microRNAs作为神经管畸形的无创产前筛查分子标志物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了microRNAs作为神经管畸形的无创产前筛查分子标志物及其应用，属于医药生物技术领域。提供用于NTDs胎儿产前无创诊断的分子标志物及其应用，所述分子标志物由hsa

【技术实现步骤摘要】
microRNAs作为神经管畸形的无创产前筛查分子标志物及其应用


[0001]本专利技术属于医药生物
，具体涉及microRNAs作为神经管畸形的无创产前筛查分子标志物及其应用。

技术介绍

[0002]神经管畸形(neural tube defects，NTDs)作为我国常见的重大出生缺陷疾病，是胚胎发育过程中神经管闭合不全所致的先天性畸形，其致死率和致残率极高，主要包括无脑儿、脑膨出和脊柱裂等。虽然随着孕期保健和叶酸补充的普及以及产前畸形矫正与修补手术的进步，NTDs的发生率有所降低，但一系列术后并发症依旧对其个人、家庭和整个社会构成多方面的负担。因此，探寻神经管畸形早期无创诊断方法，使胎儿在出现严重结构异常或不可逆损伤之前获得有效诊断，进而采取早期干预措施，对于减少畸形的致残率、提高人口素质具有极其重要意义。
[0003]目前，临床上对于NTDs产前诊断主要依赖于妊娠中期的胎儿超声检查并结合母体血清甲胎蛋白水平。然而，超声检查手段对NTDs的发现只能在缺陷形成后，并且其诊断准确性高度依赖于操作人员的经验和设备的质量，而母体甲胎蛋白易受其他疾病和因素影响。因此，探讨客观的、准确的早期NTDs诊断方法具有极其重要的意义，也为其早期咨询及治疗提供依据。母体血清学检查是一种无创性产前诊断方法,孕妇易接受，适用于大范围产前筛查。因此，国内外许多学者都在致力于发现新的诊断特异性标志物的研究，但目前为止，尚无在临床获得应用的孕早期神经管畸形的诊断分子标志物。
[0004]近年来随着各种组学技术突飞猛进的发展，一系列新技术融入到高通量的组学研究中，组学技术通过检测从单个亚细胞组分到大规模生物网络的多个系统的动态分子变化，在先天性畸形生物标志物的发现中发挥了重要作用。microRNA（miRNA)转录组是细胞在特定生理或发育阶段的总miRNA的总和，母体血循环中的miRNA为早期诊断妊娠相关疾病提供可能。利用高通量的组学技术可以充分考虑母体与胎儿两方面因素，从众多复杂的基因中筛选出改变明显的关键性分子，综合分析其变化规律，将有利于确定疾病早期诊断和预后判定的分子标志物，也是未来将复杂的分子标志物转化为临床应用的趋势所在。

技术实现思路

[0005]针对上述问题，专利技术的目的在于提供用于NTDs胎儿产前无创诊断的分子标志物及其应用，所述分子标志物为hsa
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223、hsa
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187和hsa
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7d三种miRNAs组成，可用于神经管畸形产前筛查，为神经管畸形治疗提供新的靶点。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案。
[0007]本专利技术提供了一种检测分子标志物含量的试剂在制备用于NTDs胎儿产前筛查、预警、诊断的产品中的应用，其特征在于，所述分子标志物由hsa
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223、hsa
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187和hsa
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7d中一种或者多种miRNAs组成。
[0008]进一步地，所述产品包括试剂、试剂盒、芯片、试纸，高通量测序平台，聚合酶链反应、核酸酶保护分析、原位杂交法、核酸微阵列、RNA印迹或芯片检测相关方法。
[0009]进一步地，所述产品检测样品为孕妇血液样本。
[0010]进一步地，所述检测hsa
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7d中一种或者多种含量的试剂为特异性识别或扩增hsa
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7d中一种或者多种的试剂。
[0011]进一步地，所述检测hsa
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7d中一种或者多种的试剂为hsa
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7d中一种或者多种的特异性探针或引物。
[0012]本专利技术还提供了一种用于NTDs胎儿产前筛查、预警和诊断的工具，所述工具能够检测上述miRNAs的表达量。
[0013]进一步地，所述工具包括能够定量NTDs胎儿产前无创诊断分子标志物hsa
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223、hsa
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187和hsa
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7d中一种或者多种miRNAs组成。
[0014]进一步地，所述用于NTDs胎儿产前筛查、预警和诊断的工具包括芯片、试剂盒、试纸和高通量测序平台等。
[0015]本专利技术还提供了一种神经管畸形产前筛查、预警和诊断的方法，所述方法包括如下步骤。
[0016](1）本专利技术获取受试者的血清样品，从母体血清中分离的总RNA 被去磷酸化并与pCp
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Cy3连接。根据Sanger miRBase release 14.0，纯化标记RNA并将其杂交成含有887个人类成熟miRNA探针的miRNA阵列。使用Agilent微阵列扫描仪清洗和扫描阵列，提取评估各混合化信号的强度。初步筛选出患有NTD胎儿的孕妇血清中的miRNAs分子标志物特征。
[0017](2)本专利技术进一步扩大样本验证，即利用实时定量PCR 验证三个hsa
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7d在母体血清中的表达。
[0018](3)本专利技术利用ROC曲线分析评估其诊断胎儿NTDs的临床应用价值，制备用于神经管畸形胎儿产前筛查、预警、临床诊断的工具。
[0019]本专利技术中所述PCR方法为已知方法，利用RT
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PCR(逆转录酶
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PCR)法，原位RT
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PCR法来检测。
[0020]本专利技术中引物和探针通过化学合成来制备，通过使用本领域技术人员知道的方法参考已知信息来适当地设计，并通过化学合成来制备。
[0021]本专利技术的试剂盒中还可包括用于提取核酸的试剂，用于PCR的试剂，用于染色或显色的试剂等。例如，这些试剂包括但不限于：抽提液、扩增液、杂交液、显色液、洗液等。
[0022]本专利技术所述的样品来自受试孕妇血液。
[002本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测分子标志物含量的试剂在制备用于NTDs胎儿产前筛查、预警、诊断的产品中的应用，其特征在于，所述分子标志物由hsa
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7d中的一种或者多种miRNAs组成。2.如权利要求1所述的额应用，其特征在于，所述产品包括试剂、试剂盒、芯片、试纸，高通量测序平台，聚合酶链反应、核酸酶保护分析、原位杂交法、核酸微阵列、RNA印迹或芯片检测相关方法。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品检测样品为孕妇血液样本。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测hsa
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7d中的一种或者多种含量的试剂为特异性识别或扩增hsa
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223、hsa
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7d...

【专利技术属性】
技术研发人员：顾卉，袁正伟，黄琬淇，魏晓伟，马巍，刘丹，罗文婷，曹嵩颖，贾杉杉，
申请(专利权)人：中国医科大学附属盛京医院，
类型：发明
国别省市：