一种六项儿茶酚胺类激素质谱检测方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种六项儿茶酚胺类激素质谱检测方法及其应用，包括以下步骤：S100，建立6种儿茶酚胺代谢物的标准曲线；S200，向血浆样本中加入内标溶液，形成第一混合物；S300，对血浆样品进行样本预处理，形成第二混合物；S400，在样本预处理后，采用固相萃取法洗脱出血浆样品中的儿茶酚胺代谢物；S500，使用氮气吹干洗脱液，并复溶获得儿茶酚胺代谢物样本；S600，对目标组分进行高效液相色谱串联质谱检测，采集信号，计算浓度。该检测方法利用电喷雾正离子源特征离子扫描模式，优化了检测的过程，具有增加样本检测通量，节约检测时间的优势，并且能够排除传统免疫法抗原

【技术实现步骤摘要】
一种六项儿茶酚胺类激素质谱检测方法及其应用


[0001]本专利技术涉及体外检测
，具体为一种六项儿茶酚胺类激素质谱检测方法及其应用。

技术介绍

[0002]嗜铬细胞瘤(Pheochromocytoma，PCC)是一种分泌儿茶酚胺代谢物的肾上腺髓质肿瘤，是肾上腺意外瘤的一种，嗜铬细胞瘤可能独立发生，也可能作为遗传性综合征中的一部分发生，其主要病因尚未明确，部分患者存在约17个致病基因中的1个或多个基因种系突变，并存在家族遗传性，该疾病在持续性高血压人群中比例不及0.1％，在肾上腺意外瘤中比例约为5％。
[0003]其临床症状多样，最主要表现为阵发性或持续性高血压，阵发性头痛、心悸及出汗三联征为其典型三联症状，但不少患者无任何临床症状，诊断较为困难，且常规降压治疗往往效果较差，而随着疾病进展会发展为嗜铬细胞瘤危象，诱发急性冠脉综合征、休克、脑卒中、心力衰竭和儿茶酚胺心肌病等严重的心血管事件，威胁生命。
[0004]根据2021年发布的《肾上腺意外瘤多学科管理专家共识》，建议所有肾上腺意外瘤患者测定血或尿儿茶酚胺代谢物，嗜铬细胞瘤的定性诊断首选间羟肾上腺素类似物(MNs)，即甲氧基肾上腺素和甲氧基去甲肾上腺素，血浆中MNs含量可特异性反应肿瘤细胞的代谢产物，受影响因素少，水平波动小，具有高敏感度、高特异性的优点。
[0005]检测儿茶酚胺代谢物的24h尿样本操作繁琐，患者依从性较低，因此临床采用尿样本较少，多采用血浆样本进行检测，由于儿茶酚胺类物质易受刺激因素干扰而产生波动，检测前患者12h内应禁食、禁烟、禁咖啡因，并避免过度体力劳动，同时三环类抗抑郁药、酚苄明等药物以及合并严重抑郁、惊恐、心力衰竭的患者检测结果可能导致假阳性。
[0006]检测结果正常可基本排除患有嗜铬细胞瘤的可能，一般高于参考区间1.5～2.0倍以上，考虑确诊可能，但还应当结合病史和影像学结果综合判断，对于儿茶酚胺检测结果轻度升高的患者，在排除假阳性后应多次复查，必要时进行核素显像扫描、生长抑素受体显像等检查。
[0007]目前专家共识推荐一般采用液相色谱串联质谱法(LC
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MS/MS)进行检测儿茶酚胺代谢物，传统的免疫分析难以对多种儿茶酚胺类物质同时定量检测，且缺乏特异性抗体，多种儿茶酚胺代谢物的结构近似，易造成抗原
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抗体交叉反应，因此需要使用高精准的质谱法进行多种代谢物分析检测。

技术实现思路

[0008]本专利技术目的是提供一种六项儿茶酚胺类激素质谱检测方法及其应用，以解决现有技术中，传统的免疫分析难以对多种儿茶酚胺类物质同时定量检测，且缺乏特异性抗体，多种儿茶酚胺代谢物的结构近似，易造成抗原
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抗体交叉反应的问题。
[0009]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：本专利技术第一方面提供一种六项儿茶
酚胺类激素质谱检测方法，包括以下步骤：
[0010]S100，建立6种儿茶酚胺代谢物的标准曲线：
[0011]建立待测儿茶酚胺代谢物的标准曲线，所述待检测儿茶酚胺代谢物包括多巴胺、肾上腺素、去甲肾上腺素、甲氧基肾上腺素、甲氧基去甲肾上腺素和3
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甲氧酪胺；
[0012]S200，向血浆样本中加入内标溶液，形成第一混合物：
[0013]确定所述待检测儿茶酚胺代谢物的特征离子，向血浆样本中加入内标溶液；
[0014]S300，对血浆样品进行样本预处理，形成第二混合物；
[0015]S400，在样本预处理后，采用固相萃取法洗脱出血浆样品中的儿茶酚胺代谢物；
[0016]S500，使用氮气吹干洗脱液，并复溶获得儿茶酚胺代谢物样本；
[0017]S600，对目标组分进行高效液相色谱串联质谱检测，采集信号，计算浓度：
[0018]通过高效液相色谱
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质谱联用法，定量检测所述儿茶酚胺代谢物样本中待检测儿茶酚胺代谢物的含量；其中，质谱的离子模式为“电喷雾离子源”的特征正离子扫描模式。
[0019]优选的，所述S100中建立6种儿茶酚胺代谢物的标准曲线具体包括：
[0020]S110，配制不同浓度的标准品；
[0021]S120，向各浓度标准溶液中加入内标物；
[0022]S130，对各浓度标准溶液进行样本预处理；
[0023]S140，预处理后固相萃取，收集含目标组分的溶液；
[0024]S150，使用氮气吹干洗脱液并复溶；
[0025]S160，对标准溶液进行高效液相色谱串联质谱检测，采集信号，拟合曲线。
[0026]优选的，所述S200中向血浆样本中加入内标溶液，具体包括：
[0027]取200ul血浆样品；
[0028]在所述血浆样品中，加入20ul内标溶液，形成第一混合物；
[0029]将所述第一混合物2500rpm混合震荡2min，并涡旋混匀。
[0030]优选的，所述S400中采用固相萃取法洗脱出血浆样品中的儿茶酚胺代谢物，具体包括：
[0031]活化固相萃取小柱，先加入200ul甲醇，再用200ul纯水；
[0032]施加正压全部压下，需控制流速3
‑
5s/滴，并弃去活化后试剂；
[0033]加载样品，将涡旋后的所述第二混合物取400ul加入到WCX板孔中，施加正压全部压下，控制流速3
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5s/滴，并弃去；
[0034]加载样品后，进行淋洗并洗脱，获得第三混合物。
[0035]优选的，所述淋洗具体包括：
[0036]第一次淋洗，向每孔加入200ul水，正压压下，控制流速3
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5s/滴，弃去；
[0037]第二次淋洗，向每孔加入200ul淋洗溶液，正压压下，控制流速3
‑
5s/滴，弃去；
[0038]完成所述第一次淋洗和第二次淋洗后，加大压力至0.2MPa，正压30s，去除柱床中的溶剂。
[0039]优选的，所述洗脱具体包括：
[0040]洗脱样本，向板孔中加入30ul洗脱溶液，正压压下，控制流速3
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5s/滴；
[0041]重复洗脱样本一次，合并收集，得到第三混合物，总体积60uL。
[0042]优选的，所述S500使用氮气吹干洗脱液，具体包括：
[0043]将第三混合物于45℃氮气下吹干，约30min。
[0044]优选的，所述S500中复溶获得儿茶酚胺代谢物样本，具体包括：
[0045]向氮气吹干后的管孔中加入50ul复溶溶液，1500rpm混合震荡10min，得到儿茶酚胺代谢物样本。
[0046]优选的，所述S600中高效液相色谱
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质谱联用法的工作条件，具体如下：
[0047]毛细管电压：0.30kV；
[0048]锥孔电压：25V；
[0049]震源偏移量：60V；
[0050]脱溶剂气本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种六项儿茶酚胺类激素质谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S100，建立6种儿茶酚胺代谢物的标准曲线：建立待测儿茶酚胺代谢物的标准曲线，所述待检测儿茶酚胺代谢物包括多巴胺、肾上腺素、去甲肾上腺素、甲氧基肾上腺素、甲氧基去甲肾上腺素和3
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甲氧酪胺；S200，向血浆样本中加入内标溶液，形成第一混合物：确定所述待检测儿茶酚胺代谢物的特征离子，向血浆样本中加入内标溶液；S300，对血浆样品进行样本预处理，形成第二混合物；S400，在样本预处理后，采用固相萃取法洗脱出血浆样品中的儿茶酚胺代谢物；S500，使用氮气吹干洗脱液，并复溶获得儿茶酚胺代谢物样本；S600，对目标组分进行高效液相色谱串联质谱检测，采集信号，计算浓度：通过高效液相色谱
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质谱联用法，定量检测所述儿茶酚胺代谢物样本中待检测儿茶酚胺代谢物的含量；其中，质谱的离子模式为“电喷雾离子源”的特征正离子扫描模式。2.根据权利要求1所述的一种六项儿茶酚胺类激素质谱检测方法，其特征在于，所述S100中建立6种儿茶酚胺代谢物的标准曲线具体包括：S110，配制不同浓度的标准品；S120，向各浓度标准溶液中加入内标物；S130，对各浓度标准溶液进行样本预处理；S140，预处理后固相萃取，收集含目标组分的溶液；S150，使用氮气吹干洗脱液并复溶；S160，对标准溶液进行高效液相色谱串联质谱检测，采集信号，拟合曲线。3.根据权利要求1所述的一种六项儿茶酚胺类激素质谱检测方法，其特征在于，所述S200中向血浆样本中加入内标溶液，具体包括：取200ul血浆样品；在所述血浆样品中，加入20ul内标溶液，形成第一混合物；将所述第一混合物2500rpm混合震荡2min，并涡旋混匀。4.根据权利要求1所述的一种六项儿茶酚胺类激素质谱检测方法，其特征在于，所述S400中采用固相萃取法洗脱出血浆样品中的儿茶酚胺代谢物，具体包括：活化固相萃取小柱，先加入200ul甲醇，再用200ul纯水；施加正压全部压下，需控制流速3
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5s/滴，并弃去活化后试剂；加载样品，...

【专利技术属性】
技术研发人员：石一云，张良滔，孙晓宇，吴莉萍，杨江涛，
申请(专利权)人：深圳爱湾医学检验实验室，
类型：发明
国别省市：