一种富硒油菜薹中硒形态的分析检测方法技术

本发明专利技术提供了一种富硒油菜薹中硒形态的分析检测方法，本发明专利技术属于成分分析技术领域。本发明专利技术提供的一种富硒油菜薹中硒形态的分析检测方法，包括如下步骤：(1)取富硒油菜薹样品，液氮研磨，得到样品粉末；(2)将所述样品粉末与蛋白酶XIV的水溶液混合，进行混合超声酶解，分离液体部分，得到提取液；(3)采用高效液相色谱

【技术实现步骤摘要】
一种富硒油菜薹中硒形态的分析检测方法


[0001]本专利技术涉及成分分析
，尤其涉及一种富硒油菜薹中硒形态的分析检测方法。

技术介绍

[0002]硒在维持人体生命健康过程中发挥重要生物学功能，开发富硒农产品，提高居民日常硒摄入量，对保障我国人民营养健康具有重要意义。富硒油菜薹为满足国民日常膳食补硒需求提供了新的重要途径，有待进一步开发利用。
[0003]富硒产品中有机硒含量的占比是评估富硒产品质量的重要指征，现行国家标准GB 5009.93
‑
2017《食品安全国家标准食品中硒的测定》及GB 5009.268
‑
2016《食品安全国家标准食品中多元素的测定》规定了富硒食品中总硒的测定方法，但目前缺乏针对具体硒形态测定的技术标准。
[0004]对富硒产品中不同形态硒进行检测分析，首先需要建立一种可以高效，稳定的提取出富硒产品中各种硒形态的样品前处理方法。中国专利CN 112129864B公开了一种富硒植物干粉中硒形态测定的方法(公告日2022.04.01)，其主要技术思路为先利用去离子水或Tris
‑
HCl溶液提取游离硒，然后在利用多步酶解提取结合硒。该方法不仅需要对游离硒和结合硒进行分别提取，而且还采用了多步酶解步骤，提取过程较为复杂，效率低。
[0005]此外，不同富硒样品中硒结合形式不一，表现出不同的形态种类，导致不同样品的硒提取释放方式不同，且不同样品在硒形态提取过程中产生的基质和底物不同，因此很难形成统一的样品前处理方法来提取不同样品中的硒形态。因此建立一种可以高效，稳定的提取出富硒产品中各种硒形态的样品前处理方法是必要的。

技术实现思路

[0006]针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种同时测定富硒油菜薹中5种硒形态的分析检测方法，解决了富硒油菜薹中硒形态提取和检测的技术问题。
[0007]为此，本专利技术提供了以下技术方案：
[0008]本专利技术提供了一种富硒油菜薹中硒形态的分析检测方法，包括如下步骤：
[0009](1)取富硒油菜薹样品，液氮研磨，得到样品粉末；
[0010](2)将所述样品粉末与蛋白酶XIV的水溶液混合，进行混合超声酶解，分离液体部分，得到提取液；
[0011](3)采用高效液相色谱
‑
电感耦合等离子体质谱联用法测定所述提取液中不同形态硒的含量。
[0012]优选的，所述样品粉末的粒径为100
‑
200目。
[0013]优选的，所述样品粉末与蛋白酶XIV的水溶液的质量体积比为1g：100
‑
120ml。
[0014]优选的，所述所述蛋白酶XIV的水溶液中蛋白酶XIV的浓度为8
‑
12mg/ml。
[0015]优选的，所述蛋白酶XIV的酶活力大于等于3.5units/mg；所述水为超纯水，所述超
纯水的电导率大于18.2MΩ
·
cm。
[0016]优选的，所述蛋白酶XIV的用量为样品粉末质量的7.5
‑
10％。
[0017]优选的，所述混合超声酶解的温度为20
‑
25℃，所述混合超声酶解的时间为35
‑
45min，所述超声的功率为150
‑
180W。
[0018]优选的，所述分离液体部分的方法为离心，所述离心的转速为10000
‑
14000rpm，时间为18
‑
22min，温度为0
‑
4℃。
[0019]优选的，所述高效液相色谱
‑
电感耦合等离子体质谱联用法中高效液相色谱的条件为：
[0020]色谱柱：阴离子交换色谱柱(HamiltonPRP
‑
X100，250
×
4.1mm，10μm)；
[0021]流动相：40mM磷酸氢二铵(PH＝6.0)；
[0022]流速：0
‑
5min:0.8ml/min，5
‑
7min:1.2ml/min，7
‑
15min:1.5ml/min；
[0023]进样体积：30μL；
[0024]柱温：30℃。
[0025]优选的，所述不同形态硒包括硒代胱氨酸、甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸、硒酸根和亚硒酸根。
[0026]本专利技术在恒温超声辅助下利用蛋白酶XIV的水溶液酶解提取富硒油菜薹中硒形态，该样品处理方法简便，稳定，提取率高，可在1h内提取出富硒油菜薹中不同形态硒化物。同时以磷酸氢二铵溶液为流动相，Hamilton PRP
‑
X100分析柱为固定相，建立高效液相色谱
‑
电感耦合等离子体质谱联用(HPLC
‑
ICP
‑
MS)技术同时测定富硒油菜薹中5种硒形态的检测方法。2.HPLC
‑
ICP
‑
MS联用技术可在15
‑
20min内同时对富硒油菜薹中5中形态硒化物进行定性和定量分析，检测时间短，所需试剂种类少，试剂毒性较低。
[0027]因此本专利技术的方法具有操作简便、试剂用量少、提取率高、分析时间短、检出限低、稳定性好、检测准确等特点，可同时测定富硒油菜薹中硒代胱氨酸、甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸、硒酸盐和亚硒酸盐5种硒形态，解决和弥补了现有检测方法的不足。
[0028]本专利技术提供了一套高效、精准的鉴定富硒油菜薹中硒代胱氨酸、甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸、亚硒酸盐和硒酸盐的技术方案，为进一步深入了解油菜的硒富集特征，从功能营养的角度开发富硒油菜产品提供技术支持。
附图说明
[0029]图1为实施例1中使用不同蛋白酶提取的富硒油菜薹中5种硒形态含量及总硒含量。
[0030]图2为实施例1中使用不同量的蛋白酶XIV提取的富硒油菜薹中5种硒形态含量及总硒含量。
[0031]图3为实施例1中不同处理时间提取的富硒油菜薹中5种硒形态含量及总硒含量。
[0032]图4为实施例1中不同样品前处理定容体积提取的富硒油菜薹中5种硒形态含量及总硒含量。
[0033]图5为实施例1中色谱条件Ⅰ分离5种形态硒的色谱图，从左到右色谱峰依次为硒代胱氨酸(SeCys2)、甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)、亚硒酸根(SeIV)、硒代蛋氨酸(SeMet)、硒酸根(SeVI)。
[0034]图6为实施例1中色谱条件Ⅱ分离5种形态硒的色谱图，从左到右色谱峰依次为硒酸根(SeVI)、亚硒酸根(SeIV)、硒代胱氨酸(SeCys2)、甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)、硒代蛋氨酸(SeMet)。
具体实施方式
[0035]下面结合实施例对本专利技术提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本专利技术保护范围的限定。
[0036]实施例1...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种富硒油菜薹中硒形态的分析检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)取富硒油菜薹样品，液氮研磨，得到样品粉末；(2)将所述样品粉末与蛋白酶XIV的水溶液混合，进行混合超声酶解，分离液体部分，得到提取液；(3)采用高效液相色谱
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电感耦合等离子体质谱联用法测定所述提取液中不同形态硒的含量。2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述样品粉末的粒径为100
‑
200目。3.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述样品粉末与蛋白酶XIV的水溶液的质量体积比为1g：100
‑
120ml。4.如权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述所述蛋白酶XIV的水溶液中蛋白酶XIV的浓度为8
‑
12mg/ml。5.如权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述蛋白酶XIV的酶活力大于等于3.5units/mg；所述水为超纯水，所述超纯水的电导率大于18.2MΩ
·
cm。6.如权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述蛋白酶XIV的用量为样品粉末质量的7.5
‑
10％。7.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述混合超声酶解的温度为20
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：王汉中，詹杰鹏，顿小玲，王新发，祁蒙，任丽军，唐德剑，刘贵华，
申请(专利权)人：安康市富硒产品研发中心，
类型：发明
国别省市：