一种粘度检测方法及其应用技术

本发明专利技术提供一种粘度检测方法及其应用，所述粘度检测方法使用荧光探针AH。所述粘度检测方法检测精度高，且不受环境pH影响，使用的荧光探针选择性好，具有良好的生物相容性，可以应用于线粒体的检测。应用于线粒体的检测。应用于线粒体的检测。

【技术实现步骤摘要】
一种粘度检测方法及其应用


[0001]本专利技术属于粘度检测领域，涉及一种粘度检测方法及其应用。

技术介绍

[0002]粘度作为影响细胞内微环境的主要因素之一。糖尿病、高血压、动脉粥样硬化、肿瘤等疾病的发生通常与细胞内黏度的异常变化相关。在细胞内不同部位粘度也不尽相同，线粒体能够调节能量代谢，在各种细胞活动中起关键作用，线粒体的粘度水平与细胞分化、信息传递和细胞凋亡等功能有很大关系。因此检测线粒体中粘度变化具有重要意义。
[0003]传统的粘度检测方法包括落球粘度计、毛细管粘度计、旋转粘度计等，这些传统方法适用于体外粘度检测，但是均无法对细胞内粘度进行测量。荧光探针由于其灵敏度高、毒性低、生物相容性好以及操作简单等优点，被认为是检测细胞内粘度的有力工具。近年来随着荧光探针的发展，用于检测线粒体、溶酶体等亚细胞器的粘度探针也越来越多，其中基于扭转分子内电荷转移(TICT)构建粘度探针备受关注；但是，粘度探针在发射波长短、分子结构复杂、斯托克斯位移小、生物体自发荧光干扰、近红外荧光成像等方面仍需要改进。因此，进一步开发基于TICT机制的靶向线粒体的新型粘度荧光探针是非常必要的。

技术实现思路

[0004]为解决现有技术中存在的技术问题，本专利技术提供一种粘度检测方法，所述粘度检测方法检测精度高，且不受环境pH影响，使用的荧光探针选择性好，具有良好的生物相容性，可以应用于线粒体的检测。
[0005]为达到上述技术效果，本专利技术采用以下技术方案：
[0006]本专利技术目的之一在于提供一种粘度检测方法，其特征在于，所述粘度检测方法使用式1所示的荧光探针。
[0007][0008]作为本专利技术优选的技术方案，所述粘度检测方法包括将所述荧光探针加入到被测体系中，通过对所述荧光探针的荧光强度进行检测，对所述被测体系的粘度进行定性或定量检测。
[0009]作为本专利技术优选的技术方案，所述定性检测的方法包括：采用标准体系，向所述标准体系中加入所述荧光探针，并进行荧光强度检测；增加以及降低所述标准体系的粘度，并分别进行荧光强度检测；确定标准体系的粘度变化与荧光强度的变化趋势关系。
[0010]作为本专利技术优选的技术方案，所述定量检测的方法包括：向不同粘度的标准体系
中加入所述荧光探针，并进行荧光强度检测；对标准体系的粘度以及对应的荧光强度进行拟合，得到粘度与荧光强度的对应关系；向被测体系中加入所述荧光探针，并进行荧光强度检测，将所述荧光强度值带入所述粘度与荧光强度的对应关系中，得到所述被测体系的粘度。
[0011]作为本专利技术优选的技术方案，所述荧光探针的制备方法包括：
[0012](1)将4
‑
甲基吡啶与碘甲烷以及溶剂混合，在保护气氛下回流反应得到1,4
‑
二甲基吡啶碘盐；
[0013](2)将所述中间体与4
‑
二甲基氨基肉桂醛、催化剂以及溶剂混合，在保护气氛下回流反应，纯化后得到所述荧光探针。
[0014]作为本专利技术优选的技术方案，步骤(1)所述回流反应的时间为12～36h，如15h、18h、21h、24h、27h、30h或33h等。
[0015]作为本专利技术优选的技术方案，所述催化剂包括乙酸铵。
[0016]优选地，步骤(2)所述回流反应的时间为10～30h，如12h、15h、18h、20h、22h、25h或28h等。
[0017]本专利技术目的之二在于提供一种上述任一种粘度检测方法的应用，所述检测方法用于检测细胞线粒体粘度。
[0018]作为本专利技术优选的技术方案，所述荧光探针与线粒体靶向结合。
[0019]作为本专利技术优选的技术方案，所述检测细胞线粒体粘度包括监测线粒体自噬过程中线粒体的粘度变化。
[0020]本专利技术中，使用粘度敏感的荧光探针AH，并对该探针进行细胞成像，AH有较大的斯托克斯位移，背景荧光的干扰小，有良好的生物相容性。探针可以很好靶向线粒体，实现细胞内线粒体粘度变化的检测。
[0021]与现有技术相比，本专利技术至少具有以下有益效果：
[0022](1)本专利技术提供一种粘度检测方法，所述粘度检测方法检测精度高，且不受环境pH以及极性等影响；
[0023](2)本专利技术提供一种粘度检测方法，所述粘度检测方法可以靶向线粒体，具有良好的生物相容性，可以应用于线粒体的检测。
附图说明
[0024]图1a为本专利技术实施例1制备得到的AH探针的1H NMR谱；
[0025]图1b为本专利技术实施例1制备得到的AH探针的13C NMR谱；
[0026]图2为本专利技术实施例2中AH在PBS和甘油中紫外归一化吸收光谱(a)、不同溶剂中探针AH的荧光光谱(b)、探针AH在不同比例的PBS
‑
甘油混合物中的荧光光谱(c)、PBS
‑
甘油体系中log I677nm与logη之间的线性关系(d)；
[0027]图3a为本专利技术实施例3中不同pH对AH干扰测试图；
[0028]图3b为本专利技术实施例3中不同离子、分子对AH干扰测试图；
[0029]图4为本专利技术实施例4中Hela细胞内的荧光图像；
[0030]图5为本专利技术实施例5中Hela细胞的共定位成像图。
[0031]下面对本专利技术进一步详细说明。但下述的实例仅仅是本专利技术的简易例子，并不代
表或限制本专利技术的权利保护范围，本专利技术的保护范围以权利要求书为准。
具体实施方式
[0032]为更好地说明本专利技术，便于理解本专利技术的技术方案，本专利技术的典型但非限制性的实施例如下：
[0033]实施例1
[0034]本实施例提供一种荧光探针AH的制备方法，所述制备方法包括：
[0035]将4
‑
甲基吡啶和碘甲烷溶于乙醇中，N2保护80℃回流24h之后将混合物进行重结晶提纯得到化合物1，收率90.1％；
[0036][0037]将化合物1(1,4
‑
二甲基吡啶碘盐)、4
‑
二甲基氨基肉桂醛和催化剂乙酸铵溶解在乙醇溶液中，在N2保护下回流20小时，反应完成后，减压浓缩。硅胶柱层析(甲醇/二氯甲烷＝1/30,v/v)纯化得到AH深红色粉末，收率80％。
[0038][0039]AH的核磁共振氢谱和碳谱为：1H NMR(400MHz,DMSO
‑
d6):8.71(s,1H),8.03(d,J＝6.4Hz,1H),7.86
‑
7.57(m,1H),7.45(s,1H),7.01(s,1H),6.72(t,J＝16Hz,3H),4.19(s,2H),3.34(s,1H),2.97(d,J＝2.8Hz,4H),2.66
‑
2.90(m,2H),2.507(s,1H),1.66
‑
1.07(m,2H),1.02
‑
0.65(m,1H)；
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种粘度检测方法，其特征在于，所述粘度检测方法使用式1所示的荧光探针；2.根据权利要求1所述的粘度检测方法，其特征在于，所述粘度检测方法包括将所述荧光探针加入到被测体系中，通过对所述荧光探针的荧光强度进行检测，对所述被测体系的粘度进行定性或定量检测。3.根据权利要求2所述的粘度检测方法，其特征在于，所述定性检测的方法包括：采用标准体系，向所述标准体系中加入所述荧光探针，并进行荧光强度检测；增加以及降低所述标准体系的粘度，并分别进行荧光强度检测；确定标准体系的粘度变化与荧光强度的变化趋势关系。4.根据权利要求2所述的粘度检测方法，其特征在于，所述定量检测的方法包括：向不同粘度的标准体系中加入所述荧光探针，并进行荧光强度检测；对标准体系的粘度以及对应的荧光强度进行拟合，得到粘度与荧光强度的对应关系；向被测体系中加入所述荧光探针，并进行荧光强度检测，将所述荧光强度值带入所述粘度与荧光强度的对应关系中，得到所述被测体系的粘度。5.根据权利要求1所述的粘度检测...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱焰，韩琳琳，庞现红，潘伟，
申请(专利权)人：山东第一医科大学山东省医学科学院，
类型：发明
国别省市：