玉米淀粉在蛋白质组学样品前处理中的应用制造技术

本发明专利技术公开了玉米淀粉在蛋白质组学样品前处理中的应用，包括玉米淀粉，所述玉米淀粉中糖肽的富集和分离方法为：将三氟乙酸

【技术实现步骤摘要】
玉米淀粉在蛋白质组学样品前处理中的应用


[0001]本专利技术涉及蛋白质组学分析
，特别涉及玉米淀粉在蛋白质组学样品前处理中的应用
。

技术介绍

[0002]翻译后修饰（
PTMs
）在扩展蛋白质组的复杂性方面发挥着重要作用
。
其中，糖基化作为最重要和最基本的翻译后修饰之一，广泛存在于人体分泌的蛋白质中
。
蛋白质糖基化参与各种必要的细胞活动，比如信号转导
、
细胞增殖和细胞凋亡
。
此外，一些疾病的发生与蛋白糖基化异常密切相关，如神经退行性疾病
、
遗传病
、
肺病
、
糖尿病和癌症等
。
同时，新型冠状病毒病（
COVID
‑
2019
）的研究结果表明，冠状病毒的糖基化蛋白与受体结合和细胞侵袭过程密切相关
。
因此，阐明糖基化程度和部位的相关信息对于及时诊断和随后的疾病靶向治疗具有重要意义
。
健康个体和患病个体之间的糖基化水平差异较小，因此需要借助有效工具对蛋白质糖基化水平进行全面分析
。
质谱（
MS
）以其高通量
、
操作简单
、
灵敏度高
、
即时性等优点在蛋白质糖基化分析中占据主要地位
。
然而，在直接检测生物样品的过程中，糖肽的信号很容易受到其他高丰度非糖肽和杂质的干扰而被抑制
>。
因此，在
MS
检测之前，对糖肽进行选择性富集和分离至关重要
。
[0003]在以往的糖蛋白
/
糖肽富集策略中，依靠糖肽比非糖肽更高的亲水性，亲水相互作用液相色谱法（
HILIC
）得到了广泛应用
。HILIC
有着优异的
MS
兼容性
、
不破坏糖肽的结构和选择性分离等特性
。
但基于
HILIC
富集糖肽的材料受限于原材料成本高
、
化学消耗大
、
不环保
、
耗时长
、
材料制备过程复杂等问题
。
[0004]因此，发展一种天然环保的亲水相互作用液相色谱法类材料，用于选择性分离和富集糖肽是一种新的需求，为此我们提出玉米淀粉在蛋白质组学样品前处理中的应用
。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供玉米淀粉在蛋白质组学样品前处理中的应用，以解决上述
技术介绍
中提出的问题
。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：玉米淀粉在蛋白质组学样品前处理中的应用方法，包括玉米淀粉，所述玉米淀粉中糖肽的富集和分离方法包括以下步骤：步骤一，将三氟乙酸
、
去离子水和乙腈按照一定体积比配置成上样缓冲液；步骤二，将带玉米淀粉
、
上样缓冲液
、
目标糖基化肽段溶液在预定温度下孵育预定的时间；步骤三，用上样缓冲液三次洗涤，然后加入三氟乙酸
、
去离子水和乙腈按照一定体积比配置成的洗脱缓冲液，在预定温度下洗脱预定的时间，离心分离获取上清液；步骤四
。
进行
MALDI
‑
TOF MS
或
NanoLC
‑
MS/MS
检测
。
[0007]优选的，所述玉米淀粉为天然的玉米淀粉，且所述玉米淀粉无需其他预处理加工
。
[0008]优选的，所述上样缓冲液由
3%
体积比的三氟乙酸
、7%
体积比的去离子水和
90%
体积
比的乙腈组成
。
[0009]优选的，所述洗脱缓冲液由
0.1%
体积比的三氟乙酸
、69.9%
体积比的去离子水和
90%
体积比的乙腈组成
。
[0010]优选的，在所述步骤二中的孵化温度为
37℃
，在所述步骤三中洗脱温度为
37℃。
[0011]优选的，在所述步骤二中孵化的时间为两小时，在所述步骤三中洗脱的时间为一小时
。
[0012]本专利技术的技术效果和优点：本专利技术利用天然
、
可再生和可生物降解的玉米淀粉基于亲水相互作用液相色谱法富集糖肽，由于含有碳基生物质和多孔结构，未经复杂预处理的蛋壳可以有效富集样品中的糖肽，玉米淀粉的直接应用避免了繁琐的合成方法
、
材料合成时间长
、
成本高以及化学品可能对环境造成的污染
。
附图说明
[0013]图1为本专利技术实施例1的玉米淀粉的扫描电子显微镜照片图；图2为本专利技术实施例2中玉米淀粉富集
HRP
中的糖肽的质谱图；图3为本专利技术实施例2中玉米淀粉富集糖肽检测限（
0.1 fmol/
μ
L
）的质谱图；图4为本专利技术实施例3中玉米淀粉富集混合蛋白（
BSA:HRP=2000:1
）中的糖肽的质谱图；图5是本专利技术实施例4中玉米淀粉富集标准糖肽的负载质谱图；图6为本专利技术实施例5中玉米淀粉富集三个健康人和三个肠癌患者血清外泌体中糖肽段的维恩图
。
具体实施方式
[0014]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚
、
完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例
。
基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围
。
实施例1
[0015]所得的玉米淀粉的扫描电子显微镜照片如图1所示
。
实施例2
[0016]玉米淀粉在富集
HRP
中的糖肽的应用：（1）试样的准备：辣根过氧化物酶（
HRP
）在
25mmol/LNH4HCO3
溶液中
37℃
酶解
16
小时；（2）富集：
0.5 mg
玉米淀粉粉末分散到
100
μ
L
的
3%
体积比的三氟乙酸
、7%
体积比的去离子水和
90%
体积比的乙腈的离心管中，再加入2μ
L
步骤（1）制备的样品，在
37℃
富集2小时；用
3%
体积比的三氟乙酸
、7%
体积比的去离子水和
90%
体积比的乙腈的缓冲液充分洗涤并离心分离3次；加入
10
μ
L0.1%
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
玉米淀粉在蛋白质组学样品前处理中的应用方法，其特征在于，包括玉米淀粉，所述玉米淀粉中糖肽的富集和分离方法包括以下步骤：步骤一，将三氟乙酸
、
去离子水和乙腈按照一定体积比配置成上样缓冲液；步骤二，将带玉米淀粉
、
上样缓冲液
、
目标糖基化肽段溶液在预定温度下孵育预定的时间；步骤三，用上样缓冲液三次洗涤，然后加入三氟乙酸
、
去离子水和乙腈按照一定体积比配置成的洗脱缓冲液，在预定温度下洗脱预定的时间，离心分离获取上清液；步骤四
。
进行
MALDI
‑
TOFMS
或
NanoLC
‑
MS/MS
检测
。2.
根据权利要求1所述的玉米淀粉在蛋白质组学样品前处理中的应用方法，其特征在于，所述玉米淀粉为天然的玉米淀粉，且所述玉米淀粉无需其他预处理加工
...

【专利技术属性】
技术研发人员：张顺，蔡挺，冯铨受，闫迎华，丁传凡，熊资，
申请(专利权)人：中国科学院大学宁波华美医院，
类型：发明
国别省市：