用于联合检测四环素抗性基因的四重荧光定量PCR引物和探针组合及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种用于联合检测四环素抗性基因的四重荧光定量PCR引物和探针组合及检测方法，属于分子生物学领域。本发明专利技术中联合检测的四种四环素抗性基因为tetA、tetM、tetX、tet39。本发明专利技术建立了同一体系同时检测四种四环素抗性基因的荧光定量PCR方法，该方法具有联合检测、特异、灵敏、快速的特点，为四环素抗性基因定性定量检测提供技术储备。性基因定性定量检测提供技术储备。性基因定性定量检测提供技术储备。

【技术实现步骤摘要】
用于联合检测四环素抗性基因的四重荧光定量PCR引物和探针组合及检测方法


[0001]本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及一种用于联合检测四环素抗性基因的四重荧光定量PCR引物和探针组合及检测方法。

技术介绍

[0002]四环素类抗生素是一类广谱抗生素，已被广泛用于人和动物的感染防治。四环素类抗生素进入体内后只有部分能被代谢吸收，大部分抗生素母体及其代谢产物随体液被排入自然环境中。四环素类抗生素在环境中长期持留，对细菌具有选择效应，诱导其产生抗性，促进抗性基因的迁移转化，威胁环境与人类健康。
[0003]四环素类抗生素诱导细菌产生抗性基因，抵抗抗生素胁迫产生耐药。四环素类抗生素耐药机制主要包括外排泵、核糖体保护蛋白和酶失活机制。tetA与tet39表达外排泵，将四环素类抗生素泵出胞外从而降低胞内浓度；tetM表达核糖体保护蛋白，与四环素类抗生素竞争性结合作用靶点从而降低抗生素活性；tetX产生氧化还原酶使四环素失活。tetA、tetM、tetX、tet39是环境中普遍检出且丰度较高的基因。在华北地区某养殖场畜禽粪便中tetA检出率高达8本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于联合检测四环素抗性基因的四重荧光定量PCR引物和探针组合，其特征在于，能联合检测tetA、tetM、tetX、tet39四种四环素抗性基因，所述引物和探针组合包括如下组分：用于检测tetA的特异性引物对和探针序列，其中正向引物、反向引物和探针序列分别如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示；用于检测tetM的特异性引物对和探针序列，其中正向引物、反向引物和探针序列分别如SEQ ID No.4、SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示；用于检测tetX的特异性引物对和探针序列，其中正向引物、反向引物和探针序列分别如SEQ ID No.7、SEQ ID No.8和SEQ ID No.9所示；用于检测tet39的特异性引物对和探针序列，其中正向引物、反向引物和探针序列分别如SEQ ID No.10、SEQ ID No.11和SEQ ID No.12所示；四条探针序列的5
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端均标记有荧光报告基团，3
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端均标记有荧光淬灭基团。2.如权利要求1所述的四重荧光定量PCR引物和探针组合，其特征在于，用于检测tetA的探针序列的5
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端标记有荧光报告基团VIC，3
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端标记有荧光淬灭基团BHQ1。3.如权利要求1所述的四重荧光定量PCR引物和探针组合，其特征在于，用于检测tetM的探针序列的5
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端标记有荧光报告基团FAM，3
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端标记有荧光淬灭基团TAMRAR。4.如权利要求1所述的四重荧光定量PCR引物和探针组合，其特征在于，用于检测tetX2的探针序列的5
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端标记有荧光报告基团ROX，3
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端标记有荧光淬灭基团BHQ2。5.如权利要求1所述的四重荧光定量PCR引物和探针组合，其特征在于，用于检测tet39的探针序列的5
，
端标记有荧光报告基团CY5...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡宝兰，虞臻迪，程东庆，刘子述，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：