β属冠状病毒血清IgG抗体库、多克隆抗体库、单克隆抗体库的制备和应用制造技术

本发明专利技术公开一种β属冠状病毒血清IgG抗体库，并进一步提出了多克隆抗体杂交瘤库、单克隆抗体杂交瘤库以对应的多克隆抗体库、单克隆抗体库的制备和应用。以β

【技术实现步骤摘要】
β
属冠状病毒血清IgG抗体库、多克隆抗体库、单克隆抗体库的制备和应用


[0001]本专利技术属于生物医学领域，具体涉及β属冠状病毒血清IgG抗体库、多克隆抗体杂交瘤库、单克隆抗体杂交瘤库以对应的多克隆抗体库、单克隆抗体库的制备和应用β属冠状病毒特异性单克隆抗体杂交瘤库、单克隆抗体库的制备方法及应用。

技术介绍

[0002]自2019年底开始，新冠病毒在全世界范围内暴发，在未接种疫苗的情况下，单克隆抗体可能是限制COVID
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19影响的替代途径。目前在研的中和抗体如47D11、S309、B38等均是通过与SARS
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CoV
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2S蛋白的RBD区抗原表位结合中和病毒活性，往往不能应对病毒的突变和变异。病毒的突变位点主要发生在S蛋白上，其中最近出现的omicron变体在S蛋白上有36个突变，而alpha变体有10个，gamma变体有12个，delta变体有9个。随着新冠病毒的流行和发展，逐渐出现了Delta、Omicron等多种突变体，许多在研的中和抗体对突变体无法发挥中和抑制效应，新冠本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种β属冠状病毒血清IgG抗体库，其特征在于，包括如下血清IgG抗体库中的任意一种或几种的组合：分别以新冠病毒COVID
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19 S蛋白的6个重组蛋白片段个作为抗原免疫小鼠，获得抗血清，进一步将抗血清纯化后得到对应于每个重组蛋白片段的血清IgG抗体库，其中，所述6个重组蛋白片段的氨基酸序列如SEQ ID NO.1
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SEQ ID NO.6所示。2.根据权利要求1所述的血清IgG抗体库，其特征在于，免疫方法为：分别将所述6个重组蛋白片段溶液与等量的弗氏完全佐剂混匀，分别腹腔注射和肌肉注射，进行初次免疫，两周后，改用弗氏不完全佐剂用相同的方法对同样的部位进行注射，进行强化免疫，强化免疫两周后，分别使用所述6个重组蛋白片段溶液尾静脉注射进行冲击免疫。3.一种β属冠状病毒多克隆抗体杂交瘤库的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）以COVID19
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SF5蛋白片段作为抗原免疫小鼠， 获取免疫后小鼠的脾细胞，将所述脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞进行融合，得到杂交瘤细胞，其中，所述蛋白片段COVID19
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SF5的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示；（2）挑选阳性克隆，通过多次传代和ELISA验证，反复筛选，最终确认稳定分泌抗体的细胞株为多克隆抗体杂交瘤细胞株，冻存所述多克隆抗体杂交瘤细胞株构建多克隆抗体杂交瘤库。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，先用COVID19
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SF5蛋白溶液与等量的弗氏完全佐剂混匀，分别腹腔注射和肌肉注射，进行初次免疫，两周后，改用弗氏不完全佐剂用相同的方法对同样的部位进行注射，进行强化免疫，最后在进行融合实验前72小时，使用COVID19
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SF5蛋白溶液尾静脉注射进行冲击免疫。5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，挑选阳性克隆的步骤为：在细胞融合实验完成7～9天后，显微镜下观察96孔板，若其中存在成团、个体较大、细胞状态透明发亮的则可能为杂交瘤细胞，将含有这类细胞的孔迅速做好标记，取细胞培养液上清做ELISA，阳性孔的判断条件是其OD值比阴性对照孔大0.1或...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋永平，王含璐，蒋文宏，
申请(专利权)人：苏州方舟生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：