一种组合物、一种阿霉素相关的斑马鱼心脏毒性损伤模型的建立方法及应用技术

本发明专利技术提供了一种组合物、一种阿霉素相关的斑马鱼心脏毒性损伤模型的建立方法及应用，属于生物医药、动物模型构建技术领域，具体为一种组合物，包括阿霉素和连翘苷；本发明专利技术首次发现阿霉素和连翘苷组合使用能够用于构建阿霉素相关的斑马鱼心脏毒性损伤模型；本发明专利技术建立的斑马鱼心脏毒性模型，只出现心率降低的表现，各处理组斑马鱼未出现局部或全身水肿等异常，排除了阿霉素可能造成的肾毒性损伤的发生；利用本发明专利技术提供的斑马鱼心脏毒性损伤模型能够用于筛选具有预防/治疗阿霉素所致的心脏毒性损伤活性药物。毒性损伤活性药物。毒性损伤活性药物。

【技术实现步骤摘要】
一种组合物、一种阿霉素相关的斑马鱼心脏毒性损伤模型的建立方法及应用


[0001]本专利技术属于生物医药、动物模型构建
，具体涉及一种组合物、一种阿霉素相关的斑马鱼心脏毒性损伤模型的建立方法及应用。

技术介绍

[0002]阿霉素属蒽环类家族，是临床上常用的一种广谱抗肿瘤药物，能有效地作用于各种生长周期的肿瘤细胞。在应用中发现阿霉素具有心脏毒性，容易损伤心肌细胞，出现心律失常、ST
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T改变，引起充血性心力衰竭，这种严重心力衰竭多在停药后的1～6个月内发生。阿霉素的心脏毒性与药物剂量、联合用药情况密切相关。在临床上，阿霉素一般作为第二线药物，在首选药物耐药时才可考虑应用。阿霉素的心脏毒副作用极大地限制了其在临床抗肿瘤治疗中的应用，因此，对于阿霉素心脏毒性机制的研究亟待开展。
[0003]动物模型是进行人类疾病研究的重要工具，利用动物模型能直观的体现人类疾病的病理生理改变，进行疾病机制研究。同时动物模型也是筛选活性药物，进行药物研发的重要工具。啮齿类动物生物体特点与人类接近，实验结果具有代表性，但啮齿类动物普遍存在体格大、成本高、周期长的缺点。斑马鱼是一种小型热带淡水鱼，属鲤科。其成鱼仅约3
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4厘米长，产卵量大，胚胎透明而且体外发育，非常便于操作和观察。其胚胎发育周期短，许多研究在胚胎期即可进行，对药物的用量非常少。斑马鱼基因组序列与人类基因组高度相似，包括心血管系统、神经系统在内的多个重要组织器官在形态结构、生理功能及病理反应上与人类相仿，因此，斑马鱼在发育生物学、化合物毒性评价和人类疾病模型研究等领域得到广泛应用，是一种理想的脊椎模式生物。
[0004]斑马鱼幼鱼鱼体透明，显微镜下可清晰观察心脏和全身血循环状况，在药物心脏毒性研究及活性药物研发方面具备独特的生物优势，因而得到大量应用。赵慧等人用阿霉素处理发育36hpf斑马鱼，诱导建立心肌损伤模型，斑马鱼出现心包水肿，静脉窦和动脉球(SV
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BA)距离增大表现。徐卓然等人用阿霉素处理发育24hpf斑马鱼，获得了斑马鱼心脏毒性损伤模型，并对阿霉素毒性损伤机制进行研究。这些研究均通过水溶性给药处理斑马鱼，实验方法便捷，易于高通量进行。但目前的研究多在斑马鱼胚胎期(＜72hpf)开展，正常斑马鱼在受精24hpf血管发育开始，72hpf时完成，此时绝大多数器官发育成熟，具备正常功能，幼鱼孵化出膜，因此，大于72hpf斑马鱼更适于研究药物对成熟机体和器官功能的毒性作用，结果更具有借鉴意义。Rider等人将阿霉素显微注射至72hpf斑马鱼血循环系统，斑马鱼出现心力衰表现，但是这一方法对技术要求比较高，不适于大规模开展。因此，有必要寻找一种操作简便、效果可靠的方法，诱导建立一种针对斑马鱼幼鱼的阿霉素心脏毒性损伤模型，为临床阿霉素所致的心脏功能损伤的预防和治疗研究提供实验基础。并且现有技术中关于利用动物模型用于筛选具有预防/治疗阿霉素所致的心脏毒性损伤活性药物的研究报道较少。

技术实现思路

[0005]本专利技术针对现有技术的不足，提供一种组合物、一种阿霉素相关的斑马鱼心脏毒性损伤模型的建立方法及应用。
[0006]本专利技术首次发现阿霉素和连翘苷组合使用能够用于构建阿霉素相关的斑马鱼心脏毒性损伤模型。
[0007]本专利技术的目的是提供一种阿霉素相关的斑马鱼心脏毒性损伤模型的建立方法，用于研究阿霉素心脏毒性损伤机制及筛选预防或治疗阿霉素所致的心肌损伤的活性药物。
[0008]术语说明：
[0009]dpf(days post fertilization)：指受精后的天数。
[0010]本专利技术技术方案如下：
[0011]一种用于建立斑马鱼心脏毒性损伤模型的组合物，包括阿霉素和连翘苷。
[0012]根据本专利技术优选的，所述组合物中组分的使用浓度为阿霉素(20
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40)μg/mL，连翘苷(200
‑
700)μg/mL。
[0013]进一步优选的，所述组合物中组分的使用浓度为阿霉素30μg/mL，连翘苷(200
‑
700)μg/mL。
[0014]根据本专利技术优选的，建立斑马鱼心脏毒性损伤模型所用的斑马鱼为3dpf以上的斑马鱼。
[0015]进一步优选的，建立斑马鱼心脏毒性损伤模型所用的斑马鱼为3dpf以上并且小于6dpf的斑马鱼。
[0016]根据本专利技术优选的，斑马鱼为AB系野生型斑马鱼。
[0017]阿霉素和连翘苷在建立斑马鱼心脏毒性损伤模型中的应用。
[0018]根据本专利技术优选的，所述应用中，阿霉素的使用浓度为(20
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40)μg/mL，连翘苷的使用浓度为(200
‑
700)μg/mL。
[0019]进一步优选的，所述应用中，阿霉素的使用浓度为30μg/mL，连翘苷的使用浓度为(200
‑
700)μg/mL。
[0020]根据本专利技术优选的，所述应用中，建立斑马鱼心脏毒性损伤模型所用的斑马鱼为3dpf以上的斑马鱼。
[0021]进一步优选的，所述应用中，建立斑马鱼心脏毒性损伤模型所用的斑马鱼为3dpf以上并且小于6dpf的斑马鱼。
[0022]根据本专利技术优选的，所应用中，斑马鱼为AB系野生型斑马鱼。
[0023]一种斑马鱼心脏毒性损伤模型的建立方法，包括如下步骤：
[0024]取斑马鱼随机分组，分别为模型组和正常对照组，模型组为加入含阿霉素和连翘苷的培养水溶液中，正常对照组为加入不含阿霉素和连翘苷的培养水溶液中，将模型组和正常对照组进行培养，培养20
‑
28h，观察每条鱼的心跳状况，并计数心率，模型组与正常对照组相比，心率降低显著，斑马鱼心脏毒性损伤模型建立成功，否则不成功。
[0025]根据本专利技术优选的，所述方法中，斑马鱼为AB系野生型斑马鱼。
[0026]根据本专利技术优选的，所述方法中，所用的斑马鱼为3dpf以上的斑马鱼。
[0027]进一步优选的，所述方法中，所用的斑马鱼为3dpf以上并且小于6dpf的斑马鱼。
[0028]根据本专利技术优选的，所述方法中，含阿霉素和连翘苷的培养水溶液中，含阿霉素浓
度为(20
‑
40)μg/mL和连翘苷的浓度为(200
‑
700)μg/mL。
[0029]进一步优选的，所述方法中，含阿霉素和连翘苷的培养水溶液中，含阿霉素浓度为30μg/mL和连翘苷的浓度为(200
‑
700)μg/mL。
[0030]根据本专利技术优选的，所述方法中，培养水溶液中含有：含5mM NaCl、0.17mM KCl、0.33mM CaCl2、0.33mM MgSO4，pH 7.2。
[0031]根据本专利技术优选的，所述方法中，每组斑马鱼的数量为15
‑
30条。
[0032]根据本专利技术优选的，所述方法中，培养的条件为27
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于建立斑马鱼心脏毒性损伤模型的组合物，其特征在于，包括阿霉素和连翘苷。2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物中组分的使用浓度为阿霉素(20
‑
40)μg/mL，连翘苷(200
‑
700)μg/mL；优选的，所述组合物中组分的使用浓度为阿霉素30μg/mL，连翘苷(200
‑
700)μg/mL。3.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，建立斑马鱼心脏毒性损伤模型所用的斑马鱼为3dpf以上的斑马鱼；优选的，建立斑马鱼心脏毒性损伤模型所用的斑马鱼为3dpf以上并且小于6dpf的斑马鱼；优选的，斑马鱼为AB系野生型斑马鱼。4.阿霉素和连翘苷在建立斑马鱼心脏毒性损伤模型中的应用。5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述应用中，阿霉素的使用浓度为(20
‑
40)μg/mL，连翘苷的使用浓度为(200
‑
700)μg/mL；优选的，所述应用中，阿霉素的使用浓度为30μg/mL，连翘苷的使用浓度为(200
‑
700)μg/mL；优选的，所述应用中，建立斑马鱼心脏毒性损伤模型所用的斑马鱼为3dpf以上的斑马鱼；优选的，所述应用中，建立斑马鱼心脏毒性损伤模型所用的斑马鱼为3dpf以上并且小于6dpf的斑马鱼；优选的，所应用中，斑马鱼为AB系野生型斑马鱼。6.一种斑马鱼心脏毒性损伤模型的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：取斑马鱼随机分组，分别为模型组和正常对照组，模型组为加入含阿霉素和连翘苷的培养水溶液中，正常对照组为加入不含阿霉素和连翘苷的培养水溶液中，将模型组和正常对照组进行培养，培养20
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28h，观察每条鱼的心跳状况，并计数心率，模型组与正常对照组相比，心率降低显著，斑马鱼心脏毒性损伤模型建立成功，否则不成功。7.如权利要求6所述的建立方法，其特征在于，所述方法中，斑马鱼为AB系野生型斑马鱼；优选的，所述方法中，所用的斑马鱼为3dpf以上的斑马鱼；优选的，所述方...

【专利技术属性】
技术研发人员：王雪，张云，王利振，夏青，王荣春，陈锡强，刘可春，
申请(专利权)人：山东省科学院生物研究所，
类型：发明
国别省市：