抗非洲猪瘟病毒p72蛋白单克隆抗体及制备方法和应用技术

本发明专利技术属于生物工程技术领域，公开了一种抗非洲猪瘟病毒p72蛋白单克隆抗体及制备方法和应用。本发明专利技术采用重组质粒pET28b

【技术实现步骤摘要】
抗非洲猪瘟病毒p72蛋白单克隆抗体及制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物工程
，具体涉及一种抗非洲猪瘟病毒p72蛋白单克隆抗体及制备方法和应用。

技术介绍

[0002]非洲猪瘟(Africanswinefever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(Africanswinefevervirus，ASFV)感染引起猪的一种发病率高、致死性强的传染病(张艳艳，陈腾，张静远，等.非洲猪瘟病毒基因缺失疫苗株的构建和免疫保护特性[J].中国兽医学报，2019,39(8):1421
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1427)，对生猪养殖业造成巨大的经济损失。临床大多表现为喜卧、体重减轻、慢性皮肤溃疡、关节炎、间歇性发热或高烧，病情严重者一周内可快速死亡(王功民，田克恭，非洲猪瘟.中国农业出版社，北京，2010:150
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7)。
[0003]ASFV是目前已知唯一一种主要通过虫媒传播的双链DNA病毒，其基因组大小为170
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194kb，编码超过150种蛋白质，包括54种结构蛋白和100多种非结构蛋白，病毒粒子呈正二十面体本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗非洲猪瘟病毒p72蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括如下制备步骤：(1)将ASFV的p72基因进行密码子优化后合成至pET
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28(+)质粒中，得到重组质粒pET28b
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p72；然后转化至感受态细胞进行表达，纯化后得到p72蛋白；(2)将纯化后的p72蛋白与弗氏佐剂乳化后免疫小鼠，对免疫后小鼠进行尾静脉采血，采用间接ELISA检测免疫后小鼠血清效价，选择血清抗体效价最高的小鼠进行腹腔注射p72蛋白加强免疫；(3)取加强免疫后小鼠脾细胞，与sp2/0细胞进行融合，待融合成功的细胞汇合度达到50％以上，采用间接ELISA方法筛选出分泌抗p72抗体的阳性杂交瘤细胞，对阳性杂交瘤细胞株进行亚克隆，得到抗非洲猪瘟病毒p72蛋白单克隆抗体细胞株。2.根据权利要求1所述的一种抗非洲猪瘟病毒p72蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述转化至感受态细胞进行表达的步骤为：将pET28b
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p72转化入Rosetta(DE3)和BL21(DE3)感受态细胞中，挑取单菌落进行培养，将菌液接种于含卡那霉素抗性的LB培养基中震荡培养至OD600为0.4～0.6时，加入IPTG溶液进行诱导蛋白表达。3.根据权利要求2所述的一种抗非洲猪瘟病毒p72蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述单菌落进行培养的条件为：37℃，200rpm过夜培养；所述将菌液接种于含卡那霉素抗性的LB培养基中震荡培养的条件为：将菌液按1:100比例接种于含卡那霉素抗性的LB培养基中，220rpm，37℃震荡培养；所述加入IPTG溶液进行诱导蛋白表达的条件为：加入终浓度为0.5mMIPTG溶液进行诱导蛋白表达，220rpm，28℃继续培养12h。4.根据权利要求1所述的一种抗非洲猪瘟病毒p72蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述纯化的步骤为：收集表达培养后的菌体，加入PBS重悬菌体，超声破碎菌体后离心，取上清蛋白溶液进行柱层析纯化。5.根据权利要求1所述的一种抗非洲猪瘟病毒p72蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述免疫小鼠的步骤为：将纯化后的p72蛋白以50μg/只与弗氏完全佐剂按1:1等体积乳化...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈桂娥，冯夏宁，陈瑞爱，容芳，孙荣航，李作生，刘郁夫，
申请(专利权)人：肇庆大华农生物药品有限公司华农肇庆生物产业技术研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：