抗CD2v-N的特异性抗体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了抗CD2v

【技术实现步骤摘要】
抗CD2v
‑
N的特异性抗体及其应用


[0001]本专利技术属于生物技术、免疫学领域，涉及抗CD2v
‑
N的特异性抗体及其应用。

技术介绍

[0002]非洲猪瘟(Infection with African swine fever virus，ASF)是由非洲猪瘟病毒(African Swine fever virus，ASFV)感染家猪和各种野猪(如非洲野猪、欧洲野猪等)而引起的一种急性、出血性、烈性传染病。非洲猪瘟病毒(ASFV,African swine fever virus)是非洲猪瘟病毒科(Asfarviridae)下仅有的种，具有传染性和极高的致病性，急性病例临床症状以高热、病程短、死亡率高、内脏器官广泛性出血以及呼吸系统和神经系统功能紊乱为主要特征。
[0003]非洲猪瘟病毒是一种有包膜的、核衣壳呈二十面体对称形态的病毒。ASFV基因组由线性的双链DNA组成，大小为170
‑
193kbp。其中包含150
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167个开放阅读框，编码150
‑
200种蛋白质，其中一种蛋白为CD2v。CD2v是有ASFV的EP402R基因编码的病毒外膜糖蛋白，也被称为pEP402R。它由402个氨基酸构成，预测的蛋白质大小为46.5kD。CD2v是一种病毒包膜蛋白，其结构被分为4个结构域：20个氨基酸构成的N端信号肽结构域；183个氨基酸构成的胞外结构域；25个氨基酸构成的疏水跨膜区域；174个氨基酸构成的胞内结构域。当ASFV入侵宿主细胞后，CD2v会在内质网或高尔基体中被切割，经切割后产生的63kD的N端以糖基化形式存在。因其氨基酸序列与T淋巴细胞表面黏附受体CD2具有很高的相似性，被认为是CD2的同源物。CD2v在促进病毒复制与传播、病毒免疫逃逸等方面发挥着重要作用，也是ASFV疫苗研究的热门靶标。

技术实现思路

[0004]为了解决上述的问题，本专利技术的目的在于提供抗CD2v
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N蛋白的特异性抗体。
[0005]本专利技术的第一方面提供了一种抗CD2V
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N蛋白的单克隆抗体，所述单克隆抗体包括单克隆抗体2B25、3J25任意一种；其中，
[0006]所述单克隆抗体2B25包含：SEQ ID NO：1所示的重链可变区CDR1、SEQ ID NO：2所示的重链可变区CDR2、SEQ ID NO：3所示的重链可变区CDR3、SEQ ID NO：9所示的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO：10所示的轻链可变区CDR2、SEQ ID NO：11所示的轻链可变区CDR3。
[0007]所述单克隆抗体3J25包含：SEQ ID NO：17所示的重链可变区CDR1、SEQ ID NO：18所示的重链可变区CDR2、SEQ ID NO：19所示的重链可变区CDR3、SEQ ID NO：25所示的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO：26所示的轻链可变区CDR2、SEQ ID NO：27所示的轻链可变区CDR3。
[0008]术语“抗体”包括是指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白(Ig)分子的抗原结合部分，即，含有特异性结合抗原(与其免疫反应)的抗原结合位点的分子。“特异性结合”或“与
…
免疫反应”或“免疫特异性结合”意指抗体与所需抗原的一个或多个抗原决定簇反应和不与其他多肽反应或以低得多的亲和力结合(Kd>10
‑6)。抗体包括但不限于多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、全人抗体、结构域抗体、单链、Fab和F(ab')2片段、scFv和Fab表达文库。
[0009]术语“特异性抗体”或“单克隆抗体”，是指仅含有一个分子种类的抗体分子的抗体分子群，所述抗体分子由独特的轻链基因产物和独特的重链基因产物组成。具体而言，特异性抗体的互补决定区(CDR)在所述群的所有分子中相同。特异性抗体含有能够与抗原的特定表位起免疫反应的抗原结合位点，特征在于对抗原有独特的结合亲和力。
[0010]进一步，所述单克隆抗体2B25还包含具有与SEQ ID NO：4、5、6、7所示氨基酸序列至少90％序列一致性的重链可变区框架区FR1、FR2、FR3、FR4，以及具有与SEQ ID NO：12、13、14、15所示氨基酸序列至少90％序列一致性的轻链可变区框架区FR1、FR2、FR3、FR4。
[0011]进一步，所述单克隆抗体3J25还包含具有与SEQ ID NO：20、21、22、23所示氨基酸序列至少90％序列一致性的重链可变区框架区FR1、FR2、FR3、FR4，以及具有与SEQ ID NO：28、29、30、31所示氨基酸序列至少90％序列一致性的轻链可变区框架区FR1、FR2、FR3、FR4。
[0012]进一步，所述单克隆抗体2B25重链可变区具有与SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列至少90％序列一致性，优选95％序列一致性的重链可变区，所述轻链可变区具有与SEQ ID NO：16所示的氨基酸序列至少90％序列一致性，优选95％序列一致性的轻链可变区。
[0013]进一步，所述单克隆抗体3J25重链可变区具有与SEQ ID NO：24所示的氨基酸序列至少90％序列一致性，优选95％序列一致性的重链可变区，所述轻链可变区具有与SEQ ID NO：32所示的氨基酸序列至少90％序列一致性，优选95％序列一致性的轻链可变区。
[0014]进一步，所述单克隆抗体2B25重链为IgG2b抗体，3J25重链为IgG1抗体，两者轻链均为kappa亚型。
[0015]在某一具体的实施方式中，所述单克隆抗体2B25的重链可变区具有SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列；所述单克隆抗体2B25的轻链可变区具有SEQ ID NO：16所示的氨基酸序列。
[0016]在某一具体的实施方式中，所述单克隆抗体3J25的重链可变区具有SEQ ID NO：24所示的氨基酸序列；所述单克隆抗体3J25的轻链可变区具有SEQ ID NO：32所示的氨基酸序列。
[0017]在一些实施例中，本专利技术提供的抗体和其功能片段包含重链可变结构域的全部或一部分和/或轻链可变结构域的全部或一部分。在一个实施例中，本专利技术提供的抗体和其功能片段是由本专利技术提供的重链可变结构域的全部或一部分组成的单结构域抗体。
[0018]进一步，所述单克隆抗体进一步包含重链恒定区和轻链恒定区。
[0019]在某些实施例中，本专利技术提供的单克隆抗体和其功能片段进一步包含免疫球蛋白(Ig)恒定区，其任选地进一步包含重链和/或轻链恒定区。在某些实施例中，重链恒定区包含CH1、铰链和/或CH2
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CH3区(或任选地CH2
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CH3
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CH4区)。本专利技术提供的抗体和其功能片段的恒定区可与野生型恒定区序列一致或相差一或多个突变。
[0020]在某些实施例中，本专利技术提供的抗体和其功能片段在CDR序列中的一或多本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗CD2V
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N蛋白的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体包括单克隆抗体2B25、3J25任意一种；其中，所述单克隆抗体2B25包含：SEQ ID NO：1所示的重链可变区CDR1、SEQ ID NO：2所示的重链可变区CDR2、SEQ ID NO：3所示的重链可变区CDR3、SEQ ID NO：9所示的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO：10所示的轻链可变区CDR2、SEQ ID NO：11所示的轻链可变区CDR3；所述单克隆抗体3J25包含：SEQ ID NO：17所示的重链可变区CDR1、SEQ ID NO：18所示的重链可变区CDR2、SEQ ID NO：19所示的重链可变区CDR3、SEQ ID NO：25所示的轻链可变区CDR1、SEQ ID NO：26所示的轻链可变区CDR2、SEQ ID NO：27所示的轻链可变区CDR3。2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体2B25还包含具有与SEQ ID NO：4、5、6、7所示氨基酸序列至少90％序列一致性的重链可变区框架区FR1、FR2、FR3、FR4，以及具有与SEQ ID NO：12、13、14、15所示氨基酸序列至少90％序列一致性的轻链可变区框架区FR1、FR2、FR3、FR4；所述单克隆抗体3J25还包含具有与SEQ ID NO：20、21、22、23所示氨基酸序列至少90％序列一致性的重链可变区框架区FR1、FR2、FR3、FR4，以及具有与SEQ ID NO：28、29、30、31所示氨基酸序列至少90％序列一致性的轻链可变区框架区FR1、FR2、FR3、FR4。3.根据权利要求1或2所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体2B25重链可变区具有与SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列至少90％序列一致性，优选95％序列一致性的重链可变区，所述轻链可变区具有与SEQ ID NO：16所示的氨基酸序列至少90％序列一致性，优选95％序列一致性的轻链可变区；所述单克隆抗体3J25重链可变区具有与SEQ ID NO：24所示的氨基酸序列至少90％序列一致性，优选95％序列一致性的重链可变区，所述轻链可变区具有与SEQ ID NO：32所示的氨基酸序列至少90％序列一致性，优选95％序列一致性的轻链可变区；优选地，所述单克隆抗体2B25重链为IgG2b抗体，3J25重链为IgG1抗体，两者轻链均为kappa亚型。4.根据权利要求1或2所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体进一步包含重链恒定区和轻链恒定区。5.如下任一项所述的物质：1)核酸分子，所述核酸分子编码权利要求1
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4任一项所述的单克隆抗体或其功能片段；2)重组表达载体，所述重组表达载体包含1)中所述的核酸分子；3)改造的宿主细胞，所述改造的宿主细胞包含权利要求1
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4任一项所述的单克隆抗体或其功能片段，或权利要求5中1)中所述的核酸分子、2)中所述的重组表达载体；4)抗体偶联物，所述抗体偶联物包含权利要求1
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4任一项所述的单克隆抗体或其功能片段直接或间接的偶联到可检测标记物形成的复合物；优选地，所述单克隆抗体的功能片段还包括核酸类功能片段，所述核酸类功能片段可以结合编码抗原CD2V
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N蛋白的核酸分子；5)一种检测CD2V
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N蛋白的产品，所述产品包含权利要求1
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4任一项所述的单克隆抗体或其功能片段、权利要求5中1)中所述的核酸分子、2)中所述的重组表达载体、3)中所述的改造的宿主细胞或4)中所述的抗体偶联物；6)一种检测非洲猪瘟病毒感染的产品，所述产品包含权利要求1
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4任一项所述的单克
隆抗体或其功能片段、权利要求5中1)中所述的核酸分子、2)中所述的重组表达载体、3)中所述的改造的宿主细胞或4)中所述的抗体偶联物；7)组合物，所述组合物包括权利要求1
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4任一项所述的单克隆抗体或其功能片段，权利要求5中1)中所述的核酸分子、2)中所述的重组表达载体、3)中所述的改造的宿主细胞。6.根据权利要求5所述的物质，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：王晶，樊榕榕，魏泽良，王瑶，姜志洋，肖鹤，李新颖，陈国江，罗龙龙，乔春霞，冯健男，沈倍奋，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：