一种含皂苷的脂质纳米颗粒的制备方法及其应用技术

本发明专利技术提供一种含皂苷的脂质纳米颗粒的制备方法及其应用，属于免疫制剂技术领域。该方法包括：配制含有纳米稳定剂的皂苷溶液，含有140

【技术实现步骤摘要】
一种含皂苷的脂质纳米颗粒的制备方法及其应用


[0001]本专利技术涉及免疫制剂
，具体涉及一种含皂苷的脂质纳米颗粒的制备方法及其应用。

技术介绍

[0002]免疫刺激复合物基质(ISCOM
‑
Matrix)是一种含皂苷的脂质纳米颗粒，是由皂苷、胆固醇和卵磷脂通过疏水作用形成的粒径约40nm的球形颗粒。由于其结合了颗粒载体系统和内置佐剂(Quil A)的优点，因此被发现比脂质体和蛋白质胶束等其他胶体系统更具免疫原性。许多研究已经证明，ISCOM
‑
Matrix疫苗能够在许多动物模型中诱导针对多种抗原的强抗原特异性细胞或体液免疫反应。ISCOM
‑
Matrix可以通过不同的方法制备，包括透析法和乙醇注射法等。其中透析法可以获得粒径分布非常窄的最均一的产物，但是制备过程繁琐耗时，还需要额外的表面活性剂，且每次可制备的ISCOM
‑
Matrix数量有限，因此很难扩大规模，成本也很高；乙醇注射法是将胆固醇和磷脂的乙醇溶液注入皂苷的水溶液中，可在2小时内形成大量笼状颗粒，是最快速的ISCOM
‑
Matrix制备技术。该方法虽然简单、快速、高效，但目前大多都是在实验室规模的早期工艺条件下生产的，而且制备过程中存在成本高，产量低，形貌不均一，稳定性差等问题。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的是提供一种含皂苷的脂质纳米颗粒的制备方法，能够简单快捷大规模的制备出形貌均一、稳定性好的含皂苷的脂质纳米颗粒，显著降低了成本，提高生产效率。
[0004]本专利技术的目的采用如下技术方案实现：
[0005]一种含皂苷的脂质纳米颗粒的制备方法，包括如下步骤：
[0006](1)配制含有纳米稳定剂的皂苷溶液，所述含有纳米稳定剂的皂苷溶液中含有如下组分：140
‑
160ml/L的甘油单月桂酸酯、12
‑
17g/L的海藻糖、23
‑
27g/L的TPGS和28
‑
32g/L的皂苷；
[0007](2)配制含有脂相溶液，所述脂相溶液是含有0.5～30mg/mL胆固醇和0.5～30mg/mL卵磷脂的无水乙醇溶液；
[0008](3)在70
‑
90℃、搅拌状态下，在含有稳定剂的皂苷溶液中滴加脂相溶液；所述含有稳定剂的皂苷溶液与脂相溶液的体积比是7:0.5
‑
1.5；
[0009](4)滴加结束后，继续搅拌10
‑
14小时，得到所述含皂苷的脂质纳米颗粒。
[0010]在本专利技术中，步骤(1)中所述纳米稳定剂的制备方法如下：在搅拌状态下，将甘油单月桂酸酯升温至40
‑
45℃并保温，加入海藻糖，待海藻糖溶解后，加入维生素E聚乙二醇琥珀酸酯，将温度升高至50
‑
60℃并保温直至维生素E聚乙二醇琥珀酸酯溶解，降温至室温，得到纳米稳定剂。
[0011]在本专利技术中，所述纳米稳定剂中每140
‑
160ml甘油单月桂酸酯中加入12
‑
17g/L的
海藻糖、23
‑
27g/L的维生素E聚乙二醇琥珀酸酯。
[0012]在本专利技术中，步骤(2)中所述脂相溶液中含有18
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22g/L胆固醇和18
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22g/L卵磷脂。
[0013]在本专利技术中，步骤(3)在含有稳定剂的皂苷溶液中滴加脂相溶液的过程中，控制压力为0.06
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0.1Mpa，通气量45
‑
55L/min。
[0014]在本专利技术中，步骤(4)中滴加结束后，控制压力为0.06
‑
0.1Mpa，通气量45
‑
55L/min。
[0015]本专利技术还提供所述方法制备的含皂苷的脂质纳米颗粒在制备佐剂方面的应用。
[0016]本专利技术与现有技术相比，具有以下技术效果：本专利技术通过在制备过程中添加纳米稳定剂，能够明显改善传统酒精注射法制备过程中存在的产物产量低，形貌不均一，稳定性差等问题，利用常规的标准化设备，成功扩大升级到工业规模的数十升体积的反应罐制备，以可控且经济高效的方式生产大量ISCOM
‑
Matrix免疫佐剂，所得佐剂颗粒性质稳定，粒径为45～75nm，PDI为0.02～0.1，浓度可超过30mg/ml。本专利技术方法简单快捷，显著降低了成本，提高生产效率。
附图说明
[0017]图1为ISCOM
‑
Matrix佐剂透射电子显微镜观察结果图，左图是本专利技术方法制备的ISCOM
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Matrix佐剂，中间是无稳定剂注射法制备的ISCOM
‑
Matrix佐剂，右图是透析法制备的ISCOM
‑
Matrix佐剂。
[0018]图2为本专利技术方法制备的2021102批次ISCOM
‑
Matrix佐剂的粒径及PDI检测结果。
[0019]图3为10批次ISCOM
‑
Matrix佐剂的制备重现性检测结果，横坐标为粒径(nm)，纵坐标为强度,单位是％。
[0020]图4为本专利技术方法制备的批次为2021102的ISCOM
‑
Matrix佐剂的稳定性检测结果。
[0021]图5为各纳米稳定剂制备的ISCOM
‑
Matrix佐剂的表征，其中各图中的“甘油”是指甘油单月桂酸酯。
具体实施方式
[0022]本专利技术中使用的试剂来源：
[0023]甘油单月桂酸酯：分子式C
15
H
30
O4，CAS编号142
‑
18
‑
7，购自阿拉丁；海藻糖：分子式C
12
H
22
O
11
，CAS编号585
‑
91
‑
1，购自阿拉丁，货号T120978；维生素E聚乙二醇琥珀酸酯：TPGS，购自阿拉丁，货号T110277。
[0024]为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术具体实施例对本专利技术技术方案进行清楚、完整的描述，但本专利技术的保护范围不局限于以下所述。
[0025]实施例1制备体积为30L的ISCOM
‑
Matrix佐剂
[0026]1.采用本专利技术方法制备体积为30L的ISCOM
‑
Matrix佐剂
[0027]采用本专利技术方法制备体积为30L的ISCOM
‑
Matrix佐剂，包括如下步骤：
[0028]步骤一：将制备ISCOM
‑
Matrix所需的物料罐和反应罐用0.4M的碱液(NaOH水溶液)循环清洗60min，排掉碱液，之后用纯化水将碱液冲洗干净，加入适量纯化水，在121本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种含皂苷的脂质纳米颗粒的制备方法，其特征在于包括如下步骤：(1)配制含有纳米稳定剂的皂苷溶液，所述含有纳米稳定剂的皂苷溶液中含有如下组分：140
‑
160ml/L的甘油单月桂酸酯、12
‑
17g/L的海藻糖、23
‑
27g/L的TPGS和28
‑
32g/L的皂苷；(2)配制含有脂相溶液，所述脂相溶液是含有0.5～30mg/mL胆固醇和0.5～30mg/mL卵磷脂的无水乙醇溶液；(3)在70
‑
90℃、搅拌状态下，在含有稳定剂的皂苷溶液中滴加脂相溶液；所述含有稳定剂的皂苷溶液与脂相溶液的体积比是7:0.5
‑
1.5；(4)滴加结束后，继续搅拌10
‑
14小时，得到所述含皂苷的脂质纳米颗粒。2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于步骤(1)中所述纳米稳定剂的制备方法如下：在搅拌状态下，将甘油单月桂酸酯升温至40
‑
45℃并保温，加入海藻糖，待海藻糖溶解后，加入维生素E聚乙二醇琥珀酸酯，将温度升高至50
‑
60℃并保温直至维生素E聚乙二醇琥珀酸酯溶...

【专利技术属性】
技术研发人员：王义伟，张元鹏，程海卫，于晓明，陈瑾，郑其升，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：