肠道病毒７１型、柯萨奇病毒Ａ１６型和肠道病毒其它各亚型三色荧光ＲＴ－ＰＣＲ联合检测方法及其试剂盒技术

本发明专利技术提供了肠道病毒７１型、柯萨奇病毒Ａ１６型和肠道病毒其它各亚型三色荧光ＲＴ－ＰＣＲ联合检测方法及其试剂盒，快速准确的检测出样品中肠道病毒７１型、柯萨奇病毒Ａ１６型和肠道病毒其它各亚型核酸的方法。该方法包括：（１）采集和运送感染或疑似病人样本；（２）样本预处理和提取ＲＮＡ；（３）一步ＰＣＲ－三色荧光探针体外扩增法对样本进行检测；（４）扩增反应结束后根据每个扩增反应的荧光强度对相应样本进行分析，从而判断所采集的样本中肠道病毒７１型、柯萨奇病毒Ａ１６型和肠道病毒其它各亚型核酸的存在，并能够对对其进行准确定量（图３），实现了对该类病毒实时快速精确联合检测之目的。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种肠道病毒７１型、柯萨奇病毒Ａ１６型和肠道病毒其它各亚型三色荧光ＲＴ－ＰＣＲ联合检测方法及其试剂盒，从Ｇｅｎｂａｎｋ下载所有肠道病毒的基因序列，经过生物信息学分析，反复比对，选择如下区域作为扩增肠道病毒７１型（ＥＶ７１）、柯萨奇病毒Ａ１６型（ＣＡＶ１９）和肠道病毒其它各亚型（ＥＶ－Ｕ）的特异性目标区域：　　（１）肠道病毒７１型（ＥＶ７１）上游引物：　　５’－ＧＣＧＴＴＴＴＧＡＣＧＣＡＧＡＧＴＴＣＡ－３’（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．１）　　（２）肠道病毒７１型（ＥＶ７１）下游引物：５’－ＧＧＡＧＣＡＡＴＴＧＣＧＧＧＡＣＡＡ－３’（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．２）　　（３）肠道病毒７１型（ＥＶ７１）荧光探针序列：　　５’－ＣＴＴＴＧＴＴＧＣＡＴＧＣＡＣＣＣＣＴＡＣＣＧＧ－－３’（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．３）　　（４）柯萨奇病毒Ａ１６型（ＣＡＶ１６）上游引物：　　５’－ＧＧＧＡＣＣＧＧＧＡＡＴＧＡＡＡＡＴＴＣ－３’（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．４）　　（５）柯萨奇病毒Ａ１６型（ＣＡＶ１６）下游引物：　　５’－ＡＴＧＣＧＴＣＡＧＡＡ／ＧＣＴＧＣＡＣＣＡ／Ｇ－３’（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．５）　　（６）柯萨奇病毒Ａ１６型（ＣＡＶ１６）荧光探针序列：　　５’－ＴＣＣＴＣＣＣＴＡＣＧＣＣＡＣＴＡＣＡＣＡＧＣＣＴＧ－３’（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．６）　　（７）肠道病毒各亚型（ＥＶ－Ｕ）上游引物：　　５’－ＡＧＣ／ＴＧＧＧＴＡ／ＧＧＴＧＴＧＴＣＧＴＡＡＣＧ－３’（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．７）　　（８）肠道病毒各亚型（ＥＶ－Ｕ）下游引物：　　５’－ＴＣＡＣＣＡＴＡＡＧＣＡＧＣＣＡＡ／ＧＴＡＴＡＡ／Ｔ－３’（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．８）　　（９）肠道病毒各亚型（ＥＶ－Ｕ）荧光探针序列：　　５’－ＴＡＡＣＴＣＴＧＣＡＧＣＧＧＡＡＣＣＧＡＣＴＡＣＴＴ－３’（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ．９）。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：史成军，任美峰，徐贵峰，刘健翊，
申请(专利权)人：北京索奥生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]