用于免疫诊断１型糖尿病的组合物制造技术

本发明专利技术涉及用于血清学免疫诊断１型糖尿病的组合物，其包含胰岛β细胞特异的ＩＧＲＰ和ＺｎＴ８抗原，或其与选自常用抗原ＧＡＤ６５和ＩＡ－２的一种或两种的组合。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及自身免疫性1型糖尿病的诊断领域。更具体而言涉及使用源于多种自 身抗原的组合物诊断自身免疫性1型糖尿病的领域。
技术介绍
糖尿病是一种因胰岛素分泌绝对或相对不足而引起的以高血糖症为主要特征的 代谢性疾病，受多种遗传和环境因素影响，这些因素可导致机体不能对碳水化合物、脂肪和 蛋白有效利用。糖尿病危害巨大，主要是其严重的并发症和高死亡率。随着糖尿病得病时间 的延长，体内代谢紊乱如得不到很好的控制，可导致眼、肾、神经、血管、心脏等组织、器官的 慢性并发症，以致最终发生失明、下肢坏疽、尿毒症、脑中风或心肌梗死，甚至危及生命。糖 尿病人死亡率较非糖尿病人高11倍。全球每年死于此病的人数约为400万，占全球总死亡 人数的9%。目前，我国是糖尿病患者最多的三个国家(印度、中国、美国)之一，糖尿病患 者数量已经超过4000万人。此外，尚有数千万的糖调节功能受损者，此类人群成为糖尿病 的庞大“后备军团”。 按照1997年美国糖尿病协会及1999年WHO关于糖尿病(diabetes mellitus, DM)分类及诊断建议标准，DM分为1型糖尿病(TlDM)、2型糖尿病(T2DM)、特殊类型糖尿病 和妊娠糖尿病。TlDM包括自身免疫性(Ia)和特发性(Ib)两大类。自身免疫性糖尿病主 要由于胰岛β细胞自身免疫性破坏，导致胰岛素分泌的绝对不足引起，其特性表现为外周 血中出现针对胰岛β细胞相关分子的自身抗体。1型糖尿病的发病率每年以2. 5%的速 率增长，预测2010年的发病率将比1998年高出40% (Atkinson MA等，The Lancet, 358 221-229(2001))。1型糖尿病的早期预防可分为三期一期是有1型糖尿病发病倾向高危人群，此时 免疫学指标尚未出现。二期是免疫破坏期，此时血清内已有抗胰岛细胞自身抗体出现，是1 型糖尿病预防的关键时期。三期是1型糖尿病发病早期，此时已出现糖尿病症状。因此如 何在免疫破坏期筛检免疫学指标，对于在非糖尿病人群中发现1型糖尿病高危人群具有重 大的意义。在1型糖尿病的免疫破坏期，患者体内会产生多种针对胰岛细胞自身抗原的自身 抗体。自20世纪70年代以来，研究者们已经发现了多种胰岛自身抗体。例如在70年代，首 次发现了胰岛细胞抗体(ICA)和胰岛细胞表面抗体(ICSA)。80-90年代，又相继发现了胰 岛素抗体(IAA)、羧肽酶H抗体、热休克蛋白抗体(HSP)、谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)、蛋白质 酪氨酸磷酸酶抗体(IA-2A、IA-2i3A、ICA69)等。进入21世纪，又陆续发现了热休克蛋白90 自身抗体(hsp90)、胰岛特异的葡萄糖-6-磷酸酶抗体(IGRP)、锌转运子ZnTS抗体(ZnTS) 等。目前，1型糖尿病诊断中最为常用的诊断指标包括ICA、IAA、GADA和IA-2A。胰岛细胞抗体(ICA)是胰岛β细胞的胞浆抗体，属免疫球蛋白，对胰岛细胞的胞 浆成分产生细胞毒效应，为特异性抗体。ICA是一种混合抗体，为抗胰岛β细胞所有抗体的 总称。有文献报道ICA是与全部胰岛细胞(如α、β、Υ、δ禾Π PP细胞)反应的多克隆自 身抗体总称。ICA识别的脂类和蛋白质自身抗原可能包括唾液酸糖缀合物、GAD、IA-2等。大量研究表明，有70% 1型糖尿病患者血清中存在ICA，且存在的时间很短，仅出现在胰岛 炎发生前无高血糖阶段及1型糖尿病的初期，具有随着发病年龄的延长而降低的特性。新 发糖尿病，ICA阳性率为70-90%，ICA随着诊断后逐渐降低，诊断出糖尿病10年后，ICA阳 性率为 5-10%。Jensen R 等(Diabet Med, 24 1221-1228 (2007))的研究发现 ICA 阳性的 1型糖尿病患者初诊后的6年中，ICA阳性率以每年24%的比率下降，而且平均ICA水平也 逐年下降。ICA常常通过运用人、猴或啮齿类胰腺切片进行间接免疫荧光检测。该方法专利技术 于1974年，目前仍然在使用。但由于该方法是检测混合抗体且方法繁琐，受到一定限制，将 来应该有可能被更特异的检测指标和更简单的检测方法所取代。胰岛素是第一个报道的胰岛自身抗原和β细胞特异自身抗原。但检测胰岛素自 身抗体(IAA)应在施用外源胰岛素(动物胰岛素或人胰岛素)之前，因为使用外源胰岛素 治疗 5-7 天后就会产生胰岛素抗体(Barker JM 等，Diabetologia，50 =1603-1606 (2007)) 免疫沉淀试验证明胰岛素自身抗体不能区别自发自身抗体和免疫应答抗体(外源胰岛素 治疗产生的抗体)。此外，在一些其它自身免疫性疾病(包括自身免疫性甲状腺疾病)中 也存在IAA。1型糖尿病初期，IAA在儿童中最早出现存在，而在成人中则降低。在小于5 岁的儿童中，90%的孩子存在IAA ；5-10岁的的儿童中，70%存在IAA ；而10-15岁的的儿童 中，则只有50%存在IAA;在成人中，研究结果一般都以低于40% (Achenbach P等，J Clin Invest, 114(4) :589_597 (2004))，在池莲祥等(中国实验诊断学，9 :406_408 (2005))研究 结果中仅为6. 67%，而且IAA检测易受到胰岛素治疗诱导产生的胰岛素抗体的影响，因此 单独诊断价值不高。人体内有多种形式的胰岛素可能会与免疫系统相互作用，免疫原性最 强的分子可能是胰岛素原和前胰岛素原。IAA表位定位于胰岛素的B链。目前，免疫诊断 用胰岛素诊断IAA多用放射性免疫荧光测定法(RIA)，个别实验室采用酶联免疫吸附测定 (ELISA)方法进行测定。谷氨酸脱羧酶(GAD)是催化谷氨酸脱羧生成Y -氨基丁酸的酶，由分泌Y _氨基 丁酸的神经细胞和非神经组织如胰腺的胰岛β细胞合成的酶。哺乳类动物中GAD有两种 异形体，即GAD65和GAD67，分子量分别为65kD和67kD。两种蛋白质由不同的基因编码，具 有64%的氨基酸同一性。GAD除了在脑内表达外，在胰岛细胞的表达量也可观。人类成熟 胰岛中GAD65表达量大于GAD67，二者在β细胞内含量丰富，且在α细胞内也可检测到。 GAD67和GAD65尽管有高度同源性，但是大多数TlDM病人中的自身抗体反应局限于GAD65 特异性表位，只有11% 18%的病人具有与GAD67共同的表位，没有仅对GAD67反应的抗 体。因此，GAD67不是TlDM中的独立抗原。GAD65抗体可能是具有共同特性的一组抗体，而不是单一抗体。绝大多数抗体识别 GAD65构象表位，不与变性蛋白质反应，所以构象上的完整性对于GADA检测试剂盒非常关 键。已确定的GAD65表位包括氨基端结构域、中间结构域和羧基端结构域，并证明后二者占 主导地位。GADA是继IAA抗体之后出现的自身抗体，12岁以后发病的儿童主要存在GADA， 而且，GADA可能是成人隐匿性1型糖尿病的主要免疫标记物(Palmer JP等，Diabetes, 54Suppl2 :S62-67(2005))。GADA在1型糖尿病发病前期和发病时的阳性率一般很高为 60% _80%，而在2型糖尿病中仅为3. 2%。初诊1型糖尿病患者体内GADA阳性比率会以每 年9%的比率下降，但抗体水本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于血清学免疫诊断１型糖尿病的组合物，其包含ＩＧＲＰ抗原和ＺｎＴ８抗原。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：冯晓燕，张贺秋，宋晓国，王国华，陈坤，朱翠侠，方平，葛海鹏，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所，上海海泰金芯生物分子检测技术有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]