维生素E代谢相关基因的分型试剂盒、引物组和分型方法技术

本发明专利技术涉及基因检测领域，具体涉及C12N15/11领域，更具体地，本发明专利技术涉及一种维生素E代谢相关基因的非诊断目的的分型试剂盒、引物组和分型方法。一种维生素E代谢相关基因的PCR扩增引物组，其核苷酸序列如SEQ IDNO：1

【技术实现步骤摘要】
维生素E代谢相关基因的分型试剂盒、引物组和分型方法


[0001]本专利技术涉及基因检测领域，具体涉及C12N15/11领域，更具体地，本专利技术涉及一种维生素E代谢相关基因的分型试剂盒、引物组和分型方法。

技术介绍

[0002]目前测定维生素E基因的常用方法为多重PCR
‑
测序，也有采用飞行时间质谱检测方法。但已报道的方法中，采用飞行时间质谱法检测少量位点的平均成本也相对较高。目前，常采用PCR测序法来检测多个基因/位点的基因多态性。在检测过程中，现有的检测方法一次只能检测一个或少数几个基因/位点的基因多态性类型，使得该检测方法存在检测周期长、通量低的问题，最终导致检测效率低。例如，中国专利CN 110511985 A提供了一种维生素E吸收相关基因突变位点的检测方法，检测基因和位点为CYP4F2
‑
rs2108622、ZPR1
‑
rs964184；中国专利CN 110184335 A提供了一种维生素E代谢相关基因突变位点的检测方法，检测基因及位点为CYP4F2基因，ZPR1基因。
[0003]此外，多重PCR
‑
测序法虽然检测位点较多，但是存在多位点检测成本高、分析时间耗时等问题，且不适用于高通量的样本检测。
[0004]因此，急需找到一种简便易行、检测通量高、自动化程度高的与维生素E代谢相关基因的分型试剂盒和分型方法。

技术实现思路

[0005]针对现有技术中存在的一些问题，本专利技术第一个方面提供了一种维生素E代谢相关基因的PCR扩增引物组，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1
‑
SEQ ID NO：12中的至少一种。
[0006]优选的，所述PCR扩增引物组的目标产物长度范围为200
‑
700bp。
[0007]本申请PCR扩增引物组的核苷酸序列具体见表1。
[0008]表1
[0009][0010][0011]本专利技术第二个方面提供了一种维生素E代谢相关基因的分型试剂盒，包括核酸扩增试剂和单碱基延伸反应试剂，其中，所述核酸扩增试剂中包括6对引物。
[0012]在一种实施方式中，所述核酸扩增试剂中还包括GC
‑
RICH solution、FastStart Taq DNA聚合酶，优选的，还包括水、缓冲液、MgCl2、dNTP mix、模板。
[0013]本申请所述单碱基延伸反应试剂中包括一组单碱基延伸引物，优选包括24条单碱基延伸引物。
[0014]优选的，单碱基延伸引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：13
‑
SEQ ID NO：36所示，MS分子量范围为4700
‑
8600，具体见表2
‑
1及表2
‑
2。
[0015]表2
‑1[0016][0017][0018]表2
‑2[0019][0020][0021][0022]备注：其中VE
‑
T3延伸引物同时用于检测2T>C和2T>A位点，VE
‑
T17同时用于检测421G>T、421G>A位点。
[0023]在一种实施方式中，所述分型试剂盒还包括碱性磷酸酶反应液和/或脱盐试剂。
[0024]优选的，所述碱性磷酸酶反应液中碱性磷酸酶选自虾碱性磷酸酶、大肠杆菌碱性磷酸酶、大鼠碱性磷酸酶中一种或多种。具体的，碱性磷酸酶的浓度为1.7U/μL，结合缓冲液配制成碱性磷酸酶的浓度为0.073U/μL的碱性磷酸酶反应液。
[0025]在一种实施方式中，维生素E代谢相关基因的分型方法，包括：PCR扩增引物进行PCR扩增反应、碱性磷酸酶消化、单碱基延伸引物进行单碱基延伸反应、脱盐处理、高效液相色谱
‑
质谱联用检测。
[0026]本申请分型方法检测位点如下表。
[0027][0028][0029]在一种实施方式中，在分型方法中，将维生素E代谢相关的TTPA、COMT基因的26个突变位点分为A、B两组进行检测。
[0030]在一种实施方式中，在分型方法中，所述PCR扩增引物组包括核苷酸序列如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：7
‑
SEQ ID NO：12所示的PCR扩增引物组，其初始浓度为9
‑
11μM，优选为10μM，溶剂为水。
[0031]优选的，A组所述PCR扩增引物组包括核苷酸序列如SEQ ID NO：1
‑
SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：9
‑
SEQ ID NO：12所示的PCR扩增引物组，其浓度为0.5
‑
1μM；SEQ ID NO：7
‑
SEQ ID NO：8所示的PCR扩增引物组，其浓度为1.5
‑
2.5μM。
[0032]优选的，在PCR扩增引物组中，核苷酸序列如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2的PCR扩增引物的体积为2
‑
3μL，核苷酸序列如SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8的PCR扩增引物的体积为8
‑
12μL，核苷酸序列如SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：12的PCR扩增引物的体积为2
‑
3μL，更优选的，在PCR扩增引物组中，核苷酸序列如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2的PCR扩增引物的体积为2.5μL，核苷酸序列如SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8的PCR扩增引物的体积为10μL，核苷酸序列如SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：12的PCR扩增引物的体积为2.5μL，溶剂水的体积为15μL。
[0033]在一种实施方式中，在分型方法中，B组所述PCR扩增引物组包括核苷酸序列如SEQ ID NO：1
‑
SEQ ID NO：6所示的PCR扩增引物组，其浓度为0.5
‑
1.5μM。
[0034]优选的，A组所述的单碱基延伸引物组包括SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：17所示的单碱基延伸引物，其浓度为9
‑
11uM；SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：35所示的单碱基延伸引物，其浓度为11.5
‑
13.5uM；SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：36所示的单碱基延伸引物，其浓度为17.5
‑
19.5uM；SEQ ID NO：15所示的单碱基延伸引物，其浓度为24
‑
26μM；
[0035]进一步优选的，核苷酸序列如SEQ ID NO：14和SEQ ID NO：17所示的单碱基延伸引物的体积分别为1μL，核苷酸序列如SEQ ID N本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种维生素E代谢相关基因的PCR扩增引物组，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1
‑
SEQ ID NO：12中的至少一种。2.根据权利要求1所述维生素E代谢相关基因的引物，其特征在于，所述PCR扩增引物组的目标产物长度范围为200
‑
700bp。3.一种维生素E代谢相关基因的分型试剂盒，其特征在于，包括核酸扩增试剂和单碱基延伸反应试剂，其中，所述核酸扩增试剂中包括6对权利要求1或2中引物，优选的，所示核酸扩增试剂中还包括GC
‑
RICH solution、FastStart Taq DNA聚合酶。4.根据权利要求3所述维生素E代谢相关基因的分型试剂盒，其特征在于，所述单碱基延伸反应试剂中包括一组单碱基延伸引物，单碱基延伸引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：13
‑
SEQ ID NO：36中的至少一种。5.根据权利要求4所述维生素E代谢相关基因的分型试剂盒，其特征在于，所述单碱基延伸引物的MS分子量范围为4700
‑
8600。6.根据权利要求5所述维生素E代谢相关基因的分型试剂盒，其特征在于，所述分型试剂盒还包括碱性磷酸酶反应液和/或脱盐试剂。7.一种维生素E代谢相关基因的分型方法，其特征在于，包括：S1、利用如SEQ ID NO.1
‑
SEQ ID NO.12所示的PCR扩增引物组进行PCR扩增反应，获得特异性扩增产物；S2、利用碱性磷酸酶消化，去除所述特异性扩增产物中的dNTP，获得消化后产物；S3、利用SEQ ID NO.13
‑
SEQ ID NO.36所示的单碱基延伸引物组对所述消化后产物进行单碱基延伸反应，获得延伸反应产物；S4、对所述延伸反应产物进行脱盐处理，获得脱盐产物；S5、通过高效液相色谱
‑
质谱联用仪对所述脱盐产物进行检测，分析后获得维生素E代谢相关基因的分型结果。8.根据权利要求7所述维生素E代谢相关基因的分型方法，其特征在于，将维生素E代谢相关的TTPA、COMT基因的26个突变位点分为A、B两组进行检测，在检测过程中，A组检测时使用A组PCR扩增引物组，A组单碱基延伸引物组，B组检测时使用B组PCR扩增引物组，B组单碱基延伸引物组。9.根据权利要求8所述维生素E代谢相关基...

【专利技术属性】
技术研发人员：周坤，贾永娟，丛芹芹，武舒佳，倪君君，
申请(专利权)人：苏州和合医学检验有限公司，
类型：发明
国别省市：