一种血液组织细胞基因组DNA提取试剂盒及提取方法技术

本发明专利技术公开了一种血液组织细胞基因组DNA提取试剂盒及提取方法，该血液组织细胞基因组DNA提取试剂盒包括裂解液、洗涤液、洗脱液、磁珠悬液、蛋白酶K溶液；本发明专利技术所制备的血液组织细胞基因组DNA提取试剂盒提高了提取的纯度，并且同时提高了血液组织细胞总DNA提取的总量，提取速度快，有利于临床诊断工作效率的提高，所提取的DNA可开展后续的分子生物学分析：如基因克隆、测序、荧光定量检测等。荧光定量检测等。荧光定量检测等。

【技术实现步骤摘要】
一种血液组织细胞基因组DNA提取试剂盒及提取方法


[0001]本专利技术属于DNA提取
，分类号为C12N15/10，具体的，涉及一种血液组织基因组DNA提取试剂盒及提取方法。

技术介绍

[0002]脱氧核糖核酸，英文译名为DNA，是染色体的重要组成部分。DNA是相当重要的生物信息分子，可组成遗传指令，进而引导生物发育与生命机能运作，其主要的功能是贮存决定物种形状的几乎所有蛋白质和RNA分子的全部遗传信息。
[0003]目前，基因组DNA分离纯化常用的方法有SDS抽提法、苯酚抽提法、氯仿抽提法、高盐沉淀法、离子交换法和硅介质选择性吸附法等。但是这些方法的提取效率较低，往往需要使用大量的样品才能够得到足够的DNA，不仅浪费了时间和资源，而且可能会导致实验结果不准确，并且操作较繁琐，容易出错，进而影响提取DNA的浓度和纯度，此外，这些方法还存在一定的安全风险，容易造成工作环境的污染和安全事故。
[0004]综上所述，现有技术在DNA提取方面仍然存在一些缺点，因此需要在提高提取效率和纯度，简化操作步骤，降低安全风险等方面进行改进以适应更广泛的需求。
[0005]中国专利CN109913445B公开了一步洗涤磁珠法血液DNA提取试剂盒，在裂解液、结合液、蛋白酶K溶液、洗涤液以及洗脱缓冲液的共同作用下，得到提取的DNA浓度最高仅为23.146ng/μL，A 260/280仅为1.784，并未达到纯度最优的范围1.8
‑
2.0之间，因此该DNA提取液的纯度和浓度都需要进一步提高。<br/>[0006]中国专利CN109022420B公开了一种基于磁珠的DNA提取方法、裂解液及试剂盒，主要是采用聚乙二醇代替异丙醇作为结合剂，减少了加液操作步骤，提高了实验的安全性能，但是提取过程中DNA的纯度较高，但并未提高DNA提取液的浓度，没有达到DNA的浓度较高，且纯度高的技术效果。

技术实现思路

[0007]为了解决上述问题，本专利技术的第一个方面提供了一种血液组织细胞基因组DNA提取试剂盒，包括裂解液、洗涤液、洗脱液、磁珠悬液、蛋白酶K溶液。
[0008]进一步优选的，所述洗涤液中包括10mM Tris
‑
HCl(pH为7.5)和质量分数为80％的异丙醇，所述洗脱液为质量分数为80％的乙醇，所述磁珠的种类为超顺磁性氧化硅纳米磁性微珠，所述蛋白酶K溶液中包括稀释缓冲液和蛋白酶K，所述稀释缓冲液为20mM Tris
‑
HCl(pH为7.4)和1mM氯化钙，所述蛋白酶K溶液是稀释缓冲液和一定浓度的蛋白酶K混合而成。
[0009]优选的，所述蛋白酶K溶液中蛋白酶K的浓度为50
‑
100μg/mL。
[0010]进一步优选的，所述蛋白酶K溶液中蛋白酶K的浓度为60
‑
80μg/mL。
[0011]进一步优选的，所述蛋白酶K溶液中蛋白酶K的浓度为70μg/mL。
[0012]优选的，所述裂解液中的成分包括：Tris
‑
HCl，NaCl，蛋白酶抑制剂，Triton
‑
X100，表面活性剂，所述裂解液的pH值为7
‑
8。
[0013]进一步优选的，所述裂解液中的成分包括：50mM Tris
‑
HCl(pH为7.4)，150mM NaCl，蛋白酶抑制剂，1％Triton
‑
X100，0.1％表面活性剂，所述裂解液的pH值为7.4。
[0014]进一步优选的，所述表面活性剂为十二烷基磺酸钠。
[0015]优选的，所述蛋白酶抑制剂包括PMSF(苯甲基磺酰氟)、Leupeptin(亮抑蛋白酶肽)、Aprotinin(胰蛋白酶抑制剂)、Pepstatin(天冬氨酸蛋白酶抑制剂)、EDTA、AEBSF(丝氨酸蛋白酶抑制剂)、乌苯美司、胃酶抑素中的至少一种。
[0016]PMSF(苯甲基磺酰氟)、Leupeptin(亮抑蛋白酶肽)、Aprotinin(胰蛋白酶抑制剂)、Pepstatin(天冬氨酸蛋白酶抑制剂)、EDTA、AEBSF(丝氨酸蛋白酶抑制剂)为本领域公知的，购买厂家没有限制。
[0017]进一步优选的，所述蛋白酶抑制剂包括PMSF、Leupeptin、Aprotinin和EDTA。
[0018]进一步优选的，所述裂解液中的蛋白酶抑制剂包括0.5
‑
1.5mM PMSF，20mM EDTA，5μg/mL Aprotinin，5μg/mL Leupeptin。
[0019]进一步优选的，所述裂解液中的蛋白酶抑制剂包括1mM PMSF，20mM EDTA，5μg/mL Aprotinin，5μg/mL Leupeptin。
[0020]优选的，所述裂解液中还包括阴离子去垢剂。
[0021]优选的，所述阴离子去垢剂为十二烷基磺酸钠和/或脱氧胆酸钠。
[0022]优选的，所述阴离子去垢剂为脱氧胆酸钠。
[0023]优选的，所述脱氧胆酸钠的质量分数为0.5
‑
2％。
[0024]进一步优选的，所述脱氧胆酸钠的质量分数0.5
‑
1.5％。
[0025]进一步优选的，所述脱氧胆酸钠的质量分数为1％。
[0026]本专利技术第二方面提供了一种血液组织细胞基因组DNA提取试剂盒的提取方法，包括步骤如下：(1)裂解；(2)结合；(3)洗涤；(4)洗脱；(5)干燥。
[0027]进一步优选的，所述血液组织细胞基因组DNA提取试剂盒的提取方法，包括步骤如下：
[0028](1)裂解；取抗凝血液于离心管中，加入蛋白酶K溶液和裂解液，在涡旋振荡器中旋涡震荡5
‑
15s后，在50
‑
60℃下反应3
‑
10min得到第一悬浊液；
[0029](2)结合；在第一悬浊液里再加入300
‑
400μL的异丙醇和15
‑
25μL的磁珠悬液，再以涡旋振荡器旋涡震荡5
‑
15min，之后将离心管置于磁性分离器上放置1
‑
5min，最后用移液器移去上清液后再小心吸尽残液。
[0030](3)洗涤；在步骤(2)完成后，继续加入500
‑
700μL的洗涤液，在涡旋振荡器中旋涡震荡1
‑
5min后，使得磁珠充分重悬，再将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清，移去上清液后取下离心管，之后再重复该步骤一次。
[0031](4)洗脱；在步骤(3)完成后，加入500
‑
700μL洗脱液，在涡旋振荡器中旋涡震荡1
‑
2min后，使得磁珠充分重悬，将离心管置于磁性分离器上直至溶液澄清，移去上清液并取下离心管，之后重复该步骤一次。
[0032](5)干燥。将离心管在磁性分离器上静置5
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种血液组织细胞基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，包括裂解液、洗涤液、洗脱液、磁珠悬液、蛋白酶K溶液。2.根据权利要求1所述的一种血液组织细胞基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，所述蛋白酶K溶液中蛋白酶K的浓度为50
‑
100μg/mL。3.根据权利要求1所述的一种血液组织细胞基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，所述裂解液中的成分包括：Tris
‑
HCl，NaCl，蛋白酶抑制剂，Triton
‑
X100，表面活性剂，所述裂解液的pH值为7
‑
8。4.根据权利要求3所述的一种血液组织细胞基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，所述蛋白酶抑制剂包括PMSF、Leupeptin、Aprotinin、Pepstatin、EDTA、AEBSF、乌苯美司、胃酶抑素中的至少一种。5.根据权利要求3所述的一种血液组织细胞基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，所述裂解液中还包括阴离子去垢剂。6.根据权利要求5所述的一种血液组织细胞基因组DNA...

【专利技术属性】
技术研发人员：许金超，栗红建，张丹，李永锋，刘丽美，张伟男，蔡宇卿，郭彬彬，
申请(专利权)人：江苏谱新生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：