用于检测新型冠状病毒的试剂盒和方法技术

本公开涉及一种用于检测新型冠状病毒的试剂盒和方法，试剂盒包括引物对集和探针集；引物对集包括第一引物对、第二引物对、第三引物对和第四引物对，第一引物对包括如SEQ ID NO.7所示的正向引物和如SEQ ID NO.8所示的反向引物；第二引物包括由如SEQ ID NO.1所示的正向引物和如SEQ ID NO.2所示的反向引物；第三引物对包括如SEQ ID NO.4所示的正向引物和如SEQ ID NO.5所示的反向引物；第四引物对包括如SEQ ID NO.10所示的正向引物和如SEQ ID NO.11所示的反向引物；探针集包括核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示的第一探针、核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的第二探针、核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的第三探针和核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示的第四探针。根据本公开，提供一种灵敏度高的用于检测新型冠状病毒的试剂盒和方法。法。法。

【技术实现步骤摘要】
用于检测新型冠状病毒的试剂盒和方法
[0001]本申请是申请日为2022年01月27日、申请号为202210098504.6、专利技术名称为检测新型冠状病毒及其Omicron突变株的试剂盒和方法的专利申请的分案申请。


[0002]本专利技术属于生物
，具体地说本专利技术涉及一种用于检测新型冠状病毒的试剂盒和方法。

技术介绍

[0003]新型冠状病毒(SARS
‑
CoV
‑
2)是一种单股正链RNA病毒，容易发生变异。在临床上，新冠病毒感染者的症状差异较大，从无症状到危重症都有可能发生。除了个体因素的差异外，病毒变异也可能是导致感染患者症状差异大的重要因素。
[0004]研究表明，新型冠状病毒突变速率约为每月2～4个突变，目前在已知的株系发现了超过25个突变的变异株。相继在多个国家发现Alpha新冠变异株、Beta新冠变异株、Gamma新冠变异株、Delta新冠变异株、Omicron新冠变异株，它们在病毒表面刺突蛋白的受体结合域(RBD)发生了突变，使其与人体细胞表面的血管紧张素转化酶2(ACE2)受体更容易结合，病毒的变异会显著影响其传播能力和致病能力。
[0005]新冠病毒奥密克戎变异株在病毒刺突(Spike)蛋白突变较多，同时具有前4个变异株Alpha(阿尔法)、Beta(贝塔)、Gamma(伽玛)和Delta(德尔塔)刺突蛋白的重要氨基酸突变位点，包括增强细胞受体亲和力和病毒复制能力的突变位点，导致其具有极强的传播能力。
[0006]因此，开发一种能够同时检测新型冠状病毒以及Omicron变异株的联合筛查试剂盒，对于疫情防控和确诊患者的治疗具有非常积极的意义。

技术实现思路

[0007]本专利技术针对新型冠状病毒及其Omicron变异株开发了快速检测新型冠状病毒及Omicron突变株的组合物、试剂盒、方法及用途。
[0008]在本专利技术的第一方面，提供了一种用于检测新型冠状病毒及其Omicron变异株的引物对集，所述引物对集包括第一引物：
[0009]所述第一引物对包括：如SEQ ID NO.7所示的正向引物；和，如SEQ ID NO.8所示的反向引物。
[0010]在另一优选例中，所述引物对集还包括检测新型冠状病毒的其它引物对。
[0011]在另一优选例中，所述引物对集还包括检测新型冠状病毒ORF1ab基因、和/或N基因的引物对。
[0012]在另一优选例中，所述引物对集还包括第二引物对，所述第二引物对特异性扩增新型冠状病毒ORF1ab基因，所述第二引物对包括：
[0013]如SEQ ID NO.1所示的正向引物；和，如SEQ ID NO.2所示的反向引物。
[0014]在另一优选例中，所述引物对集还包括第三引物对，所述第三引物对特异性扩增
新型冠状病毒N基因，所述第三引物对包括：
[0015]如SEQ ID NO.4所示的正向引物；和，如SEQ ID NO.5所示的反向引物。
[0016]在另一优选例中，所述引物对集还包括第四引物对，所述第四引物对特异性扩增内参RNase P基因，所述第四引物对包括：
[0017]如SEQ ID NO.10所示的正向引物；和，如SEQ ID NO.11所示的反向引物。
[0018]本专利技术的第二方面，提供了一种用于检测新型冠状病毒及其Omicron突变株的探针集，所述探针集包括：
[0019]核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示的第一探针。
[0020]在另一优选例中，所述探针集还包括核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的第二探针。
[0021]在另一优选例中，所述探针集还包括核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的第三探针。
[0022]在另一优选例中，所述探针集还包括核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示的第四探针。
[0023]在另一优选例中，各探针的5
’
端包含有荧光报告基团；和/或，各探针的3
’
端包含有荧光淬灭基团。
[0024]在另一优选例中，所述各探针标记的荧光报告基团互不相同。
[0025]本专利技术的第三方面，提供了一种用于检测新型冠状病毒及其Omicron突变株的试剂盒，所述试剂盒包括用于检测新型冠状病毒及其Omicron变异株的引物对，所述引物对包括：如SEQ ID NO.7所示的正向引物；和，如SEQ ID NO.8所示的反向引物。
[0026]在另一优选例中，所述试剂盒还包括探针，所述探针特异性靶向SEQ ID NO.7所示的正向引物和SEQ ID NO.8所示的反向引物的PCR扩增产物。
[0027]在另一优选例中，所述试剂盒包括本专利技术第一方面所述的引物对集。
[0028]在另一优选例中，所述试剂盒还包括本专利技术第二方面所述的探针集。
[0029]在另一优选例中，所述试剂盒还包括选自下组的一种或多种成分：热启动Taq酶、逆转录酶、UDG酶(尿嘧啶
‑
N
‑
糖基化酶)、dNTPs、MgCl2。
[0030]在另一优选例中，所述试剂盒还包括阴性质控品。
[0031]在另一优选例中，所述试剂盒还包括阳性质控品。
[0032]在另一优选例中，所述试剂盒包括第一容器，所述第一容器内包含引物探针混合液，所述引物探针混合液包括：SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.12所示的核苷酸序列。
[0033]在另一优选例中，所述第一容器内还包含：MgCl2和dNTPs。
[0034]在另一优选例中，所述试剂盒还包括第二容器，所述第二容器内包含酶混合液，所述酶混合液包含热启动Taq酶、逆转录酶、和尿嘧啶糖基化酶(UNG))。
[0035]在另一优选例中，所述试剂盒包括第三容器，所述第三容器内包含阴性质控品。
[0036]在另一优选例中，所述试剂盒包括第四容器，所述第四容器内包含阳性质控品。
[0037]本专利技术的第四方面，提供了一种检测新型冠状病毒及其Omicron突变株的方法，所述方法包括步骤：
[0038](1)提供待检测对象的样本；
[0039](2)制备荧光定量PCR反应体系并进行荧光定量PCR检测：
[0040]其中，所述荧光定量PCR反应体系包括：步骤(1)提供的所述样本、本专利技术第一方面所述的引物对集、和本专利技术第二方面所述的探针集。
[0041]在另一优选例中，所述样本为核酸样本。
[0042]在另一优选例中，所述样本可来自咽拭子样本、肺泡灌洗液样本、血液样本、痰液样本、粪便样本或环境样本。
[0043]在另一优选例中，所述方法为非诊断目的的检测方法。
[0044]在另一优选例中，所述荧光定量PCR反应体系还包括阳性质控品，和/或阴性质控品。
[0045]在另一优选例中，所述PCR反应体系还包括PCR反应酶系。
[0046]本专利技术的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括引物对集和探针集；所述引物对集包括第一引物对、第二引物对、第三引物对和第四引物对，所述第一引物对包括如SEQ ID NO.7所示的正向引物和如SEQ ID NO.8所示的反向引物，所述第一引物对特异性扩增新型冠状病毒Omicron特异性突变位点；所述第二引物包括由如SEQ ID NO.1所示的正向引物和如SEQ ID NO.2所示的反向引物，所述第二引物对特异性扩增新型冠状病毒ORF1ab基因；所述第三引物对包括如SEQ ID NO.4所示的正向引物和如SEQ ID NO.5所示的反向引物，所述第三引物对特异性扩增新型冠状病毒N基因；所述第四引物对包括如SEQ ID NO.10所示的正向引物和如SEQ ID NO.11所示的反向引物，所述第四引物对特异性扩增内参RNase P基因；所述探针集包括核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示的第一探针、核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的第二探针、核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的第三探针和核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示的第四探针。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括酶混合液、MgCl2和dNTPs，其中MgCl2的浓度为4.5mM，dNTPs的浓度为0.2mM。3.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，各个引物的浓度为0.3μM，各个探针的浓度为0.15μM。4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阴性质控品，所述阴性质控品为DEPC H2O。5.如权利要求1或4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性质控品，所述阳性质控品为新型冠状病毒ORF1ab靶基因、新型冠状病毒N靶基因、新型冠状病毒Omicron特异性突变位点及内参基因目的片段质粒。6.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括人源内参基因，所述人源内参基因用于对标本采集、核酸提取过程及PCR扩增过程进行监控。7.一种非诊断目的的检测新型冠状病毒的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：(1)提供待检测对象的样本；(2)制备荧光定量PCR反应体系并进行荧光定量PCR检测；所述荧光定量PCR...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭爱女，徐露，郭永超，王艳平，
申请(专利权)人：深圳联合医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：