一种用于PCOS的多激素同步检测方法技术

本发明专利技术提供了一种用于PCOS的多激素同步检测方法，包括以下步骤：S100，建立7种激素的标准曲线；S200，在待检测的生物样品中加入内标物，充分混合均匀后形成第一混合物；S300，加入蛋白沉淀剂形成第二混合物，并取得上清液；S400，加入稀释剂形成第三混合物；S500，对第三混合物进行固相萃取，收集含目标组分的溶液；S600，对所述目标组分进行高效液相色谱串联质谱检测，采集信号，计算浓度，本发明专利技术提供的一种用于PCOS的多激素同步检测方法，其采用固相萃取和高效液相色谱串联质谱检测相结合的方式，能够实现生物样品中7种激素的同步分析，不需要每种激素单独检测，大大提高了检测效率。大大提高了检测效率。大大提高了检测效率。

【技术实现步骤摘要】
一种用于PCOS的多激素同步检测方法


[0001]本专利技术涉及多囊卵巢综合征检测
，具体为一种用于PCOS的多激素同步检测方法。

技术介绍

[0002]多囊卵巢综合征(PCOS)是生育年龄妇女常见的一种复杂的内分泌及代谢异常所致的疾病，以慢性无排卵(排卵功能紊乱或丧失)和高雄激素血症(妇女体内男性激素产生过剩)为特征，主要临床表现为月经周期不规律、不孕、多毛和/或痤疮，是最常见的女性内分泌疾病。
[0003]PCOS是女性不孕的主要原因，影响全球6％至20％的育龄妇女，研究发现，PCOS具有很强的遗传性，60％
‑
70％患者所生的女儿会遗传此病，尽管PCOS对女性健康有诸多不利影响，但由于缺乏明确的病因机制、缺乏预后标志物以及疾病的复杂性，导致PCOS治疗进展受到阻碍。
[0004]雄激素水平升高被认为是PCOS患者最重要的临床特征之一，为了PCOS的诊断，需要同时检测多种性激素：
[0005]1.睾酮(T)：睾酮是最重要、具有生物活性的雄激素，血液中大约60％的睾酮与性激素结合球蛋白(SHBG)紧密结合，1％
‑
2％的睾酮与白蛋白结合，与SHBG结合的睾酮不具有生物活性，只有与白蛋白结合的睾酮和游离睾酮具有生物活性；
[0006]2.双氢睾酮(DHT)：双氢睾酮可由睾丸直接产生，也可以由周围组织将雄激素和雌激素作为前体物质转化而来，临床上主要用于5α
‑
还原酶缺陷所致性分化异常，鉴别诊断良性前列腺疾病，对前列腺肿瘤的疗效观察、性功能异常、不孕症、女性多毛症等病因的探讨也有非常重要的意义；
[0007]3.雄烯二酮(4
‑
AD)：临床上，雄烯二酮是反映卵巢源性雄激素的指标之一，作为生物化学合成雄性激素和雌性激素的中间产物，PCOS患者中该指标有一定程度的升高，且较易解离出成游离形式，故其生物学效应更明显；
[0008]4.脱氢表雄酮(DHEA)：大约90％血循环中DHEA来自肾上腺皮质网状带，血清中浓度多用于评价疑有肾上腺雄激素分泌过多的情况，血清DHEA与24h尿中酮类固醇的排出量密切相关，临床意义大致相同；
[0009]5.硫酸脱氢表雄酮(DHEAS)：脱氢表雄酮大部分都以硫酸盐形式存在，由脱氢表雄酮在肾上腺经过酶作用转化而来，是合成睾酮和雌激素的前体物质，该指标青春期增高，30岁以后降低，是肾上腺合成雄激素功能的标记物；
[0010]6.孕酮(P)：作为一种由卵巢黄体分泌的天然孕激素，与雌激素一起参与下丘脑
‑
垂体
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卵巢轴的调节，可使增生期的子宫内膜转化为分泌期，为孕卵着床及早期胚胎的营养提供有利条件并维持妊娠；
[0011]7.17α
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羟孕酮(17
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OHP)：少数成年多毛女性有不同程度的21
‑
羟化酶缺乏，这一类迟发型缺乏症病例中17
‑
OHP浓度常超过卵泡期的高限0.9ng/ml，17α
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OHP的测定也用于分
析女性一些不明原因的不孕症。
[0012]传统的免疫分析方法难以同时对上述多种雄激素检测，加上激素本身的特性，存在多种结构相似的激素干扰、女性体内雄激素含量较低、性激素往往与球蛋白特异性结合的问题，因此需要使用更加精准、快速的方法进行性激素检测。

技术实现思路

[0013]本专利技术目的是提供一种用于PCOS的多激素同步检测方法，以解决现有技术中，传统的免疫分析方法难以同时对多种雄激素检测，加上激素本身的特性，存在多种结构相似的激素干扰、女性体内雄激素含量较低、性激素往往与球蛋白特异性结合的问题。
[0014]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种用于PCOS的多激素同步检测方法，包括以下步骤：
[0015]S100，建立7种激素的标准曲线：
[0016]建立睾酮、双氢睾酮、雄烯二酮、脱氢表雄酮、孕酮、硫酸脱氢表雄酮、17α
‑
羟孕酮的标准曲线；
[0017]S200，在待检测的生物样品中加入内标物，充分混合均匀后形成第一混合物；
[0018]S300，加入蛋白沉淀剂形成第二混合物，并取得上清液：
[0019]向所述第一混合物加入蛋白沉淀剂，充分混合均匀后形成第二混合物，并离心取上清液；
[0020]S400，加入稀释剂形成第三混合物：
[0021]向所述第二混合物的上清液中加入稀释剂，充分混合均匀，形成第三混合物；
[0022]S500，对第三混合物进行固相萃取，收集含目标组分的溶液：
[0023]对第三混合物进行固相萃取，分步活化、加样、淋洗、洗脱，收集含目标组分的溶液，所述目标组分包括：睾酮、双氢睾酮、雄烯二酮、脱氢表雄酮、孕酮、硫酸脱氢表雄酮、17α
‑
羟孕酮；
[0024]S600，对所述目标组分进行高效液相色谱串联质谱检测，采集信号，计算浓度：
[0025]对所述目标组分进行高效液相色谱串联质谱检测，采集质谱信号；
[0026]分析质谱信号，建立已知浓度分析物与内标物响应值之间的函数关系；
[0027]根据所述函数关系，计算出各目标组分在所述待检测的生物样品中的浓度。
[0028]优选的，所述S300中蛋白沉淀剂为中性盐、乙腈和甲醇中的一种或几种；加入蛋白沉淀剂后充分混合均匀需分步提高离心转速形成梯度离心；低转速离心时长2min，高转速离心时长5min。
[0029]优选的，所述S300中，在加入蛋白沉淀剂之前加入内标溶液，并振荡混合2min，所述内标溶液为同位素内标物配置成的一定浓度的储备液稀释所得；所述蛋白沉淀剂体积约为样本与内标溶液体积的1～3倍。
[0030]优选的，所述S400中稀释剂为水，加入后进行振荡离心，充分混匀。
[0031]优选的，所述S500中固相萃取包括以下步骤：
[0032]S510：采用不同种类溶剂，活化两次固相萃取柱：
[0033]所述活化采用甲醇、水中的一种或两种作为溶剂，控制流速，活化两次，并弃去活化后溶剂；
[0034]S520：将第三混合物加载于固相萃取柱上，正压全部压下，弃去所得；
[0035]S530：加入乙腈、水和正己烷中的一种或几种混合物，多次淋洗；
[0036]S540：淋洗后加大压力，正压5min，去除柱床中的溶剂；
[0037]S550：加入甲醇洗脱，收集并稀释：
[0038]以甲醇为洗脱剂，正压压下，控制流速，收集在孔板中并稀释。
[0039]优选的，所述S600的具体步骤包括：
[0040]将所述目标组分转移上机，高效液相色谱进行分离洗脱，质谱进行信号采集；
[0041]所述高效液相色谱分离所用的流动相选自乙腈、水或者甲醇中的一种或者多种，并加入流动相添加剂；所述高效液相色谱串联质谱检测采集时间约6～本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于PCOS的多激素同步检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S100，建立7种激素的标准曲线：建立睾酮、双氢睾酮、雄烯二酮、脱氢表雄酮、孕酮、硫酸脱氢表雄酮、17α
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羟孕酮的标准曲线；S200，在待检测的生物样品中加入内标物，充分混合均匀后形成第一混合物；S300，加入蛋白沉淀剂形成第二混合物，并取得上清液：向所述第一混合物加入蛋白沉淀剂，充分混合均匀后形成第二混合物，并离心取上清液；S400，加入稀释剂形成第三混合物：向所述第二混合物的上清液中加入稀释剂，充分混合均匀，形成第三混合物；S500，对第三混合物进行固相萃取，收集含目标组分的溶液：对第三混合物进行固相萃取，分步活化、加样、淋洗、洗脱，收集含目标组分的溶液，所述目标组分包括：睾酮、双氢睾酮、雄烯二酮、脱氢表雄酮、孕酮、硫酸脱氢表雄酮、17α
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羟孕酮；S600，对所述目标组分进行高效液相色谱串联质谱检测，采集信号，计算浓度：对所述目标组分进行高效液相色谱串联质谱检测，采集质谱信号；分析质谱信号，建立已知浓度分析物与内标物响应值之间的函数关系；根据所述函数关系，计算出各目标组分在所述待检测的生物样品中的浓度。2.根据权利要求1所述的一种用于PCOS的多激素同步检测方法，其特征在于：所述S300中蛋白沉淀剂为中性盐、乙腈和甲醇中的一种或几种；加入蛋白沉淀剂后充分混合均匀需分步提高离心转速形成梯度离心；低转速离心时长2min，高转速离心时长5min。3.根据权利要求1所述的一种用于PCOS的多激素同步检测方法，其特征在于：所述S300中，在加入蛋白沉淀剂之前加入内标溶液，并振荡混合2min，所述内标溶液为同位素内标物配置成的一定浓度的储备液稀释所得；所述蛋白沉淀剂体积约为样本与内标溶液体积的1～3倍。4.根据权利要求1所述的一种用于PCOS的多激素同步检测方法，其特征在于：所述S400中稀释剂为水，加入后进行振荡离心，充分混匀。5.根据权利要求1所述的一种用于PCOS的多激素同步检测方法，其特征在于：所述S500中固相萃取包括以下步骤：S510：采用不同种类溶剂，活化两次固相萃取柱：所述活化采用甲醇、水中的一种或两种作为溶剂，控制流速，活化两次，并弃去活化后溶剂；S520：将第三混合物加载于固相萃取柱上，正压全部...

【专利技术属性】
技术研发人员：辜清泉，石一云，戴子鹏，孙晓宇，杨旭，杨江涛，
申请(专利权)人：深圳爱湾医学检验实验室，
类型：发明
国别省市：