一种可溶性B7-H5蛋白含量检测的酶联免疫检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种用于检测分析可溶性B7

【技术实现步骤摘要】
一种可溶性B7
‑
H5蛋白含量检测的酶联免疫检测试剂盒
[0001]本申请是申请日为2021年12月15号，申请号为202111536301.2，专利技术名称为“一种可溶性B7
‑
H5蛋白含量检测的酶联免疫检测试剂盒及其应用”的专利申请的分案申请。


[0002]本专利技术属于生物医学
，具体涉及一种对可溶性B7
‑
H5蛋白含量进行定量分析的酶联免疫检测试剂盒及其用途。

技术介绍

[0003]B7
‑
CD28家族成员介导的共刺激信号在T细胞的活化及免疫耐受的调节中具有重要作用，随着共刺激分子相关功能研究进展，已成为免疫学研究新的热点之一。近年来，研究发现B7
‑
CD28家族成员包括B7
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H1(PD
‑
L1)、B7
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H2(PD
‑
L2)、B7
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H3、B7
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H4、B7H5(VISTA)及B7
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H6等在肿瘤微环境中异常表达，并参与肿瘤免疫逃逸等，对肿瘤的发生发展以及肿瘤病人的预后都起着重要的作用。
[0004]B7
‑
H5是B7家族负性调控分子之一，研究表明，B7
‑
H5在包括结直肠癌、非小细胞肺癌、胃癌等多种恶性肿瘤组织中高水平表达，且与患者的临床分期、预后等密切相关。另外据文献报道B7
‑
H5在关节炎、系统性红斑狼疮、牛皮癣等自身免疫性疾病的发病和进展中发挥关键作用。但目前对于B7
‑
H5的检测还存在检测手段缺乏的问题。

技术实现思路

[0005]为了克服现有技术的上述缺陷，本专利技术提供一种对可溶性B7
‑
H5蛋白含量进行定量分析的酶联免疫检测试剂盒及其用途，从而弥补现有技术的不足。
[0006]本专利技术首先提供一种可以结合B7
‑
H5蛋白的单克隆抗体，所述的单克隆抗体，其中包含有B7
‑
H5
‑
2E5活B7
‑
H5
‑
7B10两种抗人B7
‑
H5单克隆抗体；
[0007]其中所述抗人B7
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H5单克隆抗体B7
‑
H5
‑
2E5抗体，包括重链和轻链，所述B7
‑
H5
‑
2E5的重链可变区(mVH)的氨基酸序列为SEQ ID NO.1：
[0008]DVKLQESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSIASDYTWNWIRQFPGNKLEWMGYIDYSGATFYNPSLKSRISIIRDTSKNQFFLQLNSVTTGDTATYYCTRGFYYYGSDYWGQGTTLTVSS；
[0009]B7
‑
H5
‑
2E5的轻链可变区(mVL)的氨基酸序列为SEQ ID NO.2：
[0010]DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHNNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKINRVEAEDLGVYYCFQGSHVPSTFGGGTKLEIK；
[0011]所述的抗人B7
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H5单克隆抗体为B7
‑
H5
‑
7B10抗体，包括重链和轻链，所述B7
‑
H5
‑
7B10的重链可变区(mVH)的氨基酸序列为SEQ ID NO.3：
[0012]EVQLKQSGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTNHGVQWVRQSPGKGLEWLGVIWGDGNRNYHSALMSRLSINKDNSKSQVFLKLNRLQTDDTATYFCAKERRLGYYGEYDVMDYWGQGTSVTVSS；
[0013]B7
‑
H5
‑
7B10的轻链可变区(mVL)的氨基酸序列为SEQ ID NO.4：
[0014]DIVMTQSHKFMSTSVGDRVTITCKASQGVGTAVAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRHTGVPDRFTGSGSG
TDFTLTIGNVQSEDLADYFCQQYSSSPFTFGSGTKLEIK。
[0015]本专利技术所提供的单克隆抗体用于制备检测可溶性B7
‑
H5蛋白的试剂盒。
[0016]本专利技术另一个方面还提供一种检测可溶性B7
‑
H5含量的酶联免疫检测试剂盒，其中包含有B7
‑
H5
‑
2E5和/或B7
‑
H5
‑
7B10抗人B7
‑
H5单克隆抗体；
[0017]所述的酶联免疫检测试剂盒的用途，是用于检测肿瘤、自身免疫性疾病等患者可溶性B7
‑
H5蛋白含量。
[0018]本专利技术还提供一种非疾病治疗目的的检测肿瘤、自身免疫性疾病患者中可溶性B7
‑
H5蛋白含量的方法。
[0019]本专利技术的酶联免疫试剂盒能够有效检测可溶性B7
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H5含量，利用该试剂盒检测发现，健康人血清中含有一定基础水平的可溶性B7
‑
H5蛋白(～350pg/ml)，结直肠癌、肺癌和胃癌患者血清可溶性B7
‑
H5含量明显升高，与患者的临床分期和病理有相关性，肿瘤患者体液中可溶性B7
‑
H5含量检测具有潜在的临床价值。
附图说明
[0020]图1为本专利技术酶联免疫试剂盒检测样品中可溶性B7
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H5蛋白含量示意图。
[0021]图2：单克隆抗体检测直肠癌、肺癌和胃癌患者血清可溶性B7
‑
H5含量图。
具体实施方式
[0022]下面结合实施例和附图对本专利技术进行详细的描述。
[0023]实施例1：制备抗人B7
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H5单克隆抗体杂交瘤细胞的
[0024]1.1小鼠的免疫
[0025]使用B7
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H5融合重组蛋白免疫BALB/c小鼠五次，前三次间隔时间为21天，在第四次免疫之后5
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7天测定小鼠血液抗体效价，效价较好时则再次进行第五次加强免疫。
[0026]1.2滋养层细胞的培养
[0027]1.2.1在无菌超净台中取出7
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8周BALB/c小鼠的脾脏。在200目无菌筛网中，通过研磨获得单细胞悬液。
[0028]1.2.2单细胞悬液经RPMI
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1640培养基洗涤2次，用适量含15％FBS的RPMI
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1640培养基重悬细胞，使用无菌巴氏玻璃吸管将细胞液均匀滴入9本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗人B7
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H5蛋白的单克隆抗体，其特征在于，所述的单克隆抗体包括重链和轻链，其中的重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.1，轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.2。2.权利要求1所述的单克隆...

【专利技术属性】
技术研发人员：张学光，石通国，黄子逸，张丽，
申请(专利权)人：苏州旭光科星抗体生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：