:19DIVLTQSPAIMSASPGEKVTLTCSASSSVSSSYLYWYQQKPGSSPKLWIYRTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISSMEAEDAASYFCLQWNSYPFTFGGGTKLEIK优选地，抗体1HF9由保藏编号为CGMCCNo.45517的鼠抗GDH杂交瘤细胞株产生；抗体1GE10由保藏编号为CGMCCNo.45516的鼠抗GDH杂交瘤细胞株产生。
[0008]核酸分子，包含编码鼠抗GDH单克隆抗体的核苷酸。
[0009]优选地，核酸分子编码抗体1HF9的重链可变区的核苷酸序列如SEQIDNO:8所示，核酸分子编码抗体1HF9的轻链可变区的核苷酸序列如SEQIDNO:10所示；SEQIDNO:8CAGGTGCAGCTTCAGCAGTCTGGTGGAGGATTGGTACAGCCTAAAGGGTCATTGACACTCTCATGTGAA
GCCTCTGGATTCACCTTCAATACCAATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGTTTGGAATGGATTGCTCGCATAAGAAGTAAAAGTGATAATCATGGAACATTTTATGCCGATTCAGTGAAAGACAGGTTAACCATCTCCAGAGATGATTTACAAAACATACTCTATCTGCAAATGAACAACTTGAAAACTGAGGACACAGCCATGTATTACTGTGTGGACTCCTGGTTTGGTTTCTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCCGCASEQIDNO:10GACATTGTGCTCACCCAGTCTCCAGAAATCATGTCTGCATCTCCTGGGGAGAAGGTCACTTTGACCT本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.鼠抗GDH杂交瘤细胞株，其特征在于：命名为1HF9，保藏编号为CGMCC No.45517，或者命名为1GE10，保藏编号为CGMCC No.45516。2.鼠抗GDH单克隆抗体，其特征在于：抗体1HF9包括重链可变区和轻链可变区，重链可变区包括如SEQ ID NO:1所示的CDRH1、SEQ ID NO:2所示的CDRH2和SEQ ID NO:3所示的CDRH3，轻链可变区包括如SEQ ID NO:4所示的CDRL1、SEQ ID NO:5所示的CDRL2和SEQ ID NO:6所示的CDRL3；或者，抗体1GE10包括重链可变区和轻链可变区，重链可变区包括如SEQ ID NO:11所示的CDRH1、SEQ ID NO:12所示的CDRH2和SEQ ID NO:13所示的CDRH3，轻链可变区包括如SEQ ID NO:14所示的CDRL1、SEQ ID NO:15所示的CDRL2和SEQ ID NO:16所示的CDRL3。3.根据权利要求2所述的鼠抗GDH单克隆抗体，其特征在于：抗体1HF9重链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO:7所示，轻链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO:9所示；或者，抗体1GE10重链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO:17所示，轻链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO:19所示。4.根据权利要求2或3所述的鼠抗GDH单克隆抗体，其特征在于：抗体1HF9由保藏编号为CGMCC No.4551...
【专利技术属性】
技术研发人员：李可可，王芮，王建霞，陈晓玲，孔迪，赵芷萌，王茹，苑庆华，李世林，
申请(专利权)人：天津一瑞生物科技股份有限公司北京金山川科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：
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