22q11微缺失和/或微重复检测引物组、引物探针组合物、试剂盒及其应用制造技术

本申请涉及一种22q11微缺失和/或微重复检测引物组、引物探针组合物、试剂盒及其应用，其包括具有如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.24所示序列的12对引物P1

【技术实现步骤摘要】
22q11微缺失和/或微重复检测引物组、引物探针组合物、试剂盒及其应用
[0001]本申请要求了申请日为2022年04月15日，申请号为202210394768.6的中国专利申请的优先权，其全部内容通过引用结合在本申请中。


[0002]本专利技术涉及一种检测22q11微缺失和/或微重复的引物组、引物探针组合物、试剂盒及其应用，属于核酸检测


技术介绍

[0003]22q11微缺失/微重复综合征是指22号染色体22q11.21～q11.23微小缺失/重复所造成的临床症候群。一般的发病概率为1/4000，男女发病无差异。这一段缺失/重复因涉及多个遗传性基因，不同的基因异常导致的临床综合征略有差异。主要有：DiGeorge综合征；腭心面综合征(velocardiofacial syndrome，VCFS)；先天性异常面容综合征等。微缺失/微重复的范围大约在1.5Mb至3Mb不一(覆盖基因20
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30个)，一般来说该缺失/重复大部分为新发变异(占94％)，也有部分为遗传性(占6％)。
[0004]该微缺失/微重复综合征最主要临床表现有：心脏缺陷、胸腺发育不全、咽腭闭锁不全伴腭裂、甲状旁腺发育不全版低钙血症、异常面容等。但在生长发育和智力发育方面来说还算是正常的，通常有发育迟缓，身高、体重增长较正常人慢，智商位于正常范围，1/3有说话延迟，少部分有严重智力缺陷，在抽象理解能力方面有困难，解决问题的能力差，学习方面有困难。总体来说，大部分患者发育倾向于正常水平，学习有轻微障碍。
[0005]检测22q11微缺失/微重复的方法目前有多种，主要有染色体核型分析、限制性片段长度多态性检测、Southern杂交以及FISH、基因芯片技术等方法，其中以FISH方法最为灵敏、可靠，已被运用于临床诊断，但由于成本高、耗时长、技术难度高等原因，还不能成为大范围高危人群的筛查手段。染色体核型分析包括普通带型分析和高分辨技术，它不仅可以检测22q11微缺失/微重复，还可以同时观察其他的染色体异常，且技术成熟，操作简单，但检出率仅为10％～20％。基因芯片技术用gDNA克隆或cDNAs微阵列代替中期染色体铺片作为杂交靶，用微阵列每个靶点上的两种信号的荧光比例反映待测基因组DNA在相应的序列或基因上的拷贝数变化。此技术可以自动化操作，具有灵敏度和准确是高，实现了自动化和程序化等优点，但也存在价格高、需一定量的特殊设备及需要一定技术的专业人员进行操作等限制，不能被广泛的应用。由于以上技术都各自存在局限性，使其无法成为临床常用的或可信的诊断手段。微卫星DNA广泛分布于基因组中，具有高度多态性、遗传稳定性高等优点，在22q11区域内选取这些微卫星DNA标记，进行PCR扩增，可以快速、低成本的检出微小缺失/重复，并大致界定缺失范围。但缺点是必须有双亲的DNA样本，多态信息量不高时难以下诊断性结论；并且在进行PCR扩增时，存在等位基因丢失现象，需要反复验证结果，因此经典的PCR
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STR方法是一种快速筛查方法，但对筛查出的阳性病例还需用FISH、基因芯片技术等其它检测方法进一步确诊。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种22q11微缺失和/或微重复检测引物组、引物探针组合物、试剂盒及其应用，能以较低的成本精准地进行22q11微缺失和/或微重复得检测。
[0007]为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0008]第一方面，本申请提供一种检测22q11微缺失和/或微重复的引物组，所述引物组包括12对引物：
[0009]P1，包括如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的上游引物和下游引物；
[0010]P2，包括如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的上游引物和下游引物；
[0011]P3，包括如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的上游引物和下游引物；
[0012]P4，包括如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示的上游引物和下游引物；
[0013]P5，包括如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示的上游引物和下游引物；
[0014]P6，包括如SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示的上游引物和下游引物；
[0015]P7，包括如SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示的上游引物和下游引物；
[0016]P8，包括如SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16所示的上游引物和下游引物；
[0017]P9，包括如SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18所示的上游引物和下游引物；
[0018]P10，包括如SEQ ID NO.19和SEQ ID NO.20所示的上游引物和下游引物；
[0019]P11，包括如SEQ ID NO.21和SEQ ID NO.22所示的上游引物和下游引物；
[0020]P12，包括如SEQ ID NO.23和SEQ ID NO.24所示的上游引物和下游引物。
[0021]第二方面，本申请还提供一种检测22q11微缺失和/或微重复的引物探针组合物，包括第一方面所述的引物组，以及探针。
[0022]进一步地，所述探针为Taqman探针，所述Taqman探针的5
’
末端标记有荧光基因，3
’
末端标记有萃灭基团。
[0023]进一步地，所述引物探针组合物检测染色体22q11的微缺失和/或微重复，检测区域为所述染色体22q11的18.5
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25区域。
[0024]进一步地，所述检测区域包括第一区域、第二区域和第三区域，所述第一区域为LCR22
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2至LCR22
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3a的区域，所述第二区域为LCR22
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3a至LCR22
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4的区域，所述第三区域为LCR22
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4至LCR22
‑
8的区域。
[0025]进一步地，所述P1至P3的靶基因位于所述第一区域，所述P4至P6的靶基因位于所述第二区域，所述P7至P12的靶基因位于所述第三区域；所述第三区域包括由LCR22
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4至LCR22
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5的第一检测段、LCR22
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5至LCR22
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6的第二检测段，以及LCR22
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6至LCR22
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7的第三检测段。
[0026]进一步地，检测所述第一区域和第二区域的探针组分别标记不同的荧光基因，检测所述第三区域中不同检测段的探针组分别标记不同的荧光基因。
[0027]第三方面，本申请还提供一种检测22q11微缺失和/或微重复的试剂盒，包括第二方面所述的引物探针组合物。
[0028]进一步地，所述试剂盒还包括酶混合液、dNTP混合液或PCR缓冲液中的任意一种或本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测22q11微缺失和/或微重复的引物组，其特征在于，所述引物组包括12对引物：P1，包括如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的上游引物和下游引物；P2，包括如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的上游引物和下游引物；P3，包括如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示的上游引物和下游引物；P4，包括如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示的上游引物和下游引物；P5，包括如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示的上游引物和下游引物；P6，包括如SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示的上游引物和下游引物；P7，包括如SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示的上游引物和下游引物；P8，包括如SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16所示的上游引物和下游引物；P9，包括如SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18所示的上游引物和下游引物；P10，包括如SEQ ID NO.19和SEQ ID NO.20所示的上游引物和下游引物；P11，包括如SEQ ID NO.21和SEQ ID NO.22所示的上游引物和下游引物；P12，包括如SEQ ID NO.23和SEQ ID NO.24所示的上游引物和下游引物。2.一种检测22q11微缺失和/或微重复的引物探针组合物，其特征在于，包括如权利要求1所述的引物组，以及探针。3.如权利要求2所述的引物探针组合物，其特征在于，所述探针为Taqman探针，所述Taqman探针的5
’
末端标记有荧光基因，3
’
末端标记有萃灭基团。4.如权利要求2所述的引物探针组合物，其特征在于，所述引物探针组合物检测染色体22q11的微缺失和/或微重复，检测区域为所述染色...

【专利技术属性】
技术研发人员：虞斌，朱琦，王晶，张玢，周燕，王馨月，
申请(专利权)人：苏州行知康众生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：