一种肌酸激酶同工酶抗体及线粒体CK检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及生物检测技术领域，提供了一种肌酸激酶同工酶抗体，包括轻链和重链；所述轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，重链的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明专利技术还提供了一种线粒体CK检测试剂盒，包所述肌酸激酶同工酶抗体。本发明专利技术的优点在于：本发明专利技术肌酸激酶同工酶抗体，亲和力高，能够有效完全阻断CKMM、CKMB、CKBB酶学活性；本发明专利技术试剂盒操作简单、可自动化、灵敏度高、特异性好，可有效的排除血液中CKMM、CKMB、CKBB对线粒体CK检测的干扰，使检测结果准确可靠。测结果准确可靠。测结果准确可靠。

【技术实现步骤摘要】
一种肌酸激酶同工酶抗体及线粒体CK检测试剂盒


[0001]本专利技术涉及生物检测
，尤其涉及一种肌酸激酶同工酶抗体以及基于该抗体的线粒体肌酸激酶检测试剂盒。

技术介绍

[0002]肌酸激酶同工酶(Creatine Kinase Isoenzyme，CK)是一类重要的酶，在维持细胞内能量代谢平衡方面发挥着重要作用。肌酸激酶同工酶是二聚体酶，其结构由肌型亚单位(M)和脑型亚单位(B)两个亚基组成，根据其亚基组成不同，可分为CK
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MM、CK
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MB、CK
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BB和线粒体CK(MtCK)四种同工酶形式。CKMM主要存在于骨骼肌和心肌中，CKMB主要存在于心肌中，CKBB则存在于脑组织和神经元中。其中，CKMB在临床诊断中有重要的应用，例如，心肌梗死时，心肌细胞会释放出CK
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MB型同工酶。因此，测定血清中CK
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MB水平可作为心肌损伤的指标。
[0003]线粒体CK主要分布于心肌、平滑肌和神经组织等高能耗组织中的线粒体内，对于这些组织维持正常的能量代谢具有重要作用。线粒体CK由两个亚基组成，每个亚基都有一个肌酸结合位点和一个ATP结合位点。通过肌酸和ATP的相互作用，线粒体CK可以在高能磷酸化物的储备和释放之间起到平衡作用，保证细胞内的能量供应。此外，线粒体CK还可以调节线粒体内钙离子的浓度，维持线粒体内环境的稳定。线粒体CK在多种疾病中发挥着重要作用。例如，在心肌缺血再灌注损伤中，线粒体CK可以通过调节能量代谢和钙离子平衡来保护心肌细胞免受氧化应激和细胞死亡的影响。
[0004]近年来，研究人员发现线粒体CK在肿瘤诊断上具有重要的应用价值。线粒体CK在正常组织中的表达很低，而在多种癌症组织中表达显著增加。例如，在乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、结直肠癌、肝癌等多种恶性肿瘤中，线粒体CK的表达均明显高于正常组织。因此，线粒体CK可以作为一种肿瘤标志物，用于肿瘤的早期诊断和预后评估。此外，线粒体CK在肿瘤治疗中也具有重要的应用价值。研究表明，线粒体CK的表达水平与肿瘤的恶性程度和预后密切相关。因此，通过监测血清中线粒体CK的水平，可以反应肿瘤病人在治疗后的术后恢复状况，从而对肿瘤的治疗过程进行监测。
[0005]近年来，还有研究表明线粒体CK在肿瘤免疫治疗中具有潜在的应用价值。线粒体CK可以影响肿瘤细胞的代谢和能量转移，从而影响肿瘤细胞的生长和增殖。因此，通过调节线粒体CK的表达水平，可以提高肿瘤细胞对免疫治疗的敏感性，从而提高治疗效果。总之，线粒体CK在肿瘤诊断、治疗和免疫治疗中具有重要的应用价值。未来，随着对线粒体CK的深入研究，相信会有更多的应用场景被发掘出来，为肿瘤治疗带来更多的希望。
[0006]然而，目前临床上还未有针对血清中线粒体CK水平检测的试剂盒，究其原因主要在于以下两方面：(1)还未深刻意识到线粒体CK水平检测的重要性，因而未深入研究；(2)若想对血清中线粒体CK水平进行检测，利用现有技术难以排除CKMM、CKMB、CKBB的干扰，导致检测结果准确性无法保证。

技术实现思路

[0007]本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种能够完全阻断CKMM、CKMB、CKBB酶学活性的肌酸激酶同工酶抗体以及基于该抗体制备的线粒体CK检测试剂盒，该试剂盒灵敏度高、特异性好，可实现临床上线粒体CK的定量、准确检测。
[0008]本专利技术采用以下技术方案解决上述技术问题：
[0009]一种肌酸激酶同工酶抗体，包括轻链和重链；所述轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，重链的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0010]作为本专利技术的优选方式之一，所述肌酸激酶同工酶抗体的轻链，包括轻链可变区VL和轻链恒定区CL；其中，所述轻链可变区VL的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，轻链恒定区CL的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
[0011]作为本专利技术的优选方式之一，所述轻链可变区VL包括LCDR1、LCDR2、LCDR3三个可变区，氨基酸序列分别为SEQ ID NO.5～SEQ ID NO.7所示。
[0012]作为本专利技术的优选方式之一，所述肌酸激酶同工酶抗体的重链，包括重链可变区VH和重链恒定区CH；其中，所述重链可变区VH的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示，重链恒定区CH的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示。
[0013]作为本专利技术的优选方式之一，所述重链可变区VH包括HCDR1、HCDR2、HCDR3三个可变区，氨基酸序列分别如SEQ ID NO.10～SEQ ID NO.12所示。
[0014]作为本专利技术的优选方式之一，所述肌酸激酶同工酶抗体能够同时结合CKMM、CKMB、CKBB蛋白，并阻断CKMM、CKMB、CKBB的酶学活性。
[0015]一种线粒体CK检测试剂盒，包括上述肌酸激酶同工酶抗体。
[0016]作为本专利技术的优选方式之一，所述线粒体CK检测试剂盒具体包括试剂R1和试剂R2；
[0017]所述试剂R1包括：30～70ug/mL肌酸激酶同工酶抗体，1～5g/L醋酸镁，1～10g/L咪唑，1～10g/L葡萄糖，0.1～1g/L硫代硫酸钠，0.1～1g/L乙二胺四乙酸二钠，0.5～5g/L二磷酸腺苷，1～5g/L一磷酸腺苷，1～10g/L N
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乙酰半胱氨酸，1～5g/L氧化型辅酶I，1～50mg/L二腺苷五磷酸，1～10ku/L己糖激酶，1～10ku/L葡萄糖6磷酸脱氢酶，0.1～1g/L防腐剂YK300；
[0018]所述试剂R2包括：1～10g/L CAPSO缓冲液，0.1～2g/L氢氧化钠，1～10g/L葡萄糖，30～100g/L肌酸磷酸，0.1～1g/L防腐剂YK300。
[0019]作为本专利技术的优选方式之一，还包括校准品。
[0020]作为本专利技术的优选方式之一，所述校准品包括：0.1～1g/L叠氮钠，0.5～10g/L牛血清白蛋白，30～500U/L线粒体肌酸激酶同工酶，1～10g/L PH值为7.5的Tris
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Hcl缓冲液，10～100g/L甘油。其中，线粒体肌酸激酶同工酶可直接选择市售产品，例如，安徽千诚生物技术有限公司生产的“重组人mtCK”，来源于HEK293细胞，人，纯度≥95％，货号：AG02601；也可采用现有市场的其他体外真核系统表达并纯化的重组人mtCK蛋白。
[0021]作为本专利技术的优选方式之一，所述线粒体CK检测试剂盒具体包括试剂R1、试剂R2和校准品；
[0022]所述试剂R1包括：50ug/mL本专利技术肌酸激酶同工酶抗体，3g/L醋酸镁，8g/L咪唑，5g/L葡萄糖，0.25g/L硫代硫酸钠，0.79g/L乙二胺四乙酸二钠，1.3g/L二磷酸腺苷，3g/L一
磷酸腺苷，5g/L N
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乙酰半胱氨酸，2.5g/L氧化型辅酶I，13mg/L二腺苷五磷酸，3ku/L己糖激酶，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种肌酸激酶同工酶抗体，其特征在于，包括轻链和重链；所述轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，重链的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。2.根据权利要求1所述的肌酸激酶同工酶抗体，其特征在于，所述肌酸激酶同工酶抗体的轻链，包括轻链可变区VL和轻链恒定区CL；其中，所述轻链可变区VL的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，轻链恒定区CL的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。3.根据权利要求2所述的肌酸激酶同工酶抗体，其特征在于，所述轻链可变区VL包括LCDR1、LCDR2、LCDR3三个可变区，氨基酸序列分别为SEQ ID NO.5～SEQ ID NO.7所示。4.根据权利要求1所述的肌酸激酶同工酶抗体，其特征在于，所述肌酸激酶同工酶抗体的重链，包括重链可变区VH和重链恒定区CH；其中，所述重链可变区VH的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示，重链恒定区CH的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示。5.根据权利要求4所述的肌酸激酶同工酶抗体，其特征在于，所述重链可变区VH包括HCDR1、HCDR2、HCDR3三个可变区，氨基酸序列分别如SEQ ID NO.10～SEQ ID NO.12所示。6.根据权利要求1～5任一所述的肌酸激酶同工酶抗体，其特征在于，所述肌酸激酶同工酶抗体能够同时结合CKMM、CKMB、CKBB蛋白，并阻断CKMM、CKMB、CK...

【专利技术属性】
技术研发人员：周伟，刘浩，李燕华，鲍文英，芮双印，
申请(专利权)人：安徽千诚生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：