一种游离睾酮的高效液相色谱串联质谱检测方法技术

本发明专利技术提供了一种游离睾酮的高效液相色谱串联质谱检测方法，包括以下步骤：S100，建立游离睾酮的标准曲线；S200，在待测的生物样品中加入PBS，形成第一混合物；S300，对第一混合物进行超滤分离；S400，加入内标和盐酸羟胺进行衍生，形成第二混合物；S500，对第二混合物进行液液萃取，取上清，氮气吹干后复融；S600，对游离睾酮进行高效液相色谱串联质谱检测，采集信号，计算浓度。本发明专利技术以超滤加衍生后液液萃取作为前处理，利用高效液相色谱串联质谱进行检测，单样本检测时间为4.5min，采用超滤法，实现游离睾酮和蛋白结合型睾酮的完全分离，加上衍生和液液萃取的前处理可提升整体方法的灵敏度。敏度。敏度。

【技术实现步骤摘要】
一种游离睾酮的高效液相色谱串联质谱检测方法


[0001]本专利技术涉及激素检测
，具体为一种游离睾酮的高效液相色谱串联质谱检测方法。

技术介绍

[0002]睾酮是雄激素的主要成分，主要与性激素结合蛋白和清蛋白结合，在外周血循环中，只有小部分(2％～3％)未与蛋白质结合，称为游离睾酮，只有游离部分才能进入细胞并发挥雄激素活性，已有研究表明，游离睾酮的测定，对于许多疾病的诊断特别是对于男性的雄激素缺乏症以及女性雄激素过多症有指导意义，但在常规的临床实践中基于技术上的困难，加上游离睾酮在体内水平很低，特别是女性人群，正常游离睾酮水平为＜10.9pg/mL，对现有检测技术挑战非常大。
[0003]针对游离睾酮的测定，目前尚无统一的标准，平衡透析法成本高、方法复杂，耗时长，另外，平衡透析过程容易发生体积迁移效应，影响结果的准确性，目前已较少使用；而由于放射免疫法和酶联免疫法中同一抗体会与多种抗原发生反应，灵敏度、准确度和特异性较差，不能准确反映机体外周血液中游离睾酮的真实水平，目前有用Vermeulen公式来计算游离睾酮水平，但是，该计算公本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种游离睾酮的高效液相色谱串联质谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S100，建立游离睾酮的标准曲线；S200，在待测的生物样品中加入PBS，形成第一混合物：在待测的生物样品中加入PBS，振荡混匀2min，充分混合，形成第一混合物；S300，对第一混合物进行超滤分离：将第一混合物转移到超滤管，在37℃恒温孵育30min，孵育完成后，然后进行超滤分离；S400，加入内标和盐酸羟胺进行衍生，形成第二混合物：向待测样本中分别加入内标溶液，充分混合，然后加入20uL 15％的盐酸羟胺溶液，充分混合后，在70℃下衍生15min，形成第二混合物；S500，对第二混合物进行液液萃取，取上清，氮气吹干后复融：向待测样本加入1200uL的萃取溶剂，充分混合后，在12000rpm的转速下，离心10min，取1000uL上清液，50℃下氮吹30min，加入60uL20％甲醇水溶液，充分混合；S600，对游离睾酮进行高效液相色谱串联质谱检测，采集信号，计算浓度：对所述目标组分进行高效液相色谱串联质谱检测，采集质谱信号；分析质谱信号，建立已知浓度分析物与内标物响应值之间的函数关系；根据所述函数关系，计算出目标组分在所述待检测的生物样品中的浓度。2.根据权利要求1所述的一种游离睾酮的高效液相色谱串联质谱检测方法，其特征在于，所述S200中PBS为磷酸盐缓冲溶液，pH为7.2
‑
7.4，浓度为0.01M。3.根据权利要求1所述的一种游离睾酮的高效液相色谱串联质谱检测方法，其特征在于：所述S300中超滤分离的操作步骤为：孵育完成后，在10000rpm转速下，离心30min，然后将超滤液转移至2mL的离心管中，将超滤芯...

【专利技术属性】
技术研发人员：石一云，张良滔，吴莉萍，杨江涛，
申请(专利权)人：深圳爱湾医学检验实验室，
类型：发明
国别省市：