SEMA3G抗体在制备抗肿瘤或调节免疫的药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医药技术领域，尤其是涉及SEMA3G抗体在制备抗肿瘤或调节免疫的药物中的应用。本发明专利技术基于新鉴定的SEMA3G

【技术实现步骤摘要】
SEMA3G抗体在制备抗肿瘤或调节免疫的药物中的应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，尤其是涉及SEMA3G抗体在制备抗肿瘤或调节免疫的药物中的应用。

技术介绍

[0002]免疫检查点是分布于体内免疫系统中的抑制性信号通路，能够调控免疫反应的强弱和持续时间，避免组织损伤并维持机体自身的耐受。而肿瘤细胞则能够利用免疫检查点通路的抑制作用，逃避免疫细胞的识别，特别是抑制T细胞的免疫应答，以实现免疫逃逸。目前，靶向免疫检查点蛋白被用于治疗多种类型的恶性肿瘤。以免疫检查点靶标PD
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1和PD
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L1为代表的免疫检查点单抗阻断治疗已逐渐成为肿瘤治疗领域的焦点。然而在临床上，免疫检查点阻断疗法存在总体效率不高、长期使用后产生耐药以及可发生严重不良反应等较多问题。因此，寻找新的免疫检测点分子，阐明其作用机制，可以提高免疫治疗效果，扩大获益人群范围。
[0003]Semaphorin分子最初是Kolodkin等人在研究蝗虫胚胎神经生长锥的导向分子时发现的。其有30多个Semaphorin家族成员，分别归属于8个亚群。SEMA家族的蛋白以3种形式存在：分泌型、跨膜型和GPI锚定型。最初研究发现Semaphorin分子可以调节神经系统生长发育，促进生长锥崩解，影响轴突的分支和突触形成，是调节轴突生长的导向信号分子。但目前越来越多的研究证明，Semaphorin分子在肿瘤的发生发展、细胞迁移、免疫反应等方面也发挥着重要作用。Semaphorin3(SEMA3)是一种分泌型蛋白，包括SEMA3A、B、C、D、E、F和G七个亚型。SEMA3G基因是Semaphorin3s家族较新发现的一种信号素，定位于14号染色体，其由细胞分泌到间质内或锚定在细胞膜表面，已有研究发现其通过结合NRP2受体发挥神经向导、血管抑制等功能，然而其在肿瘤免疫中的作用尚无报道。
[0004]T细胞是适应性免疫反应的关键效应细胞，在抗肿瘤免疫应答中发挥重要作用。不同的T细胞亚群在抗肿瘤免疫中的作用不同。以CD8+T细胞为代表的一群免疫杀伤细胞在促进抗肿瘤免疫应答中发挥重要作用，而以Treg细胞为代表的免疫抑制细胞却在抑制抗肿瘤免疫中发挥作用。在T细胞表面上发现的TCR(T细胞受体)是由α和β多肽链组成的异二聚体(构成大约95％的TCR群体)，或者是γ和δ多肽链。每种多肽均包含恒定(C)和可变(V)区域。恒定区锚定在细胞膜中，而可变区在细胞外延伸并负责结合抗原。TCR的细胞质短尾缺乏转导信号的能力，细胞内信号传导由CD3(分化簇3)蛋白复合物启动，其由四个不同的链组成。在哺乳动物中，CD3复合物包含一条CD3γ(γ)链，一条CD3δ(δ)链和两条CD3ε(ε)链(即CD3E)。这些链与TCR和ζ链(zeta链)相关，在T淋巴细胞激活及分化中发挥重要作用。CD3ε链在T细胞活化中的作用尤为重要，体外针对CD3ε的激活抗体OKT3被广泛用T细胞的活化，在抗肿瘤免疫之基础研究和临床应用中被广泛使用。值得注意的是，目前CD3ε的天然配体尚不清楚，并且OKT3作为激活抗体在体内应用时也会因剂量等原因而诱导Treg细胞的扩增，阻碍其临床应用。目前未见SEMA3G作为CD3ε配体的报道。

技术实现思路

[0005]为了解决上述问题，本专利技术的目的是提供SEMA3G抗体在制备抗肿瘤或调节免疫的药物中的应用。本专利技术基于新鉴定的SEMA3G
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CD3ε相互作用及其在抗肿瘤免疫应答中的作用，开发了单克隆抗体。本专利技术公开了SEMA3G作为免疫原高效率地制备用于阻断SEMA3G与CD3ε结合的抗体的方法。本专利技术公开了通过阻断肿瘤细胞表达的SEMA3G与T细胞表达的CD3ε的结合而促进抗肿瘤免疫的方法，并公开了通过阻断SEMA3G与CD3ε结合筛选治疗性药物的筛选方法。
[0006]SEMA3G蛋白表达在肿瘤细胞，且可作为配体结合CD3ε，从而诱导Treg的扩增，抑制T细胞对肿瘤细胞的杀伤。SEMA3G蛋白亦可与CD3ε的重要新型配体肌醇1,4,5
‑
三磷酸受体相互作用蛋白样1(Inositol 1,4,5
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trisphosphate receptor
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interacting protein
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like 1，ITPRIPL1)结合。
[0007]本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现：
[0008]本专利技术的第一个目的是提供SEMA3G的调节剂在制备调节免疫反应或抗肿瘤的药物中的用途，所述SEMA3G的调节剂用于降低机体的SEMA3G基因或蛋白的表达或功能；
[0009]所述SEMA3G的调节剂包括使细胞内SEMA3G基因被敲除、突变的基因编辑系统、降低SEMA3G基因表达水平的RNA分子或识别并结合SEMA3G的抗体。
[0010]在本专利技术的一个实施方式中，所述基因编辑系统为CRISPR/Cas9基因编辑系统；
[0011]用于所述CRISPR/Cas9基因编辑系统的靶序列选自SEQ ID NO.42、SEQ ID NO.43或SEQ ID NO.44所示的任意一条序列，用于编码sgRNA的寡聚DNA序列选自SEQ ID NO.45、SEQ ID NO.46、SEQ ID NO.47、SEQ ID NO.48、SEQ ID NO.49或SEQ ID NO.50所示的任意一条序列。
[0012]本专利技术的第二个目的是提供一种用于筛选和鉴别SEMA3G调节剂的方法，检测受试分子的以下一种或多种性质：
[0013]特异性结合细胞表面表达的SEMA3G的能力、对SEMA3G与CD3ε结合的影响、对免疫细胞或肿瘤细胞功能的直接或间接影响；
[0014]所述的影响为体外的或体内的检测的影响；
[0015]结果判定：体外的或体内的通过调控SEMA3G编码基因或者直接结合SEMA3G蛋白从而影响SEMA3G转录、翻译、活性或者与其他分子结合能力的基因序列或者抗体分子被视为SEMA3G调节剂。
[0016]本专利技术的第三个目的是提供一种SEMA3G的线性表位多肽，所述线性表位多肽的序列包含：(i)氨基酸序列为SEQ ID NO.53，即VLHTERGLLFRRLSRFDAGTYTCTTLEHGF；(ii)或SEQ ID NO.53的1
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30个氨基酸中任一个或多个氨基酸被替换、插入或缺失所得到的氨基酸序列。
[0017]在本专利技术的一个实施方式中，所述线性表位多肽的序列包含氨基酸序列为xxxxExGxxxxxxxxFxxxxxTxTxxxxxF的序列；
[0018]其中，x为任意氨基酸。
[0019]本专利技术的第四个目的是提供一种核酸分子，所述核酸分子包含编码SEMA3G的线性表位多肽的核酸序列或其互补序列；
[0020]所述线性表位多肽的序列包含：(i)氨基酸序列为SEQ ID NO.53，即
NO.20、SEQ ID NO.21、SEQ ID 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
NO.36、SEQ ID NO.37、SEQ ID NO.38所示，SEQ ID NO.54重链可变区VH中的HCDR1、HCDR2、HCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.56、SEQ ID NO.57、SEQ ID NO.58所示；所述分离的SEMA3G抗原结合蛋白包含氨基酸序列SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.19、SEQ ID NO.27、SEQ ID NO.35或SEQ ID NO.55中任一项所示的轻链可变区VL中的LCDR1、LCDR2和LCDR3；SEQ ID NO.3轻链可变区VL中的LCDR1、LCDR2、LCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9所示，SEQ ID NO.11轻链可变区VL中的LCDR1、LCDR2、LCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.17所示，SEQ ID NO.19轻链可变区VL中的LCDR1、LCDR2、LCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.23、SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.25所示，SEQ ID NO.27轻链可变区VL中的LCDR1、LCDR2、LCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.31、SEQ ID NO.32、SEQ ID NO.33所示，SEQ ID NO.35轻链可变区VL中的LCDR1、LCDR2、LCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.39、SEQ ID NO.40、SEQ ID NO.41所示，SEQ ID NO.55轻链可变区VL中的LCDR1、LCDR2、LCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.59、SEQ ID NO.60、SEQ ID NO.61所示。9.一种嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体包含分离的抗原SEMA3G结合蛋白；所述分离的SEMA3G抗原结合蛋白与抗原SEMA3G中SEQ ID NO.51、SEQ ID NO.52或SEQ ID NO.53中任一项所示的氨基酸序列结合。10.一种免疫耦联物，其特征在于，所述免疫偶联物包含分离的抗原SEMA3G结合蛋白；所述分离的SEMA3G抗原结合蛋白与抗原SEMA3G中SEQ ID NO.51、SEQ ID NO.52或SEQ ID NO.53中任一项所示的氨基酸序列结合。11.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码分离的抗原SEMA3G结合蛋白、多肽或蛋白片段、嵌合抗原受体或免疫耦联物；所述分离的SEMA3G抗原结合蛋白与抗原SEMA3G中SEQ ID NO.51、SEQ ID NO.52或SEQ ID NO.53中任一项所示的氨基酸序列结合；所述多肽或蛋白片段为与抗原SEMA3G中SEQ ID NO.51、SEQ ID NO.52或SEQ ID NO.53中任一项所示的氨基酸序列结合的多肽或蛋白片段；所述嵌合抗原受体包含分离的抗原SEMA3G结合蛋白；所述免疫耦联物包含分离的抗原SEMA3G结合蛋白。12.一种载体，其特征在于，所述载体包含核酸分子；所述核酸分子编码分离的抗原SEMA3G结合蛋白、多肽或蛋白片段，嵌合抗原受体或免疫耦联物；所述分离的SEMA3G抗原结合蛋白与抗原SEMA3G中SEQ ID NO.51、SEQ ID NO.52或SEQ ID NO.53中任一项所示的氨基酸序列结合；所述多肽或蛋白片段为与抗原SEMA3G中SEQ ID NO.51、SEQ ID NO.52或SEQ ID N...

【专利技术属性】
技术研发人员：许杰，王运刚，宋腾，孙玉凡，陶维红，池浩，
申请(专利权)人：上海柏全生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：