一种定量检测可溶性制造技术

本发明专利技术提供了一种定量检测可溶性

【技术实现步骤摘要】
一种定量检测可溶性ST2蛋白的胶乳增强免疫比浊试剂盒及其制备方法


[0001]本专利技术涉及生物检测
，尤其涉及一种定量检测可溶性
ST2
蛋白的胶乳增强免疫比浊试剂盒及其制备方法
。

技术介绍

[0002]ST2
蛋白是一种跨膜蛋白，也称为
IL
‑
1R4。
可溶性
ST2
蛋白是
ST2
的可溶性形式，它是由细胞膜表面剪切产生的，在细胞外部游离存在
。
可溶性
ST2
蛋白主要由心脏和免疫系统的细胞产生，包括心肌细胞
、
成纤维细胞
、
巨噬细胞
、
树突状细胞和
T
细胞等
。
[0003]人的
ST2
基因长约
40kb
，位于人类染色体
2q12。
该基因编码两种不同形式的蛋白，一种是可溶性
ST2
蛋白
(sST2)
，另一种是跨膜形式
ST2
蛋白
(ST2L)。
[0004]可溶性
ST2
蛋白还被认为是一种自然的抗炎分子，因为它可以结合并中和一种被称为
IL
‑
33
的促炎症细胞因子，从而抑制其在体内的作用
。ST2
作为
IL
‑
33
受体，在其与
IL
‑r/>33
结合时，会引发一系列免疫反应和炎症反应，从而参与许多疾病的发生和发展
。
可溶性
ST2
蛋白通过与
IL
‑
33
竞争结合其受体，可以减轻免疫反应和炎症反应，从而发挥抗炎作用
。
[0005]除了抗炎作用之外，可溶性
ST2
蛋白还具有许多其他生物学功能
。
研究表明，
sST2
蛋白在心脏
、
肾脏
、
肝脏等器官中表达，并参与多种生理和病理过程
。sST2
是一种机械应力诱导产生的心肌蛋白，在生物机械拉伸的刺激下分泌增多
。
随着心力衰竭程度的加重，心脏的负荷增加，
sST2
升高更为显著
。
同时，
sST2
作为血清可溶性诱骗受体，可以阻断
IL
‑
33
与
ST2L
结合，从而阻止
IL
‑
33
的心脏保护作用
。
因此，
sST2
可能是心肌肥大和心肌纤维化的潜在病理生理介质之一
。
所以
sST2
可以作为一种心脏肌肉损伤的生物标志物，在急性心肌梗死
、
心力衰竭等心血管疾病的诊断和治疗中发挥重要作用
。
[0006]根据
2013
年美国心脏学会和美国心脏病学会指南，对于急性或动态心衰患者，建议进行
sST2
测量，并给出
IIb
级的建议
。sST2
不仅可以预测心衰患者的住院和死亡风险，而且在门诊随访的慢性心衰患者中，使用
sST2
进行风险分类也被推荐为
IIb
级和
B
级建议
。2017
年
ACC/AHA/HFSA
心衰指南再次推荐
sST2
作为危险分层和评估预后的生物标志物之一
。sST2
可与临床上常用的生物标志物如
BNP、NT
‑
proBNP
结合使用，共同用于心衰的诊断和预测预后，为未来的心衰治疗提供新的思路和方法
。
[0007]除以上应用外，
sST2
还与癌症等多种疾病的预后和治疗反应密切相关
。
可溶性
ST2
蛋白水平的升高可能与某些肿瘤的发生和恶性程度相关
。
因此，可溶性
ST2
蛋白可以作为一种肿瘤风险评估指标，帮助医生更早地发现肿瘤，制定更有效的治疗方案
。
例如，在乳腺癌研究中，研究人员发现高水平的可溶性
ST2
蛋白与更高的乳腺癌风险相关
。
肿瘤治疗的目标是消灭肿瘤细胞，降低肿瘤复发和转移的风险
。
可溶性
ST2
蛋白可以用作评估肿瘤治疗效果的指标
。
例如，在非小细胞肺癌的研究中，研究人员发现化疗后可溶性
ST2
蛋白水平的变化可以预测患者的预后和生存期
。
[0008]总体来说，可溶性
ST2
蛋白在心血管疾病诊断
、
自身免疫疾病及肿瘤的早筛及预后
上具有很大的临床应用潜力
。
然而，现有的可溶性
ST2
蛋白检测试剂盒大多为免疫层析法，不仅无法实现定量检测，而且灵敏度和特异性也有待提高
。
[0009]据此，目前急需开发设计出一种灵敏度更高
、
特异性更好，且可实现定量检测的可溶性
ST2
蛋白检测试剂盒
。

技术实现思路

[0010]本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种灵敏度更高
、
特异性更好，且可实现定量检测的可溶性
ST2
蛋白胶乳增强免疫比浊检剂盒及其制备方法
。
[0011]本专利技术采用以下技术方案解决上述技术问题：
[0012]一种定量检测可溶性
ST2
蛋白的胶乳增强免疫比浊试剂盒，包括试剂
R1、
试剂
R2
和校准品；
[0013]所述试剂
R1
包括稳定剂
、
促凝剂
、
防腐剂和缓冲液；
[0014]所述试剂
R2
包括稳定剂
、
防腐剂
、
表面活性剂
、
缓冲液
、
包被抗人可溶性
ST2
蛋白抗体的胶乳颗粒；
[0015]所述校准品包括防腐剂
、
稳定剂
、ST2
抗原和缓冲液；
[0016]所述试剂
R2
的“包被抗人可溶性
ST2
蛋白抗体的胶乳颗粒”中，具体采用两种人源化改造的纳米单克隆抗体作为抗人可溶性
ST2
蛋白抗体，且两种抗体分别与胶乳颗粒之间通过“链酶亲和素
‑
生物素系统”连接；其中，两种纳米单克隆抗体的原始氨基酸序列分别为
SEQ ID NO本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种定量检测可溶性
ST2
蛋白的胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于，包括试剂
R1、
试剂
R2
和校准品；所述试剂
R1
包括稳定剂
、
促凝剂
、
防腐剂和缓冲液；所述试剂
R2
包括稳定剂
、
防腐剂
、
表面活性剂
、
缓冲液
、
包被抗人可溶性
ST2
蛋白抗体的胶乳颗粒；所述校准品包括防腐剂
、
稳定剂
、ST2
抗原和缓冲液；所述试剂
R2
的“包被抗人可溶性
ST2
蛋白抗体的胶乳颗粒”中，具体采用两种人源化改造的纳米单克隆抗体作为抗人可溶性
ST2
蛋白抗体，且两种抗体分别与胶乳颗粒之间通过“链酶亲和素
‑
生物素系统”连接；其中，两种纳米单克隆抗体的原始氨基酸序列分别为
SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2
所示，人源化改造指对所述纳米单克隆抗体的
C
端融合人源
Fc
序列并加入
Avi
‑
Tag
标签
。2.
根据权利要求1所述的定量检测可溶性
ST2
蛋白的胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于，所述试剂
R1
中：所述稳定剂包括
5mg/mL
牛血清白蛋白和
0.1mg/mL
明胶；所述促凝剂为终浓度
0.5
％的
PEG6000
；所述防腐剂为
0.05
％
ProClin300
；所述缓冲液包括
50mM Tris
‑
HCl
缓冲液和
150mM NaCl
，缓冲液
pH 7.5。3.
根据权利要求1所述的定量检测可溶性
ST2
蛋白的胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于，所述试剂
R2
中：所述稳定剂包括
5mg/mL
牛血清白蛋白和
25mg/mL
海藻糖；防腐剂为
0.05
％
ProClin300
；所述表面活性剂为
0.01
％
Tween 20
；所述缓冲液包括
20mM、pH 7.5
的
Hepes
缓冲液以及
30mM、pH 8.0
的硼酸缓冲液；所述包被抗人可溶性
ST2
蛋白抗体的胶乳颗粒，终浓度
0.1
％
。4.
根据权利要求1所述的定量检测可溶性
ST2
蛋白的胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于，所述试剂
R2
的包被抗人可溶性
ST2
蛋白抗体的胶乳颗粒中，两种人源化改造的纳米单克隆抗体之间的质量比为
1:1。5.
根据权利要求1所述的定量检测可溶性
ST2
蛋白的胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于，所述校准品中：所述防腐剂为
0.1
％叠氮钠；所述稳定剂包括
10mg/mL
牛血清白蛋白和
50mg/mL
海藻糖；所述
ST2
抗原为浓度0～
500ng/mL
的
ST2
蛋白抗原；所述缓冲液为浓度
20mM、pH7.2
的磷酸盐缓冲液
。6.
根据权利要求1所述的定量检测可溶性
ST2
蛋白的胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于，所述校准品的
ST2
蛋白抗原为体外真核系统表达并纯化的重组
ST2
蛋白，纯度
≥95
％
。7.
根据权利要求1～6任一所述的定量检测可溶性
ST2
蛋白的胶乳增强免疫比浊试剂盒，其特征在于，所述“包被抗人可溶性
ST2
蛋白抗体的胶乳颗粒”通过如下方法获得：
(1)
胶乳颗粒的洗涤及活化
①
将胶乳颗粒加入
MES
洗涤液离心，弃上清，重复洗涤若干次；
②
将沉淀重悬于
MES
偶联缓冲液中，并加入
EDC
活化；
③
活化后的胶乳颗粒用
MES
偶联缓冲液洗涤后重悬；
(2)
链酶亲和素偶联
①
取活化洗涤后的胶乳溶液，加入链酶亲和素；混匀后摇床偶联；
②
用
Hepes
缓冲液洗涤微球颗粒，重复...

【专利技术属性】
技术研发人员：周伟，刘浩，李燕华，鲍文英，芮双印，
申请(专利权)人：安徽千诚生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：