一种NHEJ底物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及DNA修复技术领域，尤其是涉及一种NHEJ底物及其制备方法和应用，该制备方法包括如下步骤：S1、将Nanoluc、SV40、CMV基因通过酶切、连接至质粒载体，制得dsDNA片段序列；S2、步骤S1制得的dsDNA片段序列经退火处理后，将dsDNA片段序列中的Nanoluc基因一端连接N端长链引物和N端短链引物，CMV基因一端连接C端长链引物和C端短链引物，制得部分双链的DNA；S3、将步骤S2制得的部分双链的DNA经DNA连接酶连接，制得双链DNA的NHEJ底物。本发明专利技术制备的NHEJ底物能够在细胞内特异性识别NHEJ损伤修复途径，损伤修复的范围广，效率高，利于后续不同类型的药物筛选及研发。同类型的药物筛选及研发。同类型的药物筛选及研发。

【技术实现步骤摘要】
一种NHEJ底物及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及DNA修复
，尤其是涉及一种NHEJ底物及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]DNA修复(DNArepairing)是细胞对DNA受损伤后的一种反应，这种反应可能使DNA结构恢复原样，重新执行它原来的功能；但有时并非能完全消除DNA损伤，只是使细胞能够耐受DNA损伤而继续生存。也许这未能完全修复而存留下来的损伤会在一定条件下显示出来(如细胞癌变等)，但如果细胞不具备这种修复功能，就无法应对经常发生的DNA损伤事件。
[0003]DNA损伤会造成严重的生理功能障碍，因此，针对不同类型的DNA损伤，研究了不同的修复方法。真核生物的DNA修复主要有4种类型：核苷酸切除修复(NER)、碱基切除修复(BER)、错配修复(MMR)和双链断裂修复(DSBR)。
[0004]NER和BER统称为切除修复，可将受损部位从DNA分子中切除，利用未受损的DNA单链作为模板，合成完整的DNA双链，完成修复过程。MMR可修复DNA复制中产生的错误配对；DSB是一种严重的损伤，会导致本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种NHEJ底物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、将Nanoluc、SV40、CMV基因通过酶切、连接至质粒载体，制得dsDNA片段序列；S2、步骤S1制得的dsDNA片段序列经退火处理后，将dsDNA片段序列中的Nanoluc基因一端连接N端长链引物和N端短链引物，CMV基因一端连接C端长链引物和C端短链引物，制得部分双链的DNA；S3、将步骤S2制得的部分双链的DNA经DNA连接酶连接，制得双链DNA的NHEJ底物。2.根据权利要求1所述的NHEJ底物的制备方法，其特征在于，所述N端长链引物和C端长链引物具有10bp同源互补序列。3.根据权利要求2所述的NHEJ底物的制备方法，其特征在于，所述N端长链引物序列如SEQ ID NO：1所示，N端短链引物序列如SEQ ID NO：2所示，C端长链引物序列如SEQ ID NO：3所示，C端短链引物序列如SEQ ID NO：4所示。4.根据权利要求1所述的NHEJ底物的制备方法，其特征在于，所述N端长链引物和C端长链引物具有20bp同源互补序列。5.根据权利要求4所述的NHE...

【专利技术属性】
技术研发人员：邴铁军，周丽珍，黄聪，王爱成，李晓晴，李诺，毛珂君，侯琳，李英骥，
申请(专利权)人：北京爱思益普生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：