IR780和IDA共同负载的纳米颗粒在制备治疗淋巴瘤药物上的应用及纳米颗粒制造技术

IR780和IDA共同负载的纳米颗粒在制备治疗淋巴瘤药物上的应用及纳米颗粒,通过光热疗法/光动力和化疗联合治疗淋巴瘤来增强抗肿瘤疗效。一方面IR780+IDA NPs可以利用纳米药物的集聚效应，大量存留在细胞内；另一方面在808 nm激光照射下，IR780可产生ROS来杀伤肿瘤细胞，并且通过产热使纳米颗粒塌陷，加速IDA药物释放，诱导肿瘤消融，实现有效的化学

【技术实现步骤摘要】
激光照射纳米颗粒使IR780可产生ROS来杀伤肿瘤细胞，并且通过产热使纳米颗粒塌陷，加速IDA药物释放。
[0010]所述的治疗淋巴瘤药物为抑制人B淋巴瘤细胞Raji活性的药物。
[0011]一种IR780和IDA共同负载的纳米颗粒，所述的纳米颗粒为PEG
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PTMC聚合物内包载甲氧柔红霉素(IDA)和IR780光敏剂的纳米颗粒IR780+IDA NPs。
[0012]所述的纳米颗粒IR780+IDA NPs中IR780的浓度为1.28 μ g/mL和IDA的浓度为0.8 μ g/mL。
[0013]本专利技术的有益效果是：本专利技术提供了一种IR780和IDA共同负载的纳米颗粒在制备治疗淋巴瘤药物上的应用及纳米颗粒, 通过光热疗法/光动力和化疗联合治疗淋巴瘤来增强抗肿瘤疗效。一方面IR780+IDA NPs可以利用纳米药物的集聚效应，大量存留在细胞内；另一方面在808 nm激光照射下，IR780可产生ROS来杀伤肿瘤细胞，并且通过产热使纳米颗粒塌陷，加速IDA药物释放，诱导肿瘤消融，实现有效的化学
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光热
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光动力疗法，显著提高对淋巴瘤的治疗效果。并证实了IDA和IR780具有协同作用，达到了对淋巴瘤更好的破坏效果,该联合方案具有较好的治疗效果。
附图说明
[0014]图1为IR780+IDA NPs合成及细胞内作用的原理图。
[0015]图2为合成纳米粒的紫外
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可见吸收光谱。
[0016]图3为合成纳米粒的稳定性。
[0017]图4为IR780+IDA NPs形态。
[0018]图5为纳米粒的IDA释放行为。
[0019]图6为纳米粒的ROS释放行为。
[0020]图7为纳米粒的光热效应。
[0021]图8为U937和Raji细胞对纳米药物的内吞作用。
[0022]图9为纳米粒的细胞毒性评价。
[0023]图10为纳米粒在细胞内的ROS释放行为。
[0024]图11为纳米粒对Raji和U937细胞的杀伤效果。
[0025]图12为纳米粒在体内对淋巴瘤的治疗效果。
[0026]图13为纳米粒的体内安全性评价。
具体实施方式
[0027]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0028]实施例1：纳米粒制备方法将30 mg mPEG
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PTMC169、3 mg IR780和30 μg IDA溶解于1 mL DMSO中。然后在混合溶液中加入TEA，以中和IDA中的HCl。在超声条件下，将上述溶液逐滴加入4 mL H2O中。为了去除DMSO，用透析纤维素膜(MWCO = 3500)对所得溶液进行水透析，得到IR780和IDA共
载的纳米粒（IR780+IDA NPs）。采用相同方法制备IDA NPs和IR780 NPs作为对照组。以自组装的方式制备mPEG
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PTMC169作为空白对照组(简称PTMC NPs)。
[0029]实施例2：紫外
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可见吸收光谱将制备的IR780+IDA NPs、IDA NPs、IR780 NPs和PTMC NPs，稀释100倍后检测紫外
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可见吸收光谱。结果显示(图2)，游离IDA药物在420 nm
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550 nm处有特征吸收峰。IR780光敏剂在795 nm附近有一个狭窄的特征吸收峰。IR780+IDA纳米粒的两个特征吸收峰同时出现，分别属于IDA (400 nm ~ 550 nm)和IR780 (700 nm ~ 850 nm)。与游离IDA和IR780相比，两个特征吸收峰明显增宽。这些典型的宽峰是IR780和IDA在IR780+IDA纳米粒的核心中聚集形成的，表明IDA和IR780被成功包裹。
[0030]实施例3：纳米粒稳定性通过粒度分析仪 (DLS, Zetasizer Nano ZSZEN3600, Malvern, England) 测量IR780+IDA NPs、IDA NPs、IR780 NPs和PTMC NPs的粒径，各测量3次取其平均值，室温下保存，第1天、3天、5天、7天和10天分别再次测量其粒径，计算粒径变化，评估其稳定性。结果显示（图3）这些纳米粒均具有良好的稳定性，室温下10天内纳米颗粒的直径变化很小，这将有利于该药物的生物应用。
[0031]实施例4：TEM形态表征取稀释后的IR780+IDA NPs 5 μl 滴到铜网上，吸附3
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5分钟后用滤纸吸去多余液体，随后用2%磷钨酸负染30秒，待样品干燥后用透射电子显微镜（TEM，FEI Talos，China）观察纳米粒子的形貌。结果显示（图4），纳米颗粒均呈球形，IR780+IDA NPs的平均直径约为138 nm。
[0032]实施例5：IDA释放行为将已知浓度的IDA溶于I% DMSO的PBS溶液中，梯度稀释后在485nm处测定IDA吸光度，做出IDA的标准曲线。采用透析法分析IDA NPs和IR780+IDA NPs的IDA释放行为。将5 mL IDA NPs或IR780+IDA NPs溶液放入透析袋(MWCO = 8000)中。然后，将密封袋浸入40 mL PBS (pH = 7.4)中，并在37℃以120 rpm的速度进行振荡。振荡4 h或20 h后，取出1 mL释放液。用紫外
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可见分光光度法测定IDA浓度。每组重复3次。IDA的标准曲线如图5A所示，在1 ~ 50 μg/mL的IDA浓度范围内，485 nm处的吸光度值与标准曲线的线性关系良好(R2 = 0.999)。根据IDA标准曲线，IR780+IDA NPs对IDA的载药量和包封率分别为7.38
±
0.46%和78.73
±
6.8%。然后，研究IDA NPs和IR780+IDA NPs在PBS溶液(pH = 7.4)中的IDA释放行为。如图5B所示，PBS孵育4 h后，IR780+IDA NPs释放IDA的量为39.3
±
8.0%。当孵育时间延长至20 h时，IR780+IDA NPs释放IDA的量为60.2
±
3.0%。IDA纳米粒的IDA释放行为与IR780+IDA纳米粒相似。
[0033]实施例6：ROS释放行为活性氧可以破坏DPBF的结构，导致420 nm处的吸收峰降低。将PTMC、IDA、IR780和IR780+IDA纳米粒分别溶解在含0.01mol/L的DPBF的水溶液中，用808 nm激光(1 W/cm2)分别照射纳米粒，每5 s记本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1. IR780和IDA共同负载的纳米颗粒在制备治疗淋巴瘤药物上的应用。2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于, 所述的治疗淋巴瘤药物为光热治疗和光动力治疗以及化疗的协同治疗药物。3. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于, 所述的IR780和IDA共同负载的纳米颗粒为负载去甲氧柔红霉素(IDA)和IR780光敏剂的PEG
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PTMC聚合物纳米颗粒。4. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于,所述的纳米颗粒中IR780的浓度为1.28 μ g/mL和IDA的浓度为0.8 μ g/mL。5. 根据权利要求3所述的应用，其特征在于,所述的负载去甲氧柔红霉素(IDA)和IR780光敏剂的PEG
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PTMC聚合物纳米颗粒通过以下步骤制备: 将mPEG
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PTMC169、IR780和IDA溶解于DMSO中。然后在混合溶液中加入TEA，以中和IDA中的HCl,在超声条件下，...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘璐琪，石长灿，张高帆，姜大伟，
申请(专利权)人：国科温州研究院温州生物材料与工程研究所，
类型：发明
国别省市：