一种地衣芽孢杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种地衣芽孢杆菌及其应用，属于微生物技术领域。本发明专利技术的地衣芽孢杆菌命名为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)phb01，已于2023年5月14日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所，保藏编号为GDMCC No.63466。本发明专利技术的地衣芽孢杆菌phb01发酵产生的蛋白酶能够有效降解发酵原料中残留蛋白质，提高氨基酸态氮和全氮的含量；本发明专利技术的地衣芽孢杆菌phb01在20％高盐条件下的蛋白酶酶活性高；本发明专利技术的地衣芽孢杆菌phb01遗传稳定性较好，可以作为工业生产备用菌株。可以作为工业生产备用菌株。可以作为工业生产备用菌株。

【技术实现步骤摘要】
一种地衣芽孢杆菌及其应用


[0001]本专利技术属于微生物
，具体涉及一种地衣芽孢杆菌及其应用。

技术介绍

[0002]酱油、豆酱等传统发酵调味品通常由大豆等主要原料经米曲霉发酵而成，米曲霉在生长过程中产生丰富的蛋白酶能够将原料中的蛋白类物质水解形成具有优质风味的肽类或氨基酸。然而酱油在发酵结束后的废渣中仍含有大约20％的粗蛋白，这表明原料中含有一部分难降解的蛋白，在发酵过程中米曲霉所产生的蛋白酶仍不能将其完全水解。
[0003]蛋白酶是水解蛋白质肽链的一类酶的总称，可以根据水解方式分为内肽酶和外肽酶，也可以根据其适合的作用条件分为酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶。蛋白酶的来源广泛，可以从动、植物中提取或通过微生物发酵制得，食品工业中常用的蛋白酶大多以微生物来源为主，主要来源菌种包括黑曲霉、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌等。由于蛋白质的分子量大，结构复杂，种类丰富，同时蛋白酶也属于一大类物质，不同来源的蛋白酶其作用方式、切割位点可能不同，从而产生完全不同的水解效果。近年来，对于耐盐性的蛋白酶也有一些研究，其中大多侧重于在高盐条件下储存后的酶活下降情况，直接在高盐条件下反应测得的酶活研究较少。在这类研究中，有一类嗜盐古生菌的部分研究结果显示其产蛋白酶在高盐条件下的酶活保留率较高，但这类菌株不属于食品国家安全标准范围内的食品可用蛋白酶生产菌株，产蛋白酶也不具有针对酿造难水解蛋白的强降解能力。
[0004]为了提高发酵原料中蛋白质的利用率，研究者们采用了多种方法，尤其是通过对米曲霉菌株进行改良，提高其制曲的蛋白酶活力，这种方法虽然在生产操作上简单但并没有改变米曲霉蛋白酶的类型或作用机制，但无法被米曲霉水解的蛋白类物质仍然没有被触及。也有部分研究者通过优化发酵的温度、时间等因素以提高蛋白水解率，这类工艺优化对于传统发酵行业而言已经基本趋于饱和，难以再在现有基础上大幅度改善。近年来，一些厂家开始尝试在发酵过程中补充蛋白酶以达到酶、菌共酵的效果，然而现阶段国内、外的酶制剂厂家都有食品级蛋白酶产品，但其性质比较趋于同质化，针对酿造食品专用的蛋白酶品类较少，对发酵原料中的难降解蛋白水解能力有限，并且耐盐性差，在10％以上的高渗透压条件下只能发挥其作用的20％以下，使用效率极低。

技术实现思路

[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种地衣芽孢杆菌及其应用，本专利技术的地衣芽孢杆菌产生的蛋白酶能够异性酶解发酵难水解蛋白，并且在高盐条件下依然具有较高活性。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供一种地衣芽孢杆菌，所述地衣芽孢杆菌命名为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)phb01，已于2023年5月14日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所，保藏编号为GDMCC No.63466。本申请专利技术人针对豆类发酵调味品剩余的难水解蛋白，经过大量的实验
筛选能够有效降解难水解蛋白的蛋白酶发酵菌株，再通过ARTP诱变法提高其产蛋白酶在高盐条件下的作用效果，最终获得了一株蛋白酶发酵菌株，该菌株产生的蛋白酶能够异性酶解发酵难水解蛋白，并且在高盐条件下依然具有较高活性。
[0007]作为本专利技术所述地衣芽孢杆菌的优选实施方式，所述地衣芽孢杆菌phb01的序列如SEQ ID NO.1所示。
[0008]本专利技术还提供所述的地衣芽孢杆菌phb01在生产蛋白酶中的应用。
[0009]本专利技术还提供所述的地衣芽孢杆菌phb01在制备豆类调味品中的应用。
[0010]本专利技术还提供一种蛋白酶，采用所述的地衣芽孢杆菌发酵制备得到。本申请专利技术人经过大量的实验筛选得到地衣芽孢杆菌phb01，该菌株能够发酵产生phb01蛋白酶，phb01蛋白酶能够特异性降解酱油或发酵酱原料中难以被米曲霉水解的蛋白质，并且在高盐条件下作用效果良好，是一种专门用于酿造食品生产的蛋白酶。
[0011]本专利技术还提供所述蛋白酶在制备豆类调味品中的应用。本申请专利技术人使用ARTP法对蛋白酶发酵菌株进行诱变，提高了phb01蛋白酶在高盐体系下的酶活，比其他蛋白酶在高盐条件下的酶活保留率显著提高，更适应高盐的发酵体系。
[0012]作为本专利技术所述应用的优选实施方式，所述豆类调味品包括酱油、豆酱。
[0013]本专利技术还提供一种提高豆类调味品中氨基酸态氮的方法，所述方法为将所述蛋白酶加入酱醪中进行发酵。
[0014]与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：本专利技术提供一种地衣芽孢杆菌及其应用，本专利技术从天然发酵酱醪中分离出产蛋白酶的菌株，再以酱油发酵渣中残留的蛋白质作为酶解底物，筛选出一株蛋白酶发酵菌株(地衣芽孢杆菌phb01)，该菌株培养液中的蛋白酶能够有效降解发酵原料中残留蛋白质，经酶解的酱油渣滤液中氨基酸态氮提高16.36％，全氮提高20.29％；本专利技术的地衣芽孢杆菌phb01在20％高盐条件下的蛋白酶酶活性高；本专利技术的地衣芽孢杆菌phb01遗传稳定性较好，可以作为工业生产备用菌株。
附图说明
[0015]图1为地衣芽孢杆菌phb01菌落形态图。
[0016]图2为实施例4中不加酶组酱油氨基酸分析图。
[0017]图3为实施例4中地衣芽孢杆菌phb01蛋白酶组酱油氨基酸分析图。
[0018]图4为实施例4中商品化碱性蛋白酶组酱油氨基酸分析图。
具体实施方式
[0019]为更好的说明本专利技术的目的、技术方案和优点，本专利技术通过下列实施例进一步说明。显然，下列实施例仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。应理解，本专利技术实施例仅用于说明本专利技术的技术效果，而非用于限制本专利技术的保护范围。除非特别说明，否则本专利技术实施例中采用的方法和试验条件均为本领域常规使用的方法和试验条件，使用的试剂、设备和培养基均为本领域常规使用的试剂、设备和培养基，均可通过现有方法制备获得或通过市售购买获得。
[0020]实施例1菌株的分离与筛选
[0021]1、原材料的处理：
[0022]取传统高盐稀态工艺发酵10天、30天、50天、90天的酱醪，分别将10g酱醪加入至100mL含NaCl 0.85％的无菌生理盐水中，使用均质袋均质后，再用无菌生理盐水将酱醪均质液稀释至10
‑3～10
‑6的梯度稀释液，分别从各稀释液中取0.1mL，在含盐10％的LB固态培养基平板上均匀涂布，将平板倒置放于38℃培养箱中培养24～48h，选取菌落数少于300个的平板，将其全部菌落挑取并分别接种至LB肉汤培养基试管中，在37℃转速200r/min的摇床中培养12h。
[0023]2、菌种的初筛
[0024]将培养好的菌液在10000r/min条件下离心去除菌体保留菌液，根据GB1886.174中的方法检测各个菌液中的酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶的酶活力，分别选取产酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶最高的10个菌株。
[0025]3、菌种的复筛
[0026](1)将初筛选取的菌株分本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种地衣芽孢杆菌，其特征在于，所述地衣芽孢杆菌命名为地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)phb01，已于2023年5月14日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所，保藏编号为GDMCCNo.63466。2.根据权利要求1所述的地衣芽孢杆菌，其特征在于，所述地衣芽孢杆菌phb01的序列如SEQ ID NO.1所示。3.权利要求1～2任一项所述的地衣芽孢杆...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭勃，侯莎，童星，万吉林，
申请(专利权)人：天典生物科技有限公司广东海天创新技术有限公司，
类型：发明
国别省市：