超高效液相色谱-串联质谱检测海参及其制品中非法添加糖类物质的方法技术

本发明专利技术公开了一种超高效液相色谱

【技术实现步骤摘要】
超高效液相色谱
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串联质谱检测海参及其制品中非法添加糖类物质的方法


[0001]本专利技术涉及食品检测领域，具体涉及一种超高效液相色谱
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串联质谱检测海参及其制品中非法添加糖类物质的方法。

技术介绍

[0002]海参作为我国“海八珍”之一，一直是餐桌上的佳肴。近年来，海参及其制品质量受到社会高度关注。一些不法商贩在制作干海参的过程中为了达到塑性，增重等目的添加糖类物质，严重影响海参干制品的质量和营养价值。外源性糖主要指在海参加工过程中人为加入的糖类成分，有果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、低聚糖等。目前针对海参及其制品中外源性糖类的分析研究，大多局限在还原糖领域，不能充分反映产品中掺加的总糖情况(无法测定非还原糖)，也不能反应具体添加了哪些外源性糖。相关标准中规定海参中水溶性总糖糖的限量定为≤3.0g/100g，检测方法为测定还原性糖类物质的方法。目前市场上海参加工生产企业有意避开标准指标，在干海参加工过程中加入非还原糖，得到掺糖干海参。
[0003]目前针对海参基质检测糖类物质的研究不多，前处理手段主要集中在衍生法、沉淀蛋白法、检测手段集中在比色法、液相色谱法、离子色谱法，上述方法存在仅能测定总糖、需要衍生操作繁琐等缺陷。由于高效液相色谱串联质谱法具有选择性强、灵敏度高和检测通量大等优点，所以本研究采用超高效液相色谱
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串联质谱法，优化离子源，最终选择APCI源来进行检测。

技术实现思路

[0004]面对舆情，现有的方法以检测还原性糖为主，不包含风险最高的蔗糖。本申请利用高比例有机相高温超声提取目标物，优化QuEChERS方法选择新型QuEChERS净化材料，利用氨基色谱柱和APCI离子源实现目标物精准分离和检测信号增强的作用。建立快速、高通量的海参掺糖检测技术以适用于目前市场监管的迫在眉睫，本研究对维护和规范海参市场，保护消费者的权益有重大意义。
[0005]本专利技术是通过以下技术方案实现的：
[0006]一种超高效液相色谱
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串联质谱检测海参及其制品中非法添加糖类物质的方法，包括以下步骤：
[0007](1)样品前处理：
[0008]提取：取样品，均质，粉碎，准确称取均质后的试样于具塞离心管中，加入乙醇
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水溶液，涡旋，水浴震荡，离心，待净化；
[0009]净化：取上述提取液，注入内含净化填料的净化管中，涡旋混匀，离心滤膜过滤，供检测；
[0010](2)标准溶液的配置：
[0011]分别准确称取5种糖类标准物质于10mL容量瓶中，水溶解并定容至刻度，配制质量
浓度为5.00mg/mL的标准储备液，4℃避光保存；分别移取各标准物质储备液2.00mL于10mL容量瓶，用甲醇稀释，配制浓度为1mg/mL的混合标准中间液；移取适量混合标准中间液，用流动相逐级稀释，配制浓度为10～750μg/mL的混合标准工作液；
[0012](3)超高效液相色谱
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质谱检测。
[0013]进一步地，提取的条件为：取样品适量，均质粉碎，准确称取均质后的试样1.0g于50mL具塞离心管中，加入20mL体积比为8:2的乙醇
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水溶液，涡旋混匀30s后，50℃水浴震荡150min，于8000r/min离心5min，待净化；
[0014]净化的条件：取上述提取液1.5mL，注入内含净化填料的净化管中，净化填料为C18:100mg；EMR:100mg，涡旋混匀1min，于10000r/min离心3min；取上清液经过0.22μm滤膜过滤，供UPLC
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MS/MS检测。
[0015]进一步地，液相色谱条件为：色谱柱：Acchrom NH2柱(5μm，2.1*100mm)；柱温：40℃；流动相A：水溶液；流动相B：乙腈。；梯度洗脱程序：0～2min，90％B～90％B；2.0～5.0min，90％～80％ B；5.0～9min，80％～60％ B；9.0～9.2min，60％～45％ B；9.2～10min，45％ B；10～10.5min，45％～90％B；10.5～14min，90％ B；进样量：2μL。
[0016]进一步地，质谱条件为：大气压化学电离离子源，负离子模式；扫描模式：多反应监测模式；雾化气流量：3L/min；接口温度：350℃；脱溶剂气温度：600℃；DL温度：200℃；加热块温度：200℃；干燥器流量：6L/min。5种目标物的监测离子对，去簇电压(DP)及碰撞能参数见表1。
[0017]表1 5种糖类物质的保留时间、母离子、子离子及碰撞能量
[0018][0019]注：*为定量离子
[0020]有益效果
[0021]本申请建立了改进式QuEChERS净化液相色谱
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串联质谱测定海参及其制品中非法添加的糖类物质。优化了色谱条件、提取溶剂和提取条件、净化手段。应用液相色谱法串联质谱法配APCI源测糖，大大降低了目标物的检出限，应用改进式QuEChERS净化，有效提高了
净化效率，减少了杂质的干扰，实现了快速、精准定性定量检测。更为重要的是填补了相关标准的漏洞，为打击非法添加掺糖海参提供了有效的检测手段，保障消费者的合法权益。
附图说明
[0022]图1为5种糖类物质总离子流图(50μg/mL)；
[0023]图2为三种色谱柱分离目标物效果的比较(A:Waters BEH AMIDE；B:Waters NH2；C:Acchrom NH2)；
[0024]图3为不同含量的乙醇提取液测得阳性样品的含量；
[0025]图4为a)不同提取温度提取阳性样品的含量；b)不同提取时间提取阳性样品的含量；
[0026]图5为基质效应消除前后5种糖类物质的基质效应K值；
[0027]图6为干海参中5种糖类物质的MRM谱图(浓度：50ug/mL；(a)～(e):果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖)。
具体实施方式
[0028]实施例1
[0029]1实验部分
[0030]1.1仪器、试剂及材料
[0031]岛津LCMS
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8050三重四级杆液质联用仪(日本岛津公司)带APCI离子源；MilliQ去离子水发生器(美国Millipore公司)、IKA MS3涡旋混合器；0.22μm有机相针式滤器(中国ANPEL公司)。
[0032]乙腈(美国Merck公司)；甲酸(美国Fisher Scientific公司)；乙醇和无水硫酸镁(上海国药集团)。C18净化填料、PSA净化填料、石墨化炭黑(GCB)、酸性氧化铝净化填料、中性氧化铝净化填料、碱性氧化铝净化填料、弗罗里硅土净化填料(Florisil)均购自天津Agela Technologies公司；增强型脂质去除净化剂(QuEChERS dSPE EMR
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Lipid)(美国Agilent T本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种超高效液相色谱
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串联质谱检测海参及其制品中非法添加的糖类物质的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)样品前处理：提取：取样品，均质，粉碎，准确称取均质后的试样于具塞离心管中，加入乙醇
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水溶液，涡旋，水浴震荡，离心，待净化；净化：取上述提取液，注入内含净化填料的净化管中，涡旋混匀，离心滤膜过滤，供检测；(2)标准溶液的配置：分别准确称取5种糖类标准物质于10mL容量瓶中，水溶解并定容至刻度，配制质量浓度为5.00mg/mL的标准储备液，4℃避光保存；分别移取各标准物质储备液2.00mL于10mL容量瓶，用甲醇稀释，配制浓度为1mg/mL的混合标准中间液；移取适量混合标准中间液，用流动相逐级稀释，配制浓度为10～750μg/mL的混合标准工作液；(3)超高效液相色谱
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质谱检测。2.根据权利要求1所述的一种超高效液相色谱
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串联质谱检测海参及其制品中非法添加的糖类物质的方法，其特征在于，提取的条件为：取样品适量，均质粉碎，准确称取均质后的试样1.0g于50mL具塞离心管中，加入20mL体积比为8:2的乙醇
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水溶液，涡旋混匀30s后，50℃水浴震荡150min，于8000r/min离心5min，待净化；净...

【专利技术属性】
技术研发人员：程志，魏莉莉，薛霞，胡梅，刘艳明，宿书芳，周传静，
申请(专利权)人：山东省食品药品检验研究院，
类型：发明
国别省市：