本发明专利技术公开了一种具有抗病、杀虫作用的云南微球菌SfA3菌株及其应用。SfA3菌株于2022年4月29日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：62446。本发明专利技术研究显示SfA3菌株对稻瘟病菌、香蕉枯萎病菌、番茄酸腐病菌、番石榴果腐病菌、菜心炭疽病菌和水鬼蕉叶斑病菌等植物病原真菌具有良好的拮抗效果；同时SfA3菌株具有增效AcMNPV病毒杀虫活性作用，能显著提高对鳞翅目害虫的死亡率，降低害虫半数生存期，提高病毒AcMNPV在防治草地贪夜蛾等害虫的杀虫效率。SfA3菌株能用于蔬菜害虫的防控以及病原菌的抑制，可作为微生物杀虫剂或增效剂来加强对害虫的防控。剂来加强对害虫的防控。剂来加强对害虫的防控。
【技术实现步骤摘要】
一种具有抗病、杀虫作用的云南微球菌SfA3菌株及其应用
[0001]本专利技术属于农业微生物
更具体地，涉及一种具有抗病、杀虫作用的云南微球菌SfA3菌株及其应用。
技术介绍
[0002]草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)属于鳞翅目(Lepidoptera)夜蛾科(Noctuidae)，是一种世界性的重要农业害虫。主要危害玉米、马铃薯、甘蔗等重要经济作物，具有很强的迁飞能力。草地贪夜蛾对多种农药和不同类型的转基因玉米产生不同程度的抗性。目前，传统农药如有机磷酸酯类、拟除虫菊酯类等农药对入侵并定殖我国的草地贪夜蛾并没有较好的防效，广东地区的草地贪夜蛾也对新型农药如甲维盐和氯虫苯甲酰胺产生中等水平的抗性。因此，许多学者把研究的目光转向了生物防治，从长远来看，可持续防治草地贪夜蛾应更侧重于使用迁飞监测、生态调控的手段，运用性信息素引诱剂、天敌昆虫(如卵黑蜂Telenomus remus、异色瓢虫(Harnonia axyridis)、病原微生物(如莱氏绿僵菌Metarhizium riley、苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis，Bt)进行生物防治也是防控草地贪夜蛾的关键措施。
[0003]核型多角体病毒Nucleopolyhedrovirus(NPV)是昆虫杆状病毒当中发现较早，研究较深的一类病毒。通过昆虫取食植物叶片时吞入病毒包涵体OBs，随后在昆虫肠道进行感染。其中，苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus(AcMNPV)是一种宿主范围较广的α
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杆状病毒，主要用于鳞翅目害虫的防治，主要症状表现为初期体色变浅，多为白色或浅黄色，食欲减退，行动迟缓，后期体内组织液化死亡，体壁极易戳破，并伴随着乳白色脓液流出。野外中常见感染病毒的虫子悬挂而死的现象。草地贪夜蛾幼虫对AcMNPV口服感染有较强的抗性，但由于病毒单剂存在见效慢、活性低的问题，因此在田间防治上常常以复配药剂的方式施药。同时杆状病毒杀虫剂杀虫谱窄、作用时间长等局限性限制了其推广应用。因此缩短作用期、扩大杀虫谱成了研究杆状病毒增效的研究重点。
[0004]而利用宿主自身特性如体内微生物的协同作用来增强病毒杀虫效果是目前杆状病毒増效途径的研究方向之一。昆虫肠道微生物主要包括细菌、真菌、原生生物和古生菌。不同种类的昆虫由于取食习惯和栖息环境不同，体内的肠道菌群也相同。这些肠道微生物与昆虫共同进化，相互作用，昆虫为肠道微生物提供生存场所及养料，肠道微生物对昆虫的生长发育、消化分解、新陈代谢以及免疫防御等方面产生极其重要的影响。且农药的长期使用也会改变草地贪夜蛾肠道微生物群落构成，并存在能够降解农药的肠道共生菌。
[0005]目前还鲜少关于增效AcMNPV杀虫活力的研究报道，以此来防控草地贪夜蛾，更加缺乏能用于增效AcMNPV杀虫活力以及能防控草地贪夜蛾的微生物菌株。本研究为了对草地贪夜蛾的有效防控提供更多的方法和手段，还需研究更多具有抗性或具有更多更好作用的菌株作为微生物杀虫剂或增效剂用来加强对害虫的防控。
f.sp.cubense)、菜心炭疽病菌(Colletotrichum higginsianum Sacc.)、水鬼蕉叶斑病菌(Botrytis cinerea)、番茄酸腐病菌(Geotrichum candidum)和番石榴果腐病菌(Pstalotiopsis cocuuli Guba)中的一种或多种。
[0023]进一步地，所述鳞翅目害虫为草地贪夜蛾、斜纹夜蛾、甜菜夜蛾、菜青虫、小菜蛾中的一种或多种。
[0024]本专利技术具有以下有益效果：
[0025]本专利技术提供一种具有增效AcMNPV杀虫活力的SfA3菌株，该菌株能够在体外发酵培养，具有增效AcMNPV病毒作用，能提高AcMNPV在蔬菜害虫草地贪夜蛾的杀虫效率，与AcMNPV病毒混合添食可快速致死草地贪夜蛾，降低了草地贪夜蛾的半数生存期；同时，SfA3菌株对多种害虫以及病原真菌都有很好的抑制作用效果，对甜菜夜蛾幼虫、小菜蛾幼虫、菜青虫幼虫、棉铃虫幼虫、斜纹夜蛾幼虫等都有很好地杀虫效果，具有广谱的杀虫作用，能用于防治其害虫；而SfA3无菌滤液产生的抑菌物质可以有效抑制香蕉枯萎病菌、菜心炭疽病菌、水鬼蕉叶斑病菌、番茄酸腐病菌和番石榴果腐病菌的生长，具有很好地抑菌性。因此，SfA3菌株作为新的生防微生物菌株，用于蔬菜害虫的防控以及病原菌的抑制，具有很好的生物防治潜力和应用前景；可作为微生物杀虫剂或增效剂来加强对害虫的防控，为蔬菜害虫的防治提供新的微生物菌株和防治方法策略。
附图说明
[0026]图1为草地贪夜蛾幼虫侵染症状效果图；
[0027]图2为AcMNPV侵染后的草地贪夜蛾肠道分离细菌的分离结果图(注：图片分别为AcMNPV侵染后24h、72h、96h、168h的草地贪夜蛾肠道分离菌在LB平板、NA平板、EB平板及SS平板的生长状态图)；
[0028]图3为病毒侵染后的草地贪夜蛾肠道SfA3分离菌48h平板培养图；
[0029]图4为草地贪夜蛾SfA3肠道可培养细菌的16S rDNA系统发育分析图(注：通过Mega7.0软件的邻接法(Neighbor
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Joining)构建系统发育树，标尺长度0.0050代表遗传距离，各个菌株的序列GenBank登录号在靠近进化枝的位置)；
[0030]图5为SfA3菌株发酵液的平板对扣菌落直径差异分析图(注：*和**分别表示在p＜0.05和p＜0.01水平上差异显著，***代表p＜0.001，****代表p＜0.0001，ns代表无显著差异，CK为对照)；
[0031]图6为SfA3+AcMNPV对鳞翅目害虫的广谱性测定结果图；
[0032]图7为草地贪夜蛾肠道细菌的清除效果图(48h)；
[0033]图8为菌株SfA3回补对AcMNPV病毒毒力的影响结果图(注：无菌草地贪夜蛾幼虫(n＝60)经AcMNPV病毒处理的存活率分析；实验进行三次生物学重复，误差棒表示标准差；采用log
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rank(Mantel
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Cox)检验，p<0.01视为具有显著性差异)。
具体实施方式
[0034]以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本专利技术，但实施例并不对本专利技术做任何形式的限定。除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备。
[0035]除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
[0036]实施例1草地贪夜蛾肠道微生物的分离纯化
[0037]1、草地贪夜蛾AcMNPV病毒感染
[0038]挑选长势一致的2龄草地贪夜蛾幼虫放于24孔板中，饥饿处理12h。每1g饲料加入约500μL含10％蔗糖的AcMNPV溶液溶液，再滴入1
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2滴可食用蓝色素，搅拌均匀后取适量饲喂草地本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一株云南微球菌(Micrococcus sp.)SfA3菌株，其特征在于，该菌株于2022年4月29日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC NO.62446。2.权利要求1所述云南微球菌SfA3菌株或其发酵液在抑制植物病原真菌和/或防治鳞翅目害虫中的应用。3.权利要求1所述云南微球菌SfA3菌株或其发酵液在制备抑制植物病原真菌和/或防治鳞翅目害虫的微生物菌剂中的应用。4.权利要求1所述云南微球菌SfA3菌株或其发酵液在制备AcMNPV病毒增效杀虫剂中的应用。5.一种抑制植物病原真菌和/或防治鳞翅目害虫的微生物菌剂，其特征在于，含权利要求1所述云南微球菌SfA3菌株或其发酵液。6.根据权利要求5所述微生物菌剂，其特征在于，所述发酵液为发酵上清液。7.根据权利要求6所述微生物菌剂，其特征在于，所述发酵上清液浓度为1.0
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105～1.0
...
【专利技术属性】
技术研发人员：金丰良，许小霞，林思思，孔锦容，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：
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