一种高基因表达量的表达载体及其在提高外泌体内ago2蛋白携带量中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种高表达量的RNA序列，骨架序列为miRNA

【技术实现步骤摘要】
一种高基因表达量的表达载体及其在提高外泌体内ago2蛋白携带量中的应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种高基因表达量的表达载体及其在提高外泌体内ago2蛋白携带量中的应用。
技术背景
[0002]AGO蛋白质是一类庞大的蛋白质家族，是组成RISCs复合物的主要成员。AGO蛋白(argonaute proteins)由N末端、PAZ、MID和PIWI 4个结构域组成。AGO蛋白在miRNA通路中发挥多种功能，通过产生ac
‑
pre
‑
miRNA，参与了miRNA装配的过程，同时它们是RISC效应器蛋白，介导mRNA降解、去稳定作用或者转录抑制；另外，AGO2蛋白可以在转录后调控调节miRNA丰度，内源性AGO2的减少会降低成熟miRNA的表达和活性。
[0003]现有的常规表达载体，在表达miRNA过程中，是可以结合AGO2蛋白进入外泌体的，但miRNA的表达量通常较低，进而使其所结合的AGO2蛋白在外泌体中含量也较低。

技术实现思路

[0004]针对上述存在的技术局限性，本专利技术提出了一种高表达量的RNA序列、其表达载体及其在提高外泌体内ago2蛋白携带量中的应用；其克服了
技术介绍
中提到的不足和缺陷。
[0005]为实现上述目的，本专利技术采用了以下技术方案：
[0006]一种高表达量的RNA序列，所述RNA序列中的骨架序列为miRNA
‑
155或miRNA
‑
451前体的骨架序列，所述RNA序列中的关键序列为siRNA或miRNA序列。
[0007]可选地，上述的高表达量的RNA序列，所述关键序列中的siRNA序列为si
‑
EGFR序列，miRNA序列为miR
‑
16序列。
[0008]可选地，上述的高表达量的RNA序列，所述RNA序列的核苷酸序列如SEQ ID No.1～SEQ ID No.6中的任一所示。
[0009]miR
‑
155bac
‑
miR
‑
16(SEQ ID No.1)：
[0010]GGATCCTGGAGGCTTGCTGAAGGCTGTATGCTGUAGCAGCACGUAAAUAUUGGCGGTTTTGGCCACTGACTGACCGCCAAUAUACGUGCUGCUACAGGACACAAGGCCTGTTACTAGCACTCACATGGAACAAATGGCCCAGATCTGGCCGCACTCGAG；
[0011]miR
‑
155bac
‑
si
‑
EGFR(SEQ ID No.4)：
[0012]GGATCCTGGAGGCTTGCTGAAGGCTGTATGCTGATACCTATTCCGTTACACACTGTTTTGGCCACTGACTGACAGTGTGTAGGAATAGGTATCAGGACACAAGGCCTGTTACTAGCACTCACATGGAACAAATGGCCCAGATCTGGCCGCACTCGAG；
[0013]miR
‑
16bac
‑
miR
‑
16(SEQ ID No.2)：
[0014]GUCAGCAGUGCCUUAGCAGCACGUAAAUAUUGGCGUUAAGAUUCU AAAAUUAUCUCCAGUAUUAACUGUGCUGCUGAAGUAAGGUUGAC；
[0015]miR
‑
16bac
‑
si
‑
EGFR(SEQ ID No.5)：
[0016]GUCAGCAGUGCCUATACCTATTCCGTTACACACTUUAAGAUUCUAAA AUUAUCUAGTGTGTAGGAATAGGTATAGUAAGGUUGAC；
[0017]miR
‑
451bac
‑
miR
‑
16(SEQ ID No.3)：
[0018]CUUGGGAAUGGCAAGGUAGCAGCACGUAAAUAUUGGCGAAUAUU UACGUGCUGCUUUCUUGCUAUACCCAGA；
[0019]miR
‑
451bac
‑
si
‑
EGFR(SEQ ID No.6)：
[0020]CUUGGGAAUGGCAAGGATACCTATTCCGTTACACACTUGUAACGGA AUAGGUAAUCUUGCUAUACCCAGA。
[0021]本专利技术的第二个专利技术点在于，提供了一种可表达上述高表达量RNA序列的表达载体，所述表达载体为质粒。
[0022]可选地，上述的表达载体，所述表达载体的启动子为CMV T7启动子。
[0023]可选地，上述的表达载体，所述表达载体中还具有标签蛋白，标签蛋白优选为EmGFP标签蛋白。
[0024]本专利技术的第三个专利技术点在于，提供了上述高表达量RNA序列或上述表达载体在提高miR
‑
16/si
‑
EGFR表达量中的应用。
[0025]本专利技术的第四个专利技术点在于，提供了上述高表达量RNA序列或上述表达载体在在提高外泌体内ago2蛋白携带量中的应用。
[0026]本专利技术的第五个专利技术点在于，提供了一种重组细胞，所述重组细胞中含有上述的表达载体，或所述重组细胞的基因组整合有所述表达载体。
[0027]本专利技术的第六个专利技术点在于，提供了一种药物产品，所述药物产品含有上述高表达量RNA序列、上述表达载体、上述重组细胞以及药学上可接受的载体或赋形剂。
[0028]首先，ago2蛋白会招募miRNA进入到外泌体，Drosha和Dicer存在于来自HIV
‑
1感染细胞的细胞培养上清和HIV患者血清的外泌体中(Narayanan，A.，Iordanskiy，S.，Das，R.，Van Duyne，R.，Santos，S.，Jaworski，E.，Guendel，I.，Sampey，G.，Dalby，E.，Iglesias
‑
Ussel，M.，et al.(2013).Exosomes derived from HIV
‑1‑
infected cells contain trans
‑
activation response element RNA.J.Biol.Chem.288，20014
–
20033.)，在晚期核内体/多泡体(MVBs)中也观察到Dicer、TRBP和AGO2的共同存在(Shen，J.，Xia，W.，Khotskaya，Y.B.，Huo，L.，Nakanishi，K.，Lim，S.O.，Du，Y.，Wang，Y.，Chang，W.C.，Chen，C.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高表达量的RNA序列，其特征在于，所述RNA序列中的骨架序列为miRNA
‑
155或miRNA
‑
451前体的骨架序列，所述RNA序列中的关键序列为siRNA或miRNA序列。2.根据权利要求1所述的高表达量的RNA序列，其特征在于，所述关键序列中的siRNA序列为si
‑
EGFR序列，miRNA序列为miR
‑
16序列。3.根据权利要求1或2所述的高表达量的RNA序列，其特征在于，所述RNA序列的核苷酸序列如SEQ ID No.1～SEQ ID No.6中的任一所示。4.一种可表达权利要求1
‑
3任一所述高表达量RNA序列的表达载体，其特征在于，所述表达载体为质粒。5.根据权利要求4所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体的启动子为CMV T7启动子。6.根据权利要求4所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体中还具有标...

【专利技术属性】
技术研发人员：张辰宇，张玉婧，窦宜豪，季梦茹，石欢欢，李菁，方静雯，
申请(专利权)人：南京大学，
类型：发明
国别省市：