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【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及化学分析,尤其涉及一种用于检测抗原的化学发光试剂盒及其制备、检测方法。
技术介绍
1、化学发光免疫分析技术(chemiluminescent immunoassay,clia)是一项在生物医学领域广泛应用的高度敏感和特异性的生化分析技术。clia的发展源自对传统免疫分析方法(如酶联免疫吸附测定,elisa,和放射免疫分析,ria)的不足之处的认识。传统方法在某些方面存在灵敏度、特异性和安全性等方面的局限性,因此clia的出现填补了这些技术上的空白。
2、化学发光原理早在20世纪50年代就开始被研究,但直到20世纪70年代后期才开始在免疫分析中得到广泛应用。化学发光的原理基于特定底物与催化剂之间的反应,这种反应会产生可见光或荧光信号,而无需外部激发光源。这一原理的开发推动了clia技术的迅速发展。
3、随着免疫学和抗体技术的不断进步,特异性抗体的制备变得更加高效和精确,使得clia技术的应用范围更广泛,并提高了其特异性和灵敏度。
4、在现代化学发光免疫分析技术中,仪器和自动化技术方面也取得了显著进展。引入自动化系统使得clia能够高效地处理大批样本,从而提高了实验室工作的效率。
5、随着临床诊断需求的不断增加,对于快速、敏感和特异性的诊断工具的需求也在增加。clia技术正好满足了这些需求,因此在临床诊断中得到了广泛应用。
6、此外,随着化学发光技术的不断进步,目前市场上主要存在三种类型的化学发光免疫分析方法,分别是直接化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析和电
7、直接化学发光免疫分析:这种方法利用吖啶酯直接标记抗体(或抗原),与待测标本中对应的抗原(或抗体)发生免疫反应,形成一个稳定的固相复合物,包括固相包被抗体-待测抗原和吖啶酯标记抗体。接下来,只需加入氧化剂(如h2o2)和naoh,使环境呈碱性,吖啶酯将在不需要外部催化剂的情况下分解并产生发光。
8、化学发光酶免疫分析:在这种方法中,我们使用具有催化特性的酶,如辣根过氧化物酶(hrp)或碱性磷酸酶(alp),来标记抗原或抗体。首先,待测标本中的抗原(或抗体)与固相包被抗体发生免疫反应,形成固相复合物。然后,通过洗涤步骤,去除未结合的物质。接下来,加入化学发光底物(发光剂),酶催化并分解底物,产生发光信号。这个信号被光量子阅读系统接收,并由光电倍增管将其转化为电信号,随后传送至计算机数据处理系统,最终计算出测定物的浓度。
9、电化学发光免疫分析:电化学发光免疫分析(eclia)使用电化学发光剂,通常是三联吡啶钌,来标记抗原(或抗体)。在这种方法中,抗原(或抗体)与待测标本中的目标物质发生免疫反应。接着,通过电子传递的过程,在电场中引发特异性的化学发光反应。这个过程包括电化学和化学发光两个步骤,产生可测量的发光信号。这个信号被光量子阅读系统接收,光电倍增管将其放大,并将信号传输至计算机数据处理系统,最终用于计算测定物的浓度。
10、以上三种化学发光免疫分析方法分别具有独特的特点和应用领域,在医学、生物研究和临床诊断等领域发挥了重要作用。
11、然而,尽管化学发光免疫分析技术具有高灵敏度、广泛的线性范围、持久的光信号、简单快速的分析方法以及结果稳定性等众多优点,但也存在一些挑战。例如,目前市场上不同厂家的化学发光试剂之间互不通用,仪器与试剂必须配套使用,这导致试剂原料替换的困难和进口依赖性的增加,同时也增加了医院对不同厂家发光试剂管理的复杂性和成本。这些问题需要在未来的发展中得到解决,以进一步推动clia技术的应用和改进。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种高效、便捷、经济的用于检测抗原的化学发光试剂盒及其制备、检测方法,该试剂盒由试剂r1、试剂r2、试剂r3及试剂r4组成,不同检测项目之间的试剂r2、r3及r4组分可以为相同组分,仅需要改变试剂r1组分中的抗体,就能实现各种不同项目的检测,这一特性使得本试剂盒可以实现不同发光项目之间的试剂标准化,从而使使用更为简便,便于医院进行各种检测,并简化了对试剂的管理。
2、本专利技术采用以下技术方案解决上述技术问题:
3、一种用于检测抗原的化学发光试剂盒,包括试剂r1、试剂r2、试剂r3和试剂r4;
4、所述试剂r1包括如下组分:待测抗原抗体1,strepii标签修饰的待测抗原抗体2,缓冲液;所述待测抗原抗体2与待测抗原抗体1不同源,用于分别结合同一待测抗原的不同表位;
5、所述试剂r2包括如下组分:抗体3包被的磁性微粒复合物,缓冲液;所述抗体3用于特异性识别所述待测抗原抗体1的fc端;
6、所述试剂r3包括如下组分:链霉亲和素-化学发光物偶联复合物,缓冲液,保护液;所述链霉亲和素-化学发光物偶联复合物用于结合所述strepii标签修饰的待测抗原抗体2;
7、所述试剂r4包括如下组分:化学发光激发液/发光底物,缓冲液;所述发光激发液/发光底物用于对应所述链霉亲和素-化学发光物偶联复合物,并发生光反应。
8、作为本专利技术的优选方式之一,所述试剂r1的组分中:待测抗原抗体1选择兔源、鼠源或羊源抗体;strepii标签修饰的待测抗原抗体2选择人源、兔源、鼠源或羊源抗体,但与所述待测抗原抗体1不同源。
9、作为本专利技术的优选方式之一,所述待测抗原抗体1具体选择鼠源抗体,strepii标签修饰的待测抗原抗体2选择人源抗体。
10、作为本专利技术的优选方式之一,所述试剂r2的组分中,抗体3包被的磁性微粒复合物的制备方法如下:
11、(1)磁珠的清洗及活化:选用0.5~3μm的磁珠,在0.1m、ph4.0~6.5的mes溶液中清洗磁珠2次,然后在室温下加入0.1m、ph4.0~6.5的mes溶液,随后根据磁珠用量和羧基含量添加1.12倍edc,进行磁珠的活化,反应持续20min;
12、(2)抗体偶联:加入终浓度0.1~2mg/ml的抗体3,室温孵育偶联3h;
13、(3)磁珠的封闭:加入终浓度0.1~1%bsa,室温封闭3h,即得目标复合物。
14、作为本专利技术的优选方式之一,所述试剂r3的组分中,链霉亲和素-化学发光物偶联复合物选择链酶亲和素与直接发光剂形成的复合物、链酶亲和素与酶促化学发光中的酶偶联形成的复合物,或者,链酶亲和素与电化学发光剂偶联形成的复合物。
15、作为本专利技术的优选方式之一,所述链酶亲和素与直接发光剂形成的复合物中的“直接发光剂”,为吖啶酯类化学发光剂;
16、所述链酶亲和素与酶促化学发光中的酶偶联形成的复合物中的“酶”,为辣根过氧化物酶hrp或碱性磷酸酶alp;
17、所述链酶亲和素与电化学发光剂偶联形成的复合物中的“电化学发光剂”为三联吡啶钌。
18、作为本专利技术的优选方式之一,所述试剂r4的组分中,化学发光激发液/发光底物的选择与试剂r3中的化学发光物相本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于检测抗原的化学发光试剂盒,其特征在于,包括试剂R1、试剂R2、试剂R3和试剂R4;
2.根据权利要求1所述的用于检测抗原的化学发光试剂盒,其特征在于,所述试剂R1的组分中:待测抗原抗体1选择兔源、鼠源或羊源抗体;StrepII标签修饰的待测抗原抗体2选择人源、兔源、鼠源或羊源抗体,但与所述待测抗原抗体1不同源。
3.根据权利要求1所述的用于检测抗原的化学发光试剂盒,其特征在于,所述试剂R2的组分中,抗体3包被的磁性微粒复合物的制备方法如下:
4.根据权利要求1所述的用于检测抗原的化学发光试剂盒,其特征在于,所述试剂R3的组分中,链霉亲和素-化学发光物偶联复合物选择链酶亲和素与直接发光剂形成的复合物、链酶亲和素与酶促化学发光中的酶偶联形成的复合物,或者,链酶亲和素与电化学发光剂偶联形成的复合物。
5.根据权利要求4所述的用于检测抗原的化学发光试剂盒,其特征在于,所述链酶亲和素与直接发光剂形成的复合物中的“直接发光剂”,为吖啶酯类化学发光剂;
6.根据权利要求1所述的用于检测抗原的化学发光试剂盒,其特征在于,所述
7.根据权利要求1~6任一所述的用于检测抗原的化学发光试剂盒,其特征在于,当检测抗原具体为GP73时:
8.根据权利要求1~6任一所述的用于检测抗原的化学发光试剂盒,其特征在于,当检测抗原具体为CKMB时:
9.一种如权利要求1~8任一所述的用于检测抗原的化学发光试剂盒的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
10.一种利用如权利要求1~8任一所述的用于检测抗原的化学发光试剂盒进行抗原检测的化学发光免疫分析方法,其特征在于,包括如下步骤:
...【技术特征摘要】
1.一种用于检测抗原的化学发光试剂盒,其特征在于,包括试剂r1、试剂r2、试剂r3和试剂r4;
2.根据权利要求1所述的用于检测抗原的化学发光试剂盒,其特征在于,所述试剂r1的组分中:待测抗原抗体1选择兔源、鼠源或羊源抗体;strepii标签修饰的待测抗原抗体2选择人源、兔源、鼠源或羊源抗体,但与所述待测抗原抗体1不同源。
3.根据权利要求1所述的用于检测抗原的化学发光试剂盒,其特征在于,所述试剂r2的组分中,抗体3包被的磁性微粒复合物的制备方法如下:
4.根据权利要求1所述的用于检测抗原的化学发光试剂盒,其特征在于,所述试剂r3的组分中,链霉亲和素-化学发光物偶联复合物选择链酶亲和素与直接发光剂形成的复合物、链酶亲和素与酶促化学发光中的酶偶联形成的复合物,或者,链酶亲和素与电化学发光剂偶联形成的复合物。
5.根据权利要求4...
【专利技术属性】
技术研发人员:周伟,李燕华,鲍文英,刘浩,孔令来,游遇兰,林亭亭,芮双印,
申请(专利权)人:安徽千诚生物技术有限公司,
类型:发明
国别省市:
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