一种基因组合物及其在检测桑花叶型萎缩病病原中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种基因组合物及其在检测桑花叶型萎缩病病原中的应用，所述桑花叶型萎缩病病原包括桑脉带相关病毒MVBaV、桑花叶萎缩病相关病毒MVDaV和桑植原体Candidatus Phytoplasma asteris MD中的任意一种或几种。本发明专利技术基于3种桑花叶型萎缩病原的6个靶标基因(NSs基因、Gly基因、Rep基因、CP基因、rpl基因和tufB基因)设计扩增引物，通过PCR靶向富集对应的病原靶标序列后进行高通量测序，根据测序结果可快速判别待测样本中的桑花叶型萎缩病原并确定其含量。本发明专利技术提供的检测方法不仅特异性好，灵敏度高，而且假阳性率低，检测结果可靠性强，能准确鉴别表观上疑似桑花叶型萎缩的病例及其病原类别，具有广泛的应用和推广前景。景。景。

【技术实现步骤摘要】
Phytoplasma asteris MD中的任意一种或几种；
[0015]所述基因组合物为检测靶标；
[0016]所述基因组合物包括基因1～3；
[0017]所述基因1选自桑脉带相关病毒MVBaV的NSs基因和Gly基因中的至少一种；所述NSs基因的NCBI号：NC_026619.1，所述Gly基因的NCBI号：NC_026618.2；
[0018]所述基因2选自桑花叶萎缩病相关病毒MVDaV的Rep基因和CP基因中的至少一种；所述Rep基因的NCBI号：AKM94186.1；所述CP基因的NCBI号：AJW66439.1；
[0019]所述基因3选自桑植原体Candidatus Phytoplasma asteris MD的rpl基因和tufBB基因中的至少一种，所述rpl基因的NCBI号：CP085837.1，所述tufB基因的NCBI号：CP085837.1。
[0020]检测上述基因组合物的试剂在检测桑花叶型萎缩病病原中的应用也应在本专利技术的保护范围之内。
[0021]一种用于检测桑花叶型萎缩病病原的引物组合物，所述桑花叶型萎缩病病原包括桑脉带相关病毒MVBaV、桑花叶萎缩病相关病毒MVDaV和桑植原体Candidatus Phytoplasma asteris MD中的任意一种或几种；所述引物组合物以基因组合物为靶标；所述基因组合物包括基因1～3；所述基因1选自桑脉带相关病毒MVBaV的NSs基因和Gly基因中的至少一种；所述基因2选自桑花叶萎缩病相关病毒MVDaV的Rep基因和CP基因中的至少一种；所述基因3选自桑植原体Candidatus Phytoplasma asteris MD的rpl基因和tufBB基因中的至少一种。
[0022]优选地，所述引物组合物包含引物对1～3；
[0023]所述引物对1选自核苷酸序列如SEQ ID NO.1～2的引物对和核苷酸序列如SEQ ID NO.3～4的引物对中的至少一种，核苷酸序列如SEQ ID NO.1～2的引物对检测桑脉带相关病毒MVBaV的NSs基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.3～4的引物对检测桑脉带相关病毒的Gly基因；
[0024]所述引物对2选自核苷酸序列如SEQ ID NO.5～6的引物对和核苷酸序列如SEQ ID NO.9～10的引物对中的至少一种，核苷酸序列如SEQ ID NO.5～6的引物对检测桑花叶萎缩病相关病毒MVDaV的Rep基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.9～10的引物对检测桑花叶萎缩病相关病毒MVDaV的CP基因；
[0025]所述引物对3选自核苷酸序列如SEQ ID NO.13～14的引物对和核苷酸序列如SEQ ID NO.17～18的引物对中的至少一种，核苷酸序列如SEQ ID NO.13～14的引物对检测桑植原体Candidatus Phytoplasma asteris MD的rpl基因；核苷酸序列如SEQ ID NO.17～18的引物对检测桑植原体Candidatus Phytoplasma asteris MD的tufB基因。
[0026]更优选地，所述引物对1为核苷酸序列如SEQ ID NO.1～2的引物对和核苷酸序列如SEQ ID NO.3～4的引物对。
[0027]更优选地，所述引物对2为核苷酸序列如SEQ ID NO.5～6的引物对和核苷酸序列如SEQ ID NO.9～10的引物对。
[0028]更优选地，所述引物对3为核苷酸序列如SEQ ID NO.13～14的引物对和核苷酸序列如SEQ ID NO.17～18的引物对。
[0029]进一步优选地，所述引物组合物包含核苷酸序列如SEQ ID NO.1～2的引物对、核
苷酸序列如SEQ ID NO.3～4的引物对、核苷酸序列如SEQ ID NO.5～6的引物对、核苷酸序列如SEQ ID NO.9～10的引物对、核苷酸序列如SEQ ID NO.13～14的引物对和核苷酸序列如SEQ ID NO.17～18的引物对。
[0030]任一上述引物组合物在检测桑花叶型萎缩病病原和/或制备检测桑花叶型萎缩病病原的试剂盒中的应用也应在本专利技术的保护范围之内。
[0031]一种检测桑花叶型萎缩病病原的方法，以待测样本的核酸为模板，使用引物组合物进行PCR扩增；
[0032]所述桑花叶型萎缩病病原包括桑脉带相关病毒MVBaV、桑花叶萎缩病相关病毒MVDaV和桑植原体Candidatus Phytoplasma asteris MD中的任意一种或几种；所述引物组合物以基因组合物为靶标；所述基因组合物包括基因1～3；所述基因1选自桑脉带相关病毒MVBaV的NSs基因和Gly基因中的至少一种；所述基因2选自桑花叶萎缩病相关病毒MVDaV的Rep基因和CP基因中的至少一种；所述基因3选自桑植原体Candidatus Phytoplasma asteris MD的rpl基因和tufBB基因中的至少一种。
[0033]优选地，使用引物组合物进行PCR扩增，所述引物组合物包含引物对1～3；
[0034]所述引物对1选自核苷酸序列如SEQ ID NO.1～2的引物对和核苷酸序列如SEQ ID NO.3～4的引物对中的至少一种，核苷酸序列如SEQ ID NO.1～2的引物对检测桑脉带相关病毒MVBaV的NSs基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.3～4的引物对检测桑脉带相关病毒的Gly基因；
[0035]所述引物对2选自核苷酸序列如SEQ ID NO.5～6的引物对和核苷酸序列如SEQ ID NO.9～10的引物对中的至少一种，核苷酸序列如SEQ ID NO.5～6的引物对检测桑花叶萎缩病相关病毒MVDaV的Rep基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.9～10的引物对检测桑花叶萎缩病相关病毒MVDaV的CP基因；
[0036]所述引物对3选自核苷酸序列如SEQ ID NO.13～14的引物对和核苷酸序列如SEQ ID NO.17～18的引物对中的至少一种，核苷酸序列如SEQ ID NO.13～14的引物对检测桑植原体Candidatus Phytoplasma asteris MD的rpl基因；核苷酸序列如SEQ ID NO.17～18的引物对检测桑植原体Candidatus Phytoplasma asteris MD的tufB基因。
[0037]更优选地，所述引物对1为核苷酸序列如SEQ ID NO.1～2的引物对和核苷酸序列如SEQ ID NO.3～4的引物对。
[0038]更优选地，所述引物对2为核苷酸序列如SEQ ID NO.5～6的引物对和核苷酸序列如SEQ ID NO.9～10的引物对。
[0039]更优选地，所述引物对3为核苷酸序列如SEQ ID NO.13～14的引物对和核苷酸序列如SEQ ID NO.17～18的引物对。
[0040]进一步优选地，所述引物组合物包含核苷酸序列如SEQ ID NO.1～2的引物对、核苷酸序列如本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基因组合物在检测桑花叶型萎缩病病原中的应用，其特征在于，所述桑花叶型萎缩病病原包括桑脉带相关病毒MVBaV、桑花叶萎缩病相关病毒MVDaV和桑植原体Candidatus Phytoplasma asteris MD中的任意一种或几种；所述基因组合物为检测靶标；所述基因组合物包括基因1～3；所述基因1选自桑脉带相关病毒MVBaV的NSs基因和Gly基因中的至少一种；所述基因2选自桑花叶萎缩病相关病毒MVDaV的Rep基因和CP基因中的至少一种；所述基因3选自桑植原体Candidatus Phytoplasma asteris MD的rpl基因和tufBB基因中的至少一种。2.检测权利要求1中所述基因组合物的试剂在检测桑花叶型萎缩病病原中的应用。3.一种用于检测权利要求1中所述桑花叶型萎缩病病原的引物组合物，其特征在于，所述引物组合物以权利要求1中所述的基因组合物为靶标。4.根据权利要求3所述的引物组合物，其特征在于，包含引物对1～3；所述引物对1选自核苷酸序列如SEQ ID NO.1～2的引物对和核苷酸序列如SEQ ID NO.3～4的引物对中的至少一种；所述引物对2选自核苷酸序列如SEQ ...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘吉平，王亚琴，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：