一种同时检测血液中6种免疫抑制剂浓度的方法技术

本发明专利技术涉及一种同时检测血液中6种免疫抑制剂浓度的方法，所述方法包括：

【技术实现步骤摘要】
一种同时检测血液中6种免疫抑制剂浓度的方法


[0001]本专利技术涉及血药检测
，尤其涉及一种同时检测血液中6种免疫抑制剂浓度的方法
。

技术介绍

[0002]目前测定血液中硫唑嘌呤
、6
‑
巯基嘌呤
、6
‑
甲基巯基嘌呤
、6
‑
硫鸟嘌呤
、6
‑
硫鸟嘌呤核苷
、
咪唑立宾等免疫抑制剂的含量通常可以采用高效液相色谱质谱联用法，但是并没有同时检测上述物质的方法，同时，已被报道的文献方法大多存在着样品量需求较大，标准曲线前处理需添加基质
、
单物质检测等问题，上述问题会增加检测难度降低检测效率，尚不适于大通量的样本检测
。

技术实现思路

[0003]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种同时检测血液中6种免疫抑制剂浓度的方法
。
[0004]第一方面，本专利技术提供了一种同时检测血液中6种免疫抑制剂浓度的方法，所述方法包括：
[0005](1)
配制至少三种不同浓度的含有6种免疫抑制剂及其内标物的标准溶液，并利用液相色谱
‑
质谱对所述标准溶液进行检测，根据检测结果分别建立所述6种免疫抑制剂的标准曲线；
[0006]其中，所述6种免疫抑制剂为硫唑嘌呤
、6
‑
巯基嘌呤
、6
‑
甲基巯基嘌呤
、6
‑
硫鸟嘌呤/>、6
‑
硫鸟嘌呤核苷和咪唑立宾；
[0007](2)
将待处理血样
、
内标工作液和蛋白沉淀剂混合并取清液进行稀释，得到待进样样品；
[0008](3)
利用液相色谱
‑
质谱对所述待进样样品进行检测，根据检测结果和所述标准曲线确定所述待测样品中6种免疫抑制剂的含量
。
[0009]本专利技术提供的检测方法能够一针测得6种免疫抑制剂的含量，检测时间短，在
5min
以内出结果，提高检测效率的同时降低操作难度，适用于高通量样本的检测
。
[0010]作为本专利技术的一种优选技术方案，在步骤
(2)
中，所述蛋白沉淀剂选自甲醇和
/
或乙腈
。
[0011]在本专利技术提供样品前处理条件中，仅是利用简单的蛋白沉淀剂进行处理，后续再利用稀释剂进行稀释，能够降低基质效应和溶剂效应
。
[0012]作为本专利技术的一种优选技术方案，所述待处理血样与所述蛋白沉淀剂的体积比为
1:(5
‑
10)
，例如
1:6、1:7、1:8、1:9
等
。
[0013]作为本专利技术的一种优选技术方案，所述待处理血样和所述内标工作液的体积比为
(5
‑
10):1
，例如
6:1、7:1、8:1、9:1
等
。
[0014]作为本专利技术的一种优选技术方案，所述稀释使用的溶剂为纯水
。
[0015]作为本专利技术的一种优选技术方案，所述清液与纯水的体积比为
1:(1
‑
5)
，例如
1:2、1:3、1:4
等
。
[0016]若稀释倍数较小，则无法完全避免基质效应和溶剂效应，若稀释过量，则会导致目标物的检测信号较弱
。
[0017]作为本专利技术的一种优选技术方案，所述液相色谱的条件包括：
[0018]流动相：
A
相为含有
0.2
‑3％甲酸
、1
‑
10mmol/L
甲酸铵或乙酸铵的水溶液，
B
相为甲醇或乙腈
。
[0019]所述
0.2
‑3％甲酸可以为
0.5
％
、1
％
、1.5
％
、2
％
、2.5
％等；所述1‑
10mmol/L
可以为
2mmol/L、4mmol/L、6mmol/L、8mmol/L
等
。
[0020]梯度洗脱：
[0021]0.00min
：
A
相
85
‑
98
％，
B
相
15
‑2％；
[0022]0.50min
：
A
相
85
‑
98
％，
B
相
15
‑2％；
[0023]0.60min
：
A
相
50
‑
75
％，
B
相
50
‑
25
％；
[0024]1.20min
：
A
相
50
‑
75
％，
B
相
50
‑
25
％；
[0025]1.50min
：
A
相
25
‑
45
％，
B
相
75
‑
55
％；
[0026]2.00min
：
A
相
25
‑
45
％，
B
相
75
‑
55
％；
[0027]2.50min
：
A
相2‑
20
％，
B
相
98
‑
80
％；
[0028]3.00min
：
A
相2‑
20
％，
B
相
98
‑
80
％；
[0029]3.10min
：
A
相
85
‑
98
％，
B
相
15
‑2％；
[0030]5.00min
：
A
相
85
‑
98
％，
B
相
15
‑2％
。
[0031]在梯度洗脱条件中，对于
0.00
‑
0.50min
，
A
相可以为
86
％
、88
％
、90
％
、92
％
、95
％
、97
％等，
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种同时检测血液中6种免疫抑制剂浓度的方法，其特征在于，所述方法包括：
(1)
配制至少三种不同浓度的含有6种免疫抑制剂及其内标物的标准溶液，并利用液相色谱
‑
质谱对所述标准溶液进行检测，根据检测结果分别建立所述6种免疫抑制剂的标准曲线；其中，所述6种免疫抑制剂为硫唑嘌呤
、6
‑
巯基嘌呤
、6
‑
甲基巯基嘌呤
、6
‑
硫鸟嘌呤
、6
‑
硫鸟嘌呤核苷和咪唑立宾；
(2)
将待处理血样
、
内标工作液和蛋白沉淀剂混合并取清液进行稀释，得到待进样样品；
(3)
利用液相色谱
‑
质谱对所述待进样样品进行检测，根据检测结果和所述标准曲线确定所述待处理血样中6种免疫抑制剂的含量
。2.
根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤
(2)
中，所述蛋白沉淀剂选自甲醇和
/
或乙腈；和
/
或，所述待处理血样与所述蛋白沉淀剂的体积比为
1:(5
‑
10)
；和
/
或，所述待处理血样和所述内标工作液的体积比为
(5
‑
10):1
；和
/
或，所述稀释使用的溶剂为纯水
。3.
根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述清液与纯水的体积比为
1:(1
‑
5)。4.
根据权利要求1‑3中的任一项所述的方法，其特征在于，所述液相色谱的条件包括：流动相：
A
相为含有
0.2
‑3％甲酸
、1
‑
10mmol/L
甲酸铵或乙酸铵的水溶液，
B
相为甲醇或乙腈；梯度洗脱：
0.00min
：
A
相
85
‑
98
％，
B
相
15
‑2％；
0.50min
：
A
相
85
‑
98
％，
B
相
15
‑2％；
0.60min
：
A
相
50
‑
75
％，
B
相
50
‑
25
％；
1.20min
：
A
相
50
‑
75
％，
B
相
50
‑
25
％；
1.50min
：
A
相
25
‑
45
％，
B
相
75
‑
55
％；
2.00min
：
A
相
25
‑
45
％，<...

【专利技术属性】
技术研发人员：张杰，贾永娟，刘春冉，刘杏立，倪君君，
申请(专利权)人：苏州和合医学检验有限公司，
类型：发明
国别省市：