一种新型抗NF-κB重组蛋白的原核表达和抗白血病作用方法技术

本发明专利技术公开了一种新型抗NF‑κB重组蛋白的原核表达和抗白血病作用方法，所述方法先通过化学合成HA‑NleC片段，并克隆至pGEX‑4T‑1表达载体，之后转化BL21DE3感受态，最后使用IPTG诱导HA‑Nlec融合蛋白表达，所述HA‑NleC片段融合蛋白表达的实验操作包括合成的HA‑Nlec片段、胶回收纯化、T4连接酶连接、培养单克隆扩增、转BL21感受态细胞倒置培养、继续挑选单克隆扩增、超声裂解和考马斯亮蓝染色观察。本发明专利技术在NleC的N端连接了HA标签，利用融合的GST标签进行亲和层析纯化，再经凝血酶切割获得纯化的HA‑Nlec重组蛋白，HA‑NleC与伊马替尼联合处理能显著增强伊马替尼对Ph+ALL细胞株SUP‑B15细胞的杀伤能力，有望开发为新型抗白血病重组蛋白药物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，特别涉及一种新型抗nf-κb重组蛋白的原核表达和抗白血病作用方法。

技术介绍

1、费城染色体阳性急性淋巴细胞白血病是恶性程度最高的白血病类型之一，虽有伊马替尼、达沙替尼等针对其直接致病基因bcr-abl1的靶向药物，但控制效果远逊于慢性粒细胞性白血病。靶向药物合用泛素-蛋白酶体抑制剂在临床试验中对ph+-all特别是难治病例展示出一定疗效，但一来硼替佐米为代表的泛素蛋白酶体抑制剂毒性较大，二来泛素蛋白酶体抑制剂的耐药问题也不容乐观。泛素蛋白酶体抑制剂抗肿瘤的关键机制之一是抑制iκb泛素化降解从而抑制nf-κb的核转位。鉴于此，探索新的不依赖泛素蛋白酶体的抗nf-κb新手段联合靶向药有望为ph+all的治疗带来全新策略。

技术实现思路

1、本专利技术的目的在于提供一种新型抗nf-κb重组蛋白的原核表达和抗白血病作用方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。

2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种新型抗nf-κb重组蛋白的原核表达和抗白血病作用方法，所述方法先通过化学合成本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种新型抗NF-κB重组蛋白的原核表达和抗白血病作用方法，其特征在于，所述方法先通过化学合成HA-NleC片段，并克隆至pGEX-4T-1表达载体，之后转化BL21DE3感受态，最后使用IPTG诱导HA-Nlec融合蛋白表达；

2.根据权利要求1所述的一种新型抗NF-κB重组蛋白的原核表达和抗白血病作用方法，其特征在于，所述HA-NleC片段融合蛋白表达的实验操作包括以下方法：

3.根据权利要求2所述的一种新型抗NF-κB重组蛋白的原核表达和抗白血病作用方法，其特征在于，所述第一步通过BamHI/XhoI双酶切化学合成的HA-Nlec片段之后，进行37℃酶切过...

【技术特征摘要】

1.一种新型抗nf-κb重组蛋白的原核表达和抗白血病作用方法，其特征在于，所述方法先通过化学合成ha-nlec片段，并克隆至pgex-4t-1表达载体，之后转化bl21de3感受态，最后使用iptg诱导ha-nlec融合蛋白表达；

2.根据权利要求1所述的一种新型抗nf-κb重组蛋白的原核表达和抗白血病作用方法，其特征在于，所述ha-nlec片段融合蛋白表达的实验操作包括以下方法：

3.根据权利要求2所述的一种新型抗nf-κb重组蛋白的原核表达和抗白血病作用方法，其特征在于，所述第一步通过bamhi/xhoi双酶切化学合成的ha-nlec片段之后，进行37℃酶切过夜。

4.根据权利要求2所述的一种新型抗nf-κb重组蛋白的原核表达和抗白血病作用方法，其特征在于，所述第四步热激的温度为40-45℃，所述第四步中摇床培养的温度为35-38℃，所述第四步中倒置培养的温度为36-38℃。

5.根据权利要求2所述的一种新型抗nf-κb重组蛋白的原核表达和抗白血病作用方法，其特征在于，所述第七步中使用iptg诱导操作的温度为24-26℃。

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【专利技术属性】
技术研发人员：王聪月，徐金格，陈翀，曹旭，席静静，展佳敏，
申请(专利权)人：徐州医科大学，
类型：发明
国别省市：