微肽altTAP2在制备抗骨髓瘤药物中的应用制造技术

本发明专利技术提供一种微肽altTAP2在制备耐药抗骨髓瘤药物中的重要作用，提出微肽altTAP2促进硼替佐米和伊沙佐米诱发的骨髓瘤细胞的耐药发生，可通过调控糖酵解代谢通路参与骨髓瘤耐药的发生进程以及调控ABC转运体蛋白表达促进蛋白酶体抑制剂耐药发生。因此，微肽altTAP2可作为药物靶点用于制备耐药抗骨髓瘤药物，对抗骨髓瘤药物的开发和预防治疗具有重要意义。抗骨髓瘤药物的开发和预防治疗具有重要意义。抗骨髓瘤药物的开发和预防治疗具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
微肽altTAP2在制备抗骨髓瘤药物中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种微肽altTAP2在制备抗骨髓瘤药物中的应用。

技术介绍

[0002]多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是一种克隆浆细胞异常增殖的恶性血液系统肿瘤，复发率高预后差，至今无法治愈，其主要侵犯中老年人，伴随着人口老龄化，MM将成为影响人民幸福指数和健康水平的重大疾病。随着蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂及单克隆抗体药物的问世，MM的治疗效果有了显著提高。但MM本身具有极高异质性的特点，耐药机制则涉及染色体不稳定，骨髓微环境及ABC转运体多重耐药等多因素互作，致使患者对化疗敏感性不同，最终导致MM患者复发耐药。因此，探究MM耐药发生的具体作用机理具有重要的临床现实意义和科学价值。
[0003]随着蛋白组学和基因组学技术的不断成熟，越来越多的未被注释小的和可替代的读码框被鉴定出来，其常表达于mRNA的5
’
UTR、CDS和3
’
UTR，以及非编码RNAlncRNA、circRNA、pri
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miRNA及rRNA等，而有生物学功能的微肽更加屈指可数。微肽在肿瘤组织中表达失调，与病人总体生存和治疗反应息息相关，暗示微肽可能有潜在的预后价值。但多数微肽的功能和机制仍是未知的，而微肽在骨髓瘤进程中的研究尚未有报道。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是在现有技术的基础上，提供一种微肽altTAP2在制备抗骨髓瘤药物中的应用，例如，微肽altTAP2在制备耐药抗骨髓瘤药物中的应用，特别是作为药物靶点在制备耐药抗骨髓瘤药物中的应用，其中，与微肽altTAP2协作的抗骨髓瘤药物为硼替佐米或伊沙佐米。
[0005]本专利技术的第二个目的是提供微肽altTAP2过表达CD513B慢病毒在制备耐药抗骨髓瘤药物中的应用。
[0006]本专利技术的第三个目的是提供一种诊断试剂，该诊断试剂以上述微肽altTAP2过表达CD513B慢病毒为活性成分或主要活性成分，辅以药学上可接受的载体。
[0007]本专利技术的技术方案如下：
[0008]微肽altTAP2在制备抗骨髓瘤药物中的应用，其中，微肽altTAP2的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，具体如下所示：
[0009]SEQ ID NO.1：MAGGDPAAGR AVGAAKAKRA AGICGDTAAP ALSGHPPDCL PESPGRGGLT CSPSQSRFSP LELAAGGVRG CGAQLVTVGC SEPSWSPGEG AGPGEQQSLD VEAAEALQAG PASPRCRLLL PCPCCFG。
[0010]在一种优选方案中，微肽altTAP2在制备耐药抗骨髓瘤药物中的应用。本专利技术提及与微肽altTAP2协作的抗骨髓瘤药物，可以为硼替佐米或伊沙佐米。
[0011]微肽altTAP2在制备耐药抗骨髓瘤药物时，药物可以制成固体制剂或者液体制剂。
进一步地，在本专利技术提供的技术方案的基础上，药物可以制成注射剂、口服液、颗粒剂、粉剂、片剂或胶囊剂。
[0012]在一种更优选方案中，微肽altTAP2作为药物靶点在制备耐药抗骨髓瘤药物中的应用。
[0013]优选地，微肽altTAP2以CD513B慢病毒作为载体。
[0014]本专利技术还提供微肽altTAP2过表达CD513B慢病毒在制备耐药抗骨髓瘤药物中的应用。其中，本专利技术提及与微肽altTAP2协作的抗骨髓瘤药物，可以为硼替佐米或伊沙佐米。
[0015]在一种优选方案中，本专利技术提及的微肽altTAP2过表达CD513B慢病毒(简称CD513B
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altTAP2
‑
Flag)，其制备方法包括如下步骤：
[0016](1)利用EcoRI和NotI限制性内切酶切割CD513B载体，回收纯化切割载体备用；
[0017](2)altTAP2
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Flag基因片段由苏州金唯智公司合成，并由EcoRI和NotI限制性内切酶切割进行片段纯化，其中，altTAP2
‑
Flag的基因序列如SEQ ID NO.2所示，具体如下所示：ACCTGAGACC CTGGACCTCC CTGCTGCTGG TGGACGCGGC TTTACTGTGG CTGCTTCAGG GCCCTCTGGG GACTTTGCTT CCTCAAGGGC TGCCAGGACT ATGGCTGGAG GGGACCCTGC GGCTGGGAGG GCTGTGGGGG CTGCTAAAGC TAAGAGGGCT GCTGGGATTT GTGGGGACAC TGCTGCTCCC GCTCTGTCTG GCCACCCCCC TGACTGTCTC CCTGAGAGCC CTGGTCGCGG GGGCCTCACG TGCTCCCCCA GCCAGAGTCG CTTCAGCCCC TTGGAGCTGG CTGCTGGTGG GGTACGGGGC TGCGGGGCTC AGCTGGTCAC TGTGGGCTGT TCTGAGCCCT CCTGGAGCCC AGGAGAAGGA GCAGGACCAG GTGAACAACA AAGTCTTGAT GTGGAGGCTG CTGAAGCTCT CCAGGCCGGA CCTGCCTCTC CTCGTTGCCG CCTTCTTCTT CCTTGTCCTT GCTGTTTTGG GATGGACTAC AAAGACCATG ACGGTGATTA TAAAGATCAT GACATCGATT ACAAGGATGACGATGACAAG TGA。
[0018](3)切割好的CD513B和回收的altTAP2
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Flag片段在DNA连接酶的作用下连接，转化stbl3感受态细胞，挑取单克隆，进行扩增，测序质粒构建成功后进行质粒提取，备用。
[0019](4)利用CD513B
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altKAP2
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Flag质粒与PAX和PMD2.G包装质粒按照4:3:1的比例预混后，再与转染试剂Lipofectamine 2000(体积比为1:2)混合，加入至事先铺好的HEK293T细胞中孵育，孵育结束后即可收取病毒，并进行浓缩，备用，后续侵染骨髓瘤细胞。
[0020]在一种优选方案中，在步骤(4)中，病毒的包装过程包括如下更详细的步骤：
[0021]①
HEK293T细胞铺板，待细胞密度达到90％时进行转染；利用CD513B
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altKAP2
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Flag质粒与PAX和PMD2.G包装质粒按照4:3:1的比例预混后，再与转染试剂(体积比为1:2)混合，混合时间为15min，再将所得混合液滴入事先铺好的HEK293T细胞中孵育6h，更换新鲜的培养基；
[0022]②
在新的培养基中继续孵育48小时，利用荧光显微镜观察细胞GFP绿色荧本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.微肽altTAP2在制备抗骨髓瘤药物中的应用，其特征在于，所述微肽altTAP2的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述微肽altTAP2在制备耐药抗骨髓瘤药物中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，与微肽altTAP2协作的抗骨髓瘤药物为硼替佐米或伊沙佐米。4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述微肽altTAP2作为药物靶点在制备耐药抗骨髓瘤药物中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述微肽altTAP2以CD513B慢病毒作为载体。6.根据权利要求2...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘琳琳，姚若斯，曾银娣，张亚欣，
申请(专利权)人：徐州医科大学，
类型：发明
国别省市：