一种用于生物合成胆红素的重组大肠杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于生物合成胆红素的重组大肠杆菌及其应用，所述重组大肠杆菌同时表达沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)来源的5

【技术实现步骤摘要】
一种用于生物合成胆红素的重组大肠杆菌及其应用
(一)

[0001]本专利技术属于生物合成
，具体涉及一种用于生物合成胆红素的重组大肠杆菌及其应用。
(二)
技术介绍

[0002]胆红素(bilirubin，CAS：635
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65
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4)是在一些生物体内，由血红素降解产生的一类橙黄色胆色素。在脊椎动物体中，衰老死亡的红细胞释放出血红素，血红素在血红素加氧酶(heme oxygenase，简称HO，有HO1、HO2和HO3三种类型，其中HO1主要酶)的作用下，在α
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亚甲基桥处开环生成胆绿素，胆绿素又在胆绿素还原酶(biliverdin reductase，BVR)的作用下，进一步还原生成胆红素。
[0003]过去，胆红素都被认为是一种对神经系统有害无利的代谢废物，但是近年来，随着对胆红素的系统研究不断深入，人们对胆红素有了更多的认识，发现胆红素具有一系列重要的生理作用，包括抗氧化活性、抗炎、免疫调节、抗病毒、抗增殖活性等；在中医方面，胆红素具有镇静、解热、降压、抗惊厥等作用。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于生物合成胆红素的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌同时表达沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)来源的5
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氨基乙酰丙酸合成酶、集胞藻(Synechocystis sp.)来源的血红素加氧酶和胆绿素还原酶。2.如权利要求1所述用于生物合成胆红素的重组大肠杆菌，其特征在于，所述5
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氨基乙酰丙酸合成酶编辑基因hemO核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述血红素加氧酶编码基因ho1核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；所述胆绿素还原酶编码基因bvr核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。3.如权利要求1所述用于生物合成胆红素的重组大肠杆菌，其特征在于，所述的重组大肠杆菌按以下步骤构建：(1)将5
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氨基乙酰丙酸合成酶、血红素加氧酶和胆绿素还原酶的编码基因，经大肠杆菌偏好密码子优化后，并分别在3个基因序列的两端引入限制性内切酶位点，化学合成基因的DNA序列，获得hemO序列、ho1序列、bvr序列；(2)合成的hemO序列和表达质粒载体pCDFDuet
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1，分别经限制性内切酶HindⅢ和Pst I双酶切后，构建成重组质粒pCDFDuet
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hemO；合成的ho1序列和质粒载体pETDuet
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1，分别经限制性内切酶Nde I和Xho I双酶切，构建成重组质粒pETDuet
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ho1，bvr序列和重组质粒pETDuet
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ho1，分别经限制性内切酶EcoR I和SaI I双酶切后，构建成重组质粒pETDuet
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ho1
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bvr；(3)将步骤(2)构建的质粒pCDFDuet
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hemO和pETDuet
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ho1
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bvr，热激法同时转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中，筛选阳性转化子，经菌落PCR鉴定，SDS
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PAGE验证，获得的能够同时表达三种酶的重组大肠杆菌。4.一种权利要求1所述重组大肠杆菌在生物合成胆红素中的应用。5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的应用的方法为：将重组大肠杆菌接种至含50μg/mL链霉素和100μg/mL氨苄青霉素的TB培养基中，于35
–
37℃、180
–
220r/min摇床中培养2.0
–
3.0h至OD
600
＝0.8
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1.2，加入终浓度为0.05
–
0.1mmol/L的IPTG，或终浓度为2
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4g/L的乳糖作为诱导剂，在30
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32℃、180
–
220r/min的摇床中诱导表达培养24
–
32h至OD
600

【专利技术属性】
技术研发人员：梅建凤，季军情，陈乐生，应国清，易喻，
申请(专利权)人：上海和不同科技有限公司，
类型：发明
国别省市：