一种抗HA标签的单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抗HA标签的单克隆抗体及其应用，包括重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，以及轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；重链CDR1包括SEQ ID NO:1所示氨基酸序列或由其组成；重链CDR2包括SEQ ID NO:2所示序列或由其组成；重链CDR3包括SEQ ID NO:3所示序列或由其组成；轻链CDR1包括SEQ ID NO:4所示序列或由其组成；轻链CDR2包括SEQ ID NO:5所示序列或由其组成；轻链CDR3包括SEQ ID NO:6所示序列或由其组成；其效价可达1.48

【技术实现步骤摘要】
一种抗HA标签的单克隆抗体及其应用


[0001]本专利技术属于分子免疫学领域，更具体地，涉及一种抗HA标签的单克隆抗体及其应用。

技术介绍

[0002]HA标签(HA
‑
tag)是一种基于人流感病毒血凝素(HA)抗原的蛋白标签，其化学本质是一段来自于流感病毒血凝素(HA)蛋白第98～106位氨基酸的短序列(氨基酸序列：YPYDVPDYA)，其分子量为1.1KDa，是目前广泛应用的表位标签之一。一般采用分子生物学手段将HA标签融合到目的蛋白的C端或N端，再利用HA标签抗体特异识别C末端或N末端带有HA标签的融合蛋白，通常可用于检测和HA tag融合表达蛋白的表达、细胞内定位，以及纯化、定性或定量检测HAtag融合表达蛋白等，即HA标签抗体可用于HA标记的靶蛋白的检测、分离和纯化，而无需蛋白特异性抗体或探针。目前，HA标签抗体是蛋白质表达和细胞生物学研究中最常用的抗体之一。但是，目前商品化抗HA标签蛋白的单克隆抗体种类较少，且价格十分昂贵。因此，研究更多的抗HA标签的单克隆抗体，在融合蛋白质的表达检测、定位、免疫吸附及分离纯化中具有广阔的应用前景。

技术实现思路

[0003]针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本专利技术提供了一种抗HA标签的单克隆抗体及其应用，其目的在于通过流感病毒血凝素(HA)的氨基酸残基YPYDVPDYA (98
‑
106)的合成肽与钥孔血蓝蛋白(Keyhole Limpet Hemocyanin,KLH)偶联作为抗原，刺激小鼠产生抗体，在其体内发现一种高效价的HA抗体，通过该抗体可变区基因克隆及测序，获得该抗体重链和轻链互补决定区的氨基酸序列，以此为基础制备抗HA标签的单克隆抗体，由此解决现有抗HA标签蛋白的单克隆抗体种类较少，价格昂贵的技术问题。
[0004]为实现上述目的，按照本专利技术的一个方面，提供了一种抗HA标签的单克隆抗体，其包括3个重链的互补决定区：重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，以及3个轻链的互补决定区：轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
[0005]所述重链CDR1包括SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列S
‑
Y
‑
G
‑
M
‑
S或由其组成；
[0006]所述重链CDR2包括SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列Y
‑
I
‑
S
‑
D
‑
G
‑
G
‑
V
‑
R
‑
T
‑
Y
‑
Y
‑
P
‑
D
‑
T
‑
I
‑
K
‑
G或由其组成；
[0007]所述重链CDR3包括SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列H
‑
R
‑
G
‑
Y
‑
D
‑
G
‑
G
‑
M
‑
D
‑
Y或由其组成；
[0008]所述轻链CDR1包括SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列R
‑
A
‑
S
‑
A
‑
S
‑
V
‑
I
‑
A
‑
M
‑
H或由其组成；
[0009]所述轻链CDR2包括SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列A
‑
T
‑
S
‑
S
‑
L
‑
A
‑
S或由其组成；
[0010]所述轻链CDR3包括SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列Q
‑
H
‑
W
‑
S
‑
R
‑
N
‑
P
‑
L
‑
T或由其组成。
[0011]优选地，所述抗HA标签的单克隆抗体，其所述抗体，其重链可变区包括以下氨基酸序列：
[0012]包括如SEQ ID NO:7，8，9，10所示的氨基酸序列或由其组成、与SEQ ID NO:7，8，9，10所示的序列具有至少80％，85％，90％同一性的序列、或者与SEQ ID NO:7，8，9，10所示的氨基酸序列相比具有一个或多个氨基酸突变的序列。
[0013]优选地，所述抗HA标签的单克隆抗体，其所述重链可变区包括以下氨基酸序列：
[0014]包括如SEQ ID NO:7，8，9，10所示的氨基酸序列、与SEQ ID NO:7，8，9，10所示的氨基酸序列具有至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列、或者与SEQ ID NO:7，8，9，10所示的氨基酸序列具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸突变的氨基酸序列；所述氨基酸突变，为保守突变，包括置换，插入或缺失。
[0015]优选地，所述抗HA标签的单克隆抗体，其所述抗体，其轻链可变区包括以下氨基酸序列：
[0016]包括如SEQ ID NO:11，12，13，14所示的氨基酸序列或由其组成、与SEQ ID NO:11，12，13，14所示的序列具有至少80％，85％，90％同一性的序列、或者与SEQ ID NO:11，12，13，14所示的氨基酸序列相比具有一个或多个氨基酸突变的序列。
[0017]优选地，所述抗HA标签的单克隆抗体，其所述轻链可变区包括以下氨基酸序列：
[0018]包括如SEQ ID NO:11，12，13，14所示的氨基酸序列、与SEQ ID NO:11，12，13，14所示的氨基酸序列具有至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列、或者与SEQ ID NO:11，12，13，14所示的氨基酸序列具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸突变的氨基酸序列；所述氨基酸突变，为保守突变，包括置换，插入或缺失。
[0019]优选地，所述抗HA标签的单克隆抗体，其所述抗体，其重链氨基酸序列如SEQ ID NO:15所示，轻链氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示。
[0020]按照本专利技术的另一方面，还提供了一种编码如本专利技术所述抗HA标签的单克隆抗体或其抗体片段的核酸序列，其所述核酸序列，包括基因、cDNA分子、mRNA分子以及它们的片段寡核苷酸。
[0021]按照本专利技术的另一方面，还提供了一种含有编码如本专利技术所述抗HA标签的单克隆抗体或其抗体片段核酸序列的生物材料，其所述生物材料，包括表达载体、表达盒、宿主细胞、工程菌或杂交瘤细胞株。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗HA标签的单克隆抗体，其特征在于，包括3个重链的互补决定区：重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，以及3个轻链的互补决定区：轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；所述重链CDR1包括SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列S
‑
Y
‑
G
‑
M
‑
S或由其组成；所述重链CDR2包括SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列Y
‑
I
‑
S
‑
D
‑
G
‑
G
‑
V
‑
R
‑
T
‑
Y
‑
Y
‑
P
‑
D
‑
T
‑
I
‑
K
‑
G或由其组成；所述重链CDR3包括SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列H
‑
R
‑
G
‑
Y
‑
D
‑
G
‑
G
‑
M
‑
D
‑
Y或由其组成；所述轻链CDR1包括SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列R
‑
A
‑
S
‑
A
‑
S
‑
V
‑
I
‑
A
‑
M
‑
H或由其组成；所述轻链CDR2包括SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列A
‑
T
‑
S
‑
S
‑
L
‑
A
‑
S或由其组成；所述轻链CDR3包括SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列Q
‑
H
‑
W
‑
S
‑
R
‑
N
‑
P
‑
L
‑
T或由其组成。2.如权利要求1所述的抗HA标签的单克隆抗体，其特征在于，所述抗体，其重链可变区包括以下氨基酸序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐超，孔志成，潘炜松，吴川，
申请(专利权)人：湖南诺合新生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：