抗细胞外囊泡膜蛋白PD-L1的抗体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种抗细胞外囊泡膜蛋白PD

【技术实现步骤摘要】
抗细胞外囊泡膜蛋白PD
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L1的抗体及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于免疫学检验领域，具体涉及一种抗细胞外囊泡膜蛋白PD
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L1的抗体及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]细胞外囊泡(Extracellularvesicles，EVs)是细胞分泌的膜性小泡，携带母细胞的特征性分子，并可将这些生物活性分子传递给受体细胞发挥生物学功能，广泛参与机体多种病理生理过程。由于细胞外囊泡携带的生物信息分子来自母体细胞，因此检测细胞外囊泡中的生物分子，可以反映母细胞的特征和状态，而这正是基于细胞外囊泡的液体活检的理论基础。
[0003]近年来免疫治疗的兴起为晚期恶性肿瘤患者带来了希望，其中，针对免疫检查点程序性凋亡配体
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1/程序性死亡受体
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1(PD
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L1/PD
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1)通路的抑制剂是目前肿瘤免疫治疗的代表性药物。尽管PD
‑
L1/PD
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1免疫治疗疗效显著，甚至可以完全消除肿瘤达到治愈效果，但PD
‑
L1/PD
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1免疫治疗并非对每一个患者都有效。临床试验结果表明，仅有不到30％的患者能够从PD
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L1/PD
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1免疫治疗中获益。因此，寻找能够在治疗早期预测免疫治疗疗效的生物标志物是当务之急。最新的研究发现，在肿瘤进展以及免疫治疗的不同阶段，肿瘤患者外周血中的肿瘤细胞来源的细胞外囊泡携带的PD
‑
L1水平呈现有规律的动态变化。因此，定量检测肿瘤患者体液(尤其是外周血)中肿瘤细胞外囊泡携带的PD
‑
L1水平，将有望成为预测恶性肿瘤进展、预后以及免疫治疗疗效的液体活检的新标志物。

技术实现思路

[0004]为了检测肿瘤细胞分泌的细胞外囊泡膜蛋白PD
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L1，本专利技术向肿瘤细胞中导入PD
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L1过表达质粒，促使肿瘤细胞过表达PD
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L1，并分泌膜上负载PD
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L1蛋白的细胞外囊泡；利用细胞外囊泡膜蛋白PD
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L1(以下简称Exo
‑
PD
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L1)免疫动物，获得分泌抗细胞外囊泡膜蛋白PD
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L1抗体的淋巴结细胞，将淋巴结细胞与肿瘤细胞融合，筛选出稳定表达抗细胞外囊泡膜蛋白PD
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L1抗体(以下简称Exo
‑
PD
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L1抗体)、且亲和性好的融合细胞，将融合细胞注入动物腹腔，提取腹水进行纯化，获得特异性、亲和力的抗细胞外囊泡膜蛋白PD
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L1抗体。
[0005]本专利技术提供的技术方案具体如下：
[0006]第一方面，本专利技术提供一种抗细胞外囊泡膜蛋白PD
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L1的抗体，其重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.1，其轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.2。
[0007]第二方面，本专利技术提供一种核酸分子，其包含能够编码上述抗细胞外囊泡膜蛋白PD
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L1的抗体的重链可变区或轻链可变区的核酸序列。
[0008]第三方面，本专利技术提供一种载体，其含有上述核酸分子。
[0009]第四方面，本专利技术提供一种宿主细胞，该宿主细胞含有上述抗细胞外囊泡膜蛋白PD
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L1的抗体、上述核酸分子或含有上述载体。
[0010]第五方面，本专利技术提供一种用于检测细胞外囊泡膜蛋白PD
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L1的试剂盒，其含有上
述抗细胞外囊泡膜蛋白PD
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L1的抗体。
[0011]第六方面，本专利技术提供上述抗细胞外囊泡膜蛋白PD
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L1的抗体、上述核酸分子或含有上述载体、上述宿主细胞、上述偶联物在制备治疗疾病的药物或检测试剂中的应用。
[0012]第七方面，本专利技术提供一种制备上述抗细胞外囊泡膜蛋白PD
‑
L1的抗体的方法，包括以下步骤：
[0013]用膜上负载PD
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L1蛋白的载体对动物进行免疫，获得能分泌抗细胞外囊泡膜蛋白PD
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L1的抗体的细胞；所述载体为脂质体或细胞外囊泡；
[0014]利用所得细胞生产抗细胞外囊泡膜蛋白PD
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L1的抗体。
[0015]在上述技术方案的基础上，利用所得细胞生产抗细胞外囊泡膜蛋白PD
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L1的抗体包括：
[0016]将所得细胞与骨髓瘤细胞融合成杂交瘤细胞株；
[0017]从杂交瘤细胞株中筛选出特异性和亲和力好的单克隆细胞株；
[0018]将筛选出的单克隆细胞株注入动物腹腔，待动物腹部明显膨大时，提取腹水，纯化，获得上述抗细胞外囊泡膜蛋白PD
‑
L1的抗体。
[0019]在上述技术方案的基础上，利用所得细胞生产抗细胞外囊泡膜蛋白PD
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L1的抗体包括：
[0020]对将所得细胞进行测序，从单个B细胞中提取RNA，进行PCR扩增；
[0021]对扩增产物进行高通量测序分析，利用筛选出的RNA生产抗细胞外囊泡膜蛋白PD
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L1的抗体。
[0022]在上述技术方案的基础上，膜上负载PD
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L1的载体通过如下方式获得：将PD
‑
L1镶嵌于脂质体膜中，或借助电荷而吸附于脂质体膜上，形成脂质体
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PD
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L1蛋白的复合体，即为膜上负载PD
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L1的载体。
[0023]在上述技术方案的基础上，膜上负载PD
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L1的载体通过如下方式获得：将表达PD
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L1的细胞破碎后，收集细胞膜成分，并利用挤压的方法将细胞膜制备成直径不等的携带PD
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L1的磷脂双层膜结构，即为膜上负载PD
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L1的载体。
[0024]在上述技术方案的基础上，膜上负载PD
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L1的载体通过如下方式获得：将PD
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L1过表达质粒转染入肿瘤细胞中，提取肿瘤细胞上清中的膜上负载PD
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L1的细胞外囊泡膜，即为膜上负载PD
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L1的载体。
[0025]作为上述技术方案的优选，肿瘤细胞为Cal
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27细胞。
[0026]作为上述技术方案的优选，PD
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L1过表达质粒为pLenti
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CD274
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EGFP。
[0027]与现有技术相比，本专利技术具有以下优点和有益效果：
[0028]1、本专利技术提供的抗细胞外囊泡膜蛋白PD
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L1的抗体在检测细胞外囊泡PD
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L1水平中具有本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗细胞外囊泡膜蛋白PD
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L1的抗体，其特征在于：其重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.1，其轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.2。2.根据权利要求1所述的抗细胞外囊泡膜蛋白PD
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L1的抗体，其特征在于：通过细胞外囊泡膜蛋白PD
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L1免疫动物获得。3.一种核酸分子，其特征在于：其包含能够编码权利要求1所述的抗细胞外囊泡膜蛋白PD
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L1的抗体的重链可变区或轻链可变区的核酸序列。4.一种载体，其特征在于：其含有权利要求3所述的核酸分子。5.一种宿主细胞，其特征在于：所述宿主细胞含有权利要求1所述的抗细胞外囊泡膜蛋白PD
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L1的抗体、权利要求3所述的核酸分子或含有权利要求4所述的载体。6.一种用于检测细胞外囊泡膜蛋白PD
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L1的试剂盒，其特征在于：含有权利要求1所述的抗细胞外囊泡膜蛋白PD
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L1的抗体。7.权利要求1所述的抗细胞外囊泡膜蛋白PD
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L1的抗体、权利要求3所述的核酸分子、权利要求4所述的载体、权利要求5所述的宿主细胞、权利要求6所述的试剂盒在制备治疗疾病的药物中的应用。8.一种制备权利要求1所述的抗细胞外囊泡膜蛋白PD

【专利技术属性】
技术研发人员：陈刚，余自力，夏厚福，李立，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
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