一种定量检测可溶性制造技术

本发明专利技术提供了一种定量检测可溶性

【技术实现步骤摘要】
一种定量检测可溶性ST2蛋白的胶乳增强免疫比浊试剂盒及其制备方法


[0001]本专利技术涉及生物检测
，尤其涉及一种定量检测可溶性
ST2
蛋白的胶乳增强免疫比浊试剂盒及其制备方法
。

技术介绍

[0002]ST2
蛋白是一种跨膜蛋白，也称为
IL
‑
1R4。
可溶性
ST2
蛋白是
ST2
的可溶性形式，它是由细胞膜表面剪切产生的，在细胞外部游离存在
。
可溶性
ST2
蛋白主要由心脏和免疫系统的细胞产生，包括心肌细胞
、
成纤维细胞
、
巨噬细胞
、
树突状细胞和
T
细胞等
。
[0003]人的
ST2
基因长约
40kb
，位于人类染色体
2q12。
该基因编码两种不同形式的蛋白，一种是可溶性
ST2
蛋白
(sST2)
，另一种是跨膜形式...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种定量检测可溶性
ST2
蛋白的胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于，包括试剂
R1、
试剂
R2
和校准品；所述试剂
R1
包括稳定剂
、
促凝剂
、
防腐剂和缓冲液；所述试剂
R2
包括稳定剂
、
防腐剂
、
表面活性剂
、
缓冲液
、
包被抗人可溶性
ST2
蛋白抗体的胶乳颗粒；所述校准品包括防腐剂
、
稳定剂
、ST2
抗原和缓冲液；所述试剂
R2
的“包被抗人可溶性
ST2
蛋白抗体的胶乳颗粒”中，具体采用两种人源化改造的纳米单克隆抗体作为抗人可溶性
ST2
蛋白抗体，且两种抗体分别与胶乳颗粒之间通过“链酶亲和素
‑
生物素系统”连接；其中，两种纳米单克隆抗体的原始氨基酸序列分别为
SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2
所示，人源化改造指对所述纳米单克隆抗体的
C
端融合人源
Fc
序列并加入
Avi
‑
Tag
标签
。2.
根据权利要求1所述的定量检测可溶性
ST2
蛋白的胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于，所述试剂
R1
中：所述稳定剂包括
5mg/mL
牛血清白蛋白和
0.1mg/mL
明胶；所述促凝剂为终浓度
0.5
％的
PEG6000
；所述防腐剂为
0.05
％
ProClin300
；所述缓冲液包括
50mM Tris
‑
HCl
缓冲液和
150mM NaCl
，缓冲液
pH 7.5。3.
根据权利要求1所述的定量检测可溶性
ST2
蛋白的胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于，所述试剂
R2
中：所述稳定剂包括
5mg/mL
牛血清白蛋白和
25mg/mL
海藻糖；防腐剂为
0.05
％
ProClin300
；所述表面活性剂为
0.01
％
Tween 20
；所述缓冲液包括
20mM、pH 7.5
的
Hepes
缓冲液以及
30mM、pH 8.0
的硼酸缓冲液；所述包被抗人可溶性
ST2
蛋白抗体的胶乳颗粒，终浓度
0.1
％
。4.
根据权利要求1所述的定量检测可溶性
ST2
蛋白的胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于，所述试剂
R2
的包被抗人可溶性
ST2
蛋白抗体的胶乳颗粒中，两种人源化改造的纳米单克隆抗体之间的质量比为
1:1。5.
根据权利要求1所述的定量检测可溶性
ST2
蛋白的胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于，所述校准品中：所述防腐剂为
0.1
％叠氮钠；所述稳定剂包括
10mg/mL
牛血清白蛋白和
50mg/mL
海藻糖；所述
ST2
抗原为浓度0～
500ng/mL
的
ST2
蛋白抗原；所述缓冲液为浓度
20mM、pH7.2
的磷酸盐缓冲液
。6.
根据权利要求1所述的定量检测可溶性
ST2
蛋白的胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于，所述校准品的
ST2
蛋白抗原为体外真核系统表达并纯化的重组
ST2
蛋白，纯度
≥95
％
。7.
根据权利要求1～6任一所述的定量检测可溶性
ST2
蛋白的胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于，所述“包被抗人可溶性
ST2
蛋白抗体的胶乳颗粒”通过如下方法获得：
(1)
胶乳颗粒的洗涤及活化
①
将胶乳颗粒加入
MES
洗涤液离心，弃上清，重复洗涤若干次；
②
将沉淀重悬于
MES
偶联缓冲液中，并加入
EDC
活化；
③
活化后的胶乳颗粒用
MES
偶联缓冲液洗涤后重悬；
(2)
链酶亲和素偶联
①
取活化洗涤后的胶乳溶液，加入链酶亲和素；混匀后摇床偶联；
②
用
Hepes
缓冲液洗涤微球颗粒，重复...

【专利技术属性】
技术研发人员：周伟，刘浩，李燕华，鲍文英，芮双印，
申请(专利权)人：安徽千诚生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：