一种经皮镇痛肽及其制备方法和应用技术

一种经皮镇痛肽及其制备方法和应用涉及生物医药领域。经皮镇痛肽，其氨基酸序列是：MRQIKIWFQNRRMKWKKWYKQSTGPSYYSVGRASGLLSGIRRSPDI。经皮镇痛肽的制备方法，通过基因重组技术将神经肽B基因与透皮肽ANTP基因结合，诱导表达得到经皮镇痛肽。本发明专利技术创造性的将穿膜肽与神经肽B融合，所得到的经皮镇痛肽具有良好的穿膜效果和镇痛效果，克服市售镇痛药成瘾性强、副作用大等缺陷。副作用大等缺陷。副作用大等缺陷。

【技术实现步骤摘要】
一种经皮镇痛肽及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物医药领域，尤其涉及多肽。

技术介绍

[0002]炎性疼痛是由于各种刺激因素引起肥大细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和神经末梢等释放炎症因子，引起局部组织炎症反应。由于疼痛常与自主神经活动、心理和情绪反应交织在一起，有极大的变异性，因此较其他感觉更难研究。
[0003]以吗啡为代表的麻醉性镇痛药和以阿司匹林为代表的解热镇痛抗炎药是临床常用的镇痛药物。阿片类镇痛药虽镇痛作用强大，但成瘾问题大大限制了其临床应用，且对慢性疼痛的疗效不够理想，通常仅用于晚期癌症患者。非甾体类抗炎镇痛药是炎性疼痛的首选治疗药物，虽无成瘾问题，但其镇痛作用较弱，易出现严重的胃肠道反应，且大剂量或长期使用易造成肝损害、肾损害，并影响凝血功能。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种经皮镇痛肽，以解决上述技术问题。
[0005]本专利技术的目的还在于提供经皮镇痛肽的制备方法，用于制备经皮镇痛肽。
[0006]本专利技术的目的还在于提供经皮镇痛肽的应用。
[0007]本专利技术所解决的技术问题可以采用以下技术方案来实现：
[0008]经皮镇痛肽，其特征在于，其氨基酸序列是：
[0009]MRQIKIWFQNRRMKWKKWYKQSTGPSYYSVGRASGLLSGIRRSPDI。
[0010]经皮镇痛肽的制备方法，其特征在于，通过基因重组技术将神经肽B基因与透皮肽ANTP基因结合，诱导表达得到经皮镇痛肽。r/>[0011]具体的，包括步骤一、制备BL21(DE3)/pET32a
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BgNPB，BL21(DE3)/pET32a
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BgNPB含EcoR I和Hind III限制性内切酶位点；步骤二、对BL21(DE3)/pET32a
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BgNPB中的融合蛋白TrxD
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BgNPB进行诱导表达，步骤三、对融合蛋白TrxD
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BgNPB进行条件优化，步骤四、对融合蛋白TrxD
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BgNPB进行分离纯化后获得成熟融合蛋白ANTP
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BgNPB溶液，成熟融合蛋白ANTP
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BgNPB溶液中含有经皮镇痛肽。
[0012]经皮镇痛肽的应用，其特征在于，用于制备外用镇痛剂。
[0013]经皮镇痛肽的应用，其特征在于，用于制备具有抗炎性疼痛作用的化妆品。
[0014]本专利技术创造性的将穿膜肽与神经肽B融合，所得到的经皮镇痛肽具有良好的穿膜效果和镇痛效果，克服市售镇痛药成瘾性强、副作用大等缺陷。具有以下优势：
[0015]1、安全性高，毒副作用小；
[0016]2、经皮给药形式方便、患者顺应性佳；
[0017]3、靶向治疗，特异性强。
[0018]4、经皮镇痛活性强。
附图说明
[0019]图1是蛋白质表面构象图；
[0020]图2为经皮镇痛肽活性位点图；
[0021]图3为痛阙提高率对比图。
具体实施方式
[0022]为了使本专利技术实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体图示进一步阐述本专利技术。
[0023]经皮镇痛肽
[0024]经皮镇痛肽的氨基酸序列是：
[0025]MRQIKIWFQNRRMKWKKWYKQSTGPSYYSVGRASGLLSGIRRSPDI。
[0026]经皮镇痛肽优选呈冻干粉状，从而方便使用、利于吸收。
[0027]经皮镇痛肽的制备方法
[0028]经皮镇痛肽的制备方法，通过基因重组技术将神经肽B基因与透皮肽ANTP基因结合，诱导表达得到经皮镇痛肽。
[0029]具体实施例
[0030]步骤一、制备BL21(DE3)/pET32a
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BgNPB，BL21(DE3)/pET32a
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TrxD
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BgNPB含EcoR I和Hind III限制性内切酶位点，具体操作如下：
[0031]1.1ANTP
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BgNPB基因扩增
[0032]1)使用PCR法扩增目的基因
[0033]采用密码子优化后的全基因合成方法获取片段。合成的全基因片段插入pET28a(+)质粒的EcoR I和Hind III限制性内切酶位点。使用PCR法从pET28a
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BgNPB质粒上扩增目的基因得到含EcoR I和Hind III限制性内切酶位点的ANTP
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BgNPB片段。
[0034]下表为PCR扩增体系(50μL)
[0035][0036]下表为PCR扩增条件
[0037][0038][0039]2)通过琼脂糖凝胶电泳和胶回收获得ANTP
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BgNPB片段
[0040]琼脂糖凝胶电泳：向融化均匀的1％琼脂糖凝胶中加入适量核酸染料，混匀后倒入组装好的制胶板上，静置至凝胶凝固；将胶及胶板放入电泳槽，使1x TAE电泳液没过胶面2mm左右；DNA样品和10x loading buffer按比例混匀后，向胶孔中加入适量样品及Marker；在电压130V下电泳30min；通过凝胶成像系统在紫外灯下观察拍照记录并切下含目的DNA的琼脂糖凝胶保存于1.5mL EP管。
[0041]胶回收：计算凝胶重量(作为一个凝胶体积)；加入3个凝胶体积的Buffer DE
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A于65℃加热，间断混合至凝胶块完全熔化；加1.5个凝胶体积的Bufftr DE
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B，混合均匀后溶液变为黄色(当分离的DNA片段小于400bp时，需再加入1个凝胶体积的异丙醇)；吸取混合液转移到组装好的制备管中，12,000xg离心1min，弃滤液；加500μL Buffer W1，12,000xg离心30s，弃滤液；加700μL Buffer W2，12,000xg离心30s，弃滤液(重复2次)；空柱子12,000xg空转离心1min；将制备管置于洁净的1.5mL离心管中，开盖静置8min(挥发乙醇)，在制备膜中央加25
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30μL 65℃去离子水，静置2min，12,000xg离心1min洗脱DNA(可用洗脱后的液体再重复一次)；最后再使用超微量分光光度计测定DNA片段浓度。
[0042]1.2构建载体pET32a
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ANTP...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.经皮镇痛肽，其特征在于，其氨基酸序列为2.根据权利要求1所述的经皮镇痛肽，其特征在于，呈冻干粉末状。3.经皮镇痛肽的制备方法，其特征在于，通过基因重组技术将神经肽B基因与透皮肽ANTP基因结合，诱导表达得到经皮镇痛肽。4.根据权利要求3所述的经皮镇痛肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、制备BL21(DE3)/pET32a
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BgNPB，BL21(DE3)/pET32a
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BgNPB含EcoR I和Hind III限制性内切酶位点；步骤二、对BL21(DE3)/pET32a
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BgNPB中的融合蛋白TrxD
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BgNPB进行诱导表达，步骤三、对融合蛋白TrxD
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BgNPB进行条件优化，步骤四、对融合蛋白TrxD
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BgNPB进行分离纯化后获得成熟融合蛋白ANTP
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BgNPB溶液，成熟融合蛋白ANTP
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BgNPB溶液中含有经皮镇痛肽。5.根据权利要求4所述的经皮镇痛肽的制备方法，其特征在于，步骤一中，先在基因片段中插入pET28a(+)质粒的E...

【专利技术属性】
技术研发人员：高飞，郇伟伟，彭鑫萌，蔡鹏，李洁，
申请(专利权)人：浙江至元生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：