抗SIRPα单克隆抗体及其用途制造技术

提供了对信号调节蛋白α(SIRPα)蛋白的变体1和变体2两者都具有结合特异性的抗体或其片段。该抗体和片段可以剂量依赖性地有效阻断SIRPα与CD47之间的相互作用，并有效诱导巨噬细胞介导的对表达CD47的肿瘤细胞的吞噬作用。用。

【技术实现步骤摘要】
抗SIRP
α
单克隆抗体及其用途
[0001]本申请是申请日2020年12月24日、申请号202080045429.6、专利技术名称为“抗SIRPα单克隆抗体及其用途”的专利技术专利申请的分案申请。

技术介绍

[0002]信号调节蛋白α(SIRPα)是信号调节蛋白(SIRP)家族的成员，也属于免疫球蛋白超家族。SIRP家族成员是已知参与受体酪氨酸激酶偶联信号传导过程的负调节的受体型跨膜糖蛋白。SIRPα可以被酪氨酸激酶磷酸化。已证明该PTP的磷酸化酪氨酸残基可以募集含有酪氨酸磷酸酶(PTP)的SH2结构域，并作为PTP的底物。SIRPα被发现参与由各种生长因子受体介导的信号转导。已证明CD47是一种配体。SIRPα与SIRP家族的其他几个成员具有非常高的相似性。SIRPα主要由髓细胞表达，也由干细胞或神经元表达。
[0003]SIRPα作为抑制性受体，与广泛表达的跨膜蛋白CD47相互作用，也称为“不要吃我”信号。这种相互作用消极地控制先天免疫细胞的效应功能，如宿主细胞吞噬作用。SIRPα在巨噬细胞膜上横向扩散并聚集在吞噬突触处，与CD47结合并发出“自我”信号，从而抑制巨噬细胞的细胞骨架密集型吞噬过程。
[0004]CD47连接后，SIRPα被磷酸化并募集磷酸酶，如SHP1和SHP2。胞外区含有三个免疫球蛋白超家族结构域——单个V集(V
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set)和两个C1集(C1
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set)的IgSF结构域。SIRPβ和γ具有相似的细胞外结构，但不同的胞质区产生不同类型的信号。<br/>[0005]SIRPα识别CD47，这是一种区分活细胞和垂死细胞的抗吞噬信号。SIRPα的细胞外结构域与CD47结合，通过其细胞质结构域传递细胞内信号。CD47结合是通过SIRPα的NH2末端V样结构域介导的。胞质区含有四个ITIM，与配体结合后会被磷酸化。磷酸化介导了酪氨酸激酶SHP2的激活。SIRPα还与磷酸酶SHP1、衔接蛋白SCAP2和FYN结合蛋白结合。SHP磷酸酶向膜的募集导致肌球蛋白在细胞表面积累的抑制，并导致吞噬作用的抑制。
[0006]癌细胞高度表达CD47，激活SIRPα并抑制巨噬细胞介导的破坏。已证明拮抗癌细胞上CD47的SIRPα的高亲和力变体增加了癌细胞的吞噬作用。抗SIRPα抗体也已被证明可在单独或与其他癌症治疗的协同作用下帮助巨噬细胞减少癌症的生长和转移。

技术实现思路

[0007]本文发现的抗SIRPα抗体对变体v1和v2都具有高亲和力，可以剂量依赖性地有效阻断SIRPα与CD47之间的相互作用，并有效诱导巨噬细胞介导的对表达CD47的细胞的吞噬作用。相比之下，已知的抗SIRPα抗体只能识别变体1。
[0008]根据本公开的一个实施方案，提供了一种与野生型人信号调节蛋白α(SIRPα)蛋白具有结合特异性的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含重链互补决定区CDRH1、CDRH2和CDRH3，所述轻链可变区包含互补决定区CDRL1、CDRL2和CDRL3，并且其中(a)所述CDRH1包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列，所述CDRH2包含SEQ ID NO:16、21或22的氨基酸序列，所述CDRH3包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列，所述CDRL1包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列，所述CDRL2包含SEQ ID NO:19的氨基酸序
ID NO:31、36、37或38的氨基酸序列，所述CDRH3包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列，所述CDRL1包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，所述CDRL2包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列，并且所述CDRL3包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列。
[0014]在一些实施方案中，所述重链可变区包含选自由SEQ ID NO:3和39
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44组成的组的氨基酸序列，或与选自由SEQ ID NO:3和39
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44组成的组的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的肽。
[0015]在一些实施方案中，所述轻链可变区包含选自由SEQ ID NO:4和45
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46组成的组的氨基酸序列，或与选自由SEQ ID NO:4和45
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46组成的组的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的肽。
[0016]在一些实施方案中，所述重链可变区包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列。
[0017]又一个实施方案提供了一种与野生型人信号调节蛋白α(SIRPα)蛋白具有结合特异性的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含重链互补决定区CDRH1、CDRH2和CDRH3，所述轻链可变区包含互补决定区CDRL1、CDRL2和CDRL3，并且其中所述CDRH1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，所述CDRH2包含SEQ ID NO:48、53或54的氨基酸序列，所述CDRH3包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列，所述CDRL1包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列，所述CDRL2包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列，并且所述CDRL3包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列。
[0018]在一些实施方案中，所述重链可变区包含选自由SEQ ID NO:5和55
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60组成的组的氨基酸序列，或与选自由SEQ ID NO:5和55
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60组成的组的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的肽。
[0019]在一些实施方案中，所述轻链可变区包含选自由SEQ ID NO:6和61
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62组成的组的氨基酸序列，或与选自由SEQ ID NO:6和61
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62组成的组的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的肽。
[0020]在一些实施方案中，本公开的抗体或片段可以结合SIRPα变体1和变体2。在一些实施方案中，所述抗体或片段是人源化的。在一些实施方案中，本公开的抗体或片段进一步具有对第二靶蛋白的结合特异性。
[0021]在一些实施方案中，还提供了包含所述抗体或其片段以及药学上可接受的载体的组合物。在一些实施方案中，所述组合物进一步包含对肿瘤抗原具有特异性的第二抗体。在一些实施方案中，所述第二抗体是一种肿瘤调理抗体(tumor
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opsonizing antibody)。
[0022]还提供了治疗疾病和病症的方法和用途。在一个实施方案中，提供了一种在有需要的患者中治疗癌症的方法，包括向所述患者施用本公开的所述抗体或其片段。
附图说明
[0023]图1显示了抗体与SIRPαv1和v2的交叉结合。
[0024]图2显示了抗体对SIRPαv1的结合亲和力。
[0025]图3显示了抗体对SIRPα与CD47相互作用的竞争。
[0026]图4显示了抗本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种与野生型人信号调节蛋白α(SIRPα)蛋白具有结合特异性的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含重链互补决定区CDRH1、CDRH2和CDRH3，所述轻链可变区包含互补决定区CDRL1、CDRL2和CDRL3，并且其中：(a)所述CDRH1包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列，所述CDRH2包含SEQ ID NO:16、21或22的氨基酸序列，所述CDRH3包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列，所述CDRL1包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列，所述CDRL2包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列，并且所述CDRL3包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列；(b)所述CDRH1包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列，所述CDRH2包含SEQ ID NO:31、36、37或38的氨基酸序列，所述CDRH3包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列，所述CDRL1包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，所述CDRL2包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列，并且所述CDRL3包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列；(c)所述CDRH1包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列，所述CDRH2包含SEQ ID NO:48、53或54的氨基酸序列，所述CDRH3包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列，所述CDRL1包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列，所述CDRL2包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列，并且所述CDRL3包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列；(d)所述CDRH1包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列，所述CDRH2包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列，所述CDRH3包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列，所述CDRL1包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列，所述CDRL2包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列，并且所述CDRL3包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列；(e)所述CDRH1包含SEQ ID NO:77的氨基酸序列，所述CDRH2包含SEQ ID NO:78的氨基酸序列，所述CDRH3包含SEQ ID NO:79的氨基酸序列，所述CDRL1包含SEQ ID NO:80的氨基酸序列，所述CDRL2包含SEQ ID NO:81的氨基酸序列，并且所述CDRL3包含SEQ ID NO:82的氨基酸序列；(f)所述CDRH1包含SEQ ID NO:91的氨基酸序列，所述CDRH2包含SEQ ID NO:92的氨基酸序列，所述CDRH3包含SEQ ID NO:93的氨基酸序列，所述CDRL1包含SEQ ID NO:94的氨基酸序列，所述CDRL2包含SEQ ID NO:95的氨基酸序列，并且所述CDRL3包含SEQ ID NO:96的氨基酸序列；或者(g)所述CDRH1包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列，所述CDRH2包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列，所述CDRH3包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列，所述CDRL1包含SEQ ID NO:106的氨基酸序列，所述CDRL2包含SEQ ID NO:107的氨基酸序列，并且所述CDRL3包含SEQ ID NO:108的氨基酸序列。2.一种与野生型人信号调节蛋白α(SIRPα)蛋白具有结合特异性的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含重链互补决定区CDRH1、CDRH2和CDRH3，所述轻链可变区包含互补决定区CDRL1、CDRL2和CDRL3，并且其中所述CDRH1包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列，所述CDRH2包含SEQ ID NO:16、21或22的氨基酸序列，所述CDRH3包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列，所述CDRL1包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列，所述CDRL2包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列，并且所述CDRL3包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列。3.根据权利要求2所述的抗体或其片段，其中所述重链可变区包含选自由SEQ ID NO:1
和23
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27组成的组的氨基酸序列，或与选自由SEQ ID NO:1和23
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27组成的组的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的肽。4.根据权利要求2或3所述的抗体或其片段，其中所述轻链可变区包含选自由SEQ ID NO:2和28
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29组成的组的氨基酸序列，或与选自由SEQ ID NO:2和28
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29组成的组的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的肽。5.根据权利要求2所述的抗体或其片段，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：李润生，
申请(专利权)人：礼新医药科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：