抗c-MET纳米抗体、编码核酸及其应用制造技术

本发明专利技术公开了抗c

【技术实现步骤摘要】
抗c
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MET纳米抗体、编码核酸及其应用
[0001]本申请为申请号：202210328624.0，申请日：2022
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03
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30，专利技术名称：抗c
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MET纳米抗体、编码核酸及其应用的分案申请。


[0002]本专利技术属于基因工程
，特别是涉及一种抗c
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MET纳米抗体、编码核酸及其应用。

技术介绍

[0003]Hamers
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Casterman等在骆驼血清中发现了缺失轻链和重链恒定区CH1，只包含一个重链可变区和其他两个重链恒定区(CH2、CH3)的纳米抗体(nanobody，Nb)，又被称为VHH(variable domain of heavy chain of heavy chain antibody，VHH)，纳米抗体由于其高水溶性、穿透力强等特性，在基因工程中得到广泛应用。
[0004]c
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MET是一种表达于多种细胞表面的受体酪氨酸激酶，在肝癌、肺癌、结肠癌、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌、前列腺癌、胃癌和胶质母细胞瘤等肿瘤细胞存在高表达，且c
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MET的高表达与促进癌症的发生和发展直接相关，这使c
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MET成为癌症靶向治疗的重要靶点，抗体药物由于其靶向性好、副作用小的优势，在肿瘤相关抗原的靶向治疗中发挥着强大的功能，但现有抗c
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MET单克隆抗体制备技术复杂，生产成本高；单克隆抗体的热稳定差且在体免疫原性强，不适合用于肿瘤诊断和成像研究的靶向分子。

技术实现思路

[0005]本专利技术实施例的目的在于提供一种抗c
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MET纳米抗体，较传统抗体具有高水溶性、高耐性、高稳定性、高抗原结合性、低免疫原性以及较强的组织穿透力，所述纳米抗体的原核表达量高，能够特异性靶向c
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MET蛋白，亲和力高。
[0006]本专利技术实施例的目的还在于提供一种抗c
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MET纳米抗体的编码核酸及其应用。
[0007]本专利技术所采用的技术方案是，抗c
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MET纳米抗体，所述纳米抗体包含SEQ ID NO:8所示的FR1、SEQ ID NO:9所示的CDR1、SEQ ID NO:10所示的FR2、SEQ ID NO:11所示的CDR2、SEQ ID NO:12所示的FR3、SEQ ID NO:13所示的CDR3、SEQ ID NO:14所示的FR4；
[0008]或：SEQ ID NO:15所示的FR1、SEQ ID NO:16所示的CDR1、SEQ ID NO:17所示的FR2、SEQ ID NO:18所示的CDR2、SEQ ID NO:19所示的FR3、SEQ ID NO:20所示的CDR3、SEQ ID NO:21所示的FR4；
[0009]或：SEQ ID NO:22所示的FR1、SEQ ID NO:23所示的CDR1、SEQ ID NO:24所示的FR2、SEQ ID NO:25所示的CDR2、SEQ ID NO:26所示的FR3、SEQ ID NO:27所示的CDR3、SEQ ID NO:28所示的FR4；
[0010]或：SEQ ID NO:29所示的FR1、SEQ ID NO:30所示的CDR1、SEQ ID NO:31所示的FR2、SEQ ID NO:32所示的CDR2、SEQ ID NO:33所示的FR3、SEQ ID NO:34所示的CDR3、SEQ ID NO:35所示的FR4；
[0011]或：SEQ ID NO:36所示的FR1、SEQ ID NO:37所示的CDR1、SEQ ID NO:38所示的FR2、SEQ ID NO:39所示的CDR2、SEQ ID NO:40所示的FR3；
[0012]或：SEQ ID NO:41所示的FR1、SEQ ID NO:42所示的CDR1、SEQ ID NO:43所示的FR2、SEQ ID NO:44所示的CDR2、SEQ ID NO:45所示的FR3、SEQ ID NO:46所示的CDR3、SEQ ID NO:47所示的FR4；
[0013]或：SEQ ID NO:48所示的FR1、SEQ ID NO:49所示的CDR1、SEQ ID NO:50所示的FR2、SEQ ID NO:51所示的CDR2、SEQ ID NO:52所示的FR3、SEQ ID NO:53所示的CDR3、SEQ ID NO:54所示的FR4。
[0014]进一步的，所述纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7所示。
[0015]抗c
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MET的纳米抗体的制备方法，包括以下步骤：
[0016]使用c
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MET抗原免疫羊驼，提取羊驼外周淋巴血中的总RNA，通过RT
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PCR扩增抗体，将扩增产物插入噬菌体得到噬菌体展示库；
[0017]使用c
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MET蛋白从噬菌体展示库中淘选抗c
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MET的纳米抗体，使用ELISA筛选阳性单克隆抗体，对其进行测序得到纳米抗体序列。
[0018]一种编码核酸，用于编码权利要求1或2所述的纳米抗体。
[0019]一种编码核酸，具有SEQ ID NO:55～SEQ ID NO:61任一所示的核酸序列。
[0020]一种表达载体，包含上述的编码核酸。
[0021]一种宿主细胞，包含上述的编码核酸或表达载体。
[0022]纳米抗体在c
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MET分子检测试剂、活体成像探针和/或治疗性抗体的用途。
[0023]本专利技术的有益效果是：本专利技术实施例使用重组c
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MET蛋白免疫羊驼，随后利用该羊驼外周血淋巴细胞建立了针对于c
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MET的纳米抗体基因库，试验中将c
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MET偶联在酶标板上，以此形式的抗原利用噬菌体展示技术筛选免疫性的纳米抗体基因库(羊驼重链抗体噬菌体展示基因库)，从而获得了针对c
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MET特异性的纳米抗体基因，将此基因转至大肠杆菌中，建立了能在大肠杆菌中高效表达的纳米抗体株，所述纳米抗体的原核表达量高，具有高水溶性、高耐性、高稳定性、高抗原结合性、低免疫原性以及较强的组织穿透力，且能够特异性靶向c
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MET蛋白，亲和力高，所述纳米抗体与IR
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808染料偶联后，用于活体成像探针及食管鳞癌细胞EC109的在体成像，效果良好。
附图说明
[0024]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.抗c
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MET的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体包含SEQ ID NO:29所示的FR1、SEQ ID NO:30所示的CDR1、SEQ ID NO:31所示的FR2、SEQ ID NO:32所示的CDR2、SEQ ID NO:33所示的FR3、SEQ ID NO:34所示的CDR3、SEQ ID NO:35所示的FR4；或：SEQ ID NO:48所示的FR1、SEQ ID NO:49所示的CDR1、SEQ ID NO:50所示的FR2、SEQ ID NO:51所示的CDR2、SEQ ID NO:52所示的FR3、SEQ ID NO:53所示的CDR3、SEQ ID NO:54所示的FR4。2.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐欣怡，刘思婷，陈雪利，曾琦，谢晖，任胜寒，
申请(专利权)人：西安电子科技大学，
类型：发明
国别省市：