一种检测噬血细胞性淋巴组织细胞增生症的血清microRNA标志物及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种检测噬血细胞性淋巴组织细胞增生症的血清microRNA标志物及其应用，所述血清microRNA标志物选自hsa

【技术实现步骤摘要】
一种检测噬血细胞性淋巴组织细胞增生症的血清microRNA标志物及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种检测噬血细胞性淋巴组织细胞增生症的血清microRNA标志物及其应用。

技术介绍

[0002]噬血细胞性淋巴组织细胞增生症（Hemophagocytic Iymphohistiocytosis，HLH）由感染、肿瘤、免疫性疾病等多种致病因素导致的一种致命性的临床综合征。该病多见于儿童，但近年来随着对HLH的认识不断深入，成年人患者的发病率也逐渐升高。其发病率约为1.2/100万，男女患者的发病率无明显差异。HLH的早期死亡率仍高达33%，3年生存率仅为55%。此外，HLH的临床表现以及实验室指标尚无特异性，全身炎症反应综合征、病毒感染、肿瘤等亦可出现与HLH临床相似的异常指标，容易造成误诊，增加患者死亡风险。因此，寻找新的生物标志物应用于HLH的诊疗是十分必要的，对于减少漏诊、误诊，改善患者的预后具有重要意义。
[0003]microRNA是一类长约19
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24 nt的非编码单链小RNA分子，绝大多数miRNA可以通过与靶基因3
’
UTR区互补结合，抑制靶基因翻译成蛋白质，进而在细胞、组织或个体水平上影响生物体的生长发育，并参与多种疾病过程。miRNA的表达谱具有明显的组织特异性，在不同疾病中具有特定的表达模式。这些特点使得miRNA成为疾病诊断新的生物学标记和治疗靶标。目前已发现在HLH中有多种miRNA的表达异常，比如miRNA
‑/>205
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5p、miR
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133和miR
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BART16
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1等，其在HLH进展的不同阶段发生，可以作为HLH的发生、疾病的进展以及预后的分子生物学证据。
[0004]尽管有少量研究报道了一些检测噬血细胞性淋巴组织细胞增生症的血清microRNA标志物，但是这些结果并不一致，没有经过完善的检测性能验证。因此，最终能用于噬血细胞性淋巴组织细胞增生症检测的血清microRNA生物标志物未见定论，对应的生物标志物组合试剂盒也未见上市。因此，如果能够研发出相应的噬血细胞性淋巴组织细胞增生症试剂盒并应用于科研临床领域，将极大地促进噬血细胞性淋巴组织细胞增生症筛查诊断研究及科研成果的转化，对于噬血细胞性淋巴组织细胞增生症的诊疗必将起到巨大的推动作用。

技术实现思路

[0005]针对现有技术存在的不足，本专利技术的目的在于提供一种检测噬血细胞性淋巴组织细胞增生症的血清microRNA标志物及其应用。基于所述标志物的检测方法能够无创、快速、精准地对噬血细胞性淋巴组织细胞增生症进行辅助诊断检测，在噬血细胞性淋巴组织细胞增生症筛查诊断研究中具有重要的应用价值。
[0006]为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0007]第一方面，本专利技术提供一种检测噬血细胞性淋巴组织细胞增生症的血清
microRNAhsa
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miR
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5p，所述血清microRNA标志物选自hsa
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miR
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5p和/或hsa
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miR
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5p。
[0008]优选地，所述血清microRNA标志物为hsa
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miR
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5p和hsa
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miR
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5p的组合。
[0009]本专利技术前期使用Small RNA
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seq检测健康对照组和噬血细胞性淋巴组织细胞增生症患者血清中microRNA的表达谱，筛选差异表达的microRNA，使用实时定量PCR对候选microRNA验证，分析靶标microRNA表达量，获得2种差异血清microRNA标志物。
[0010]根据本专利技术筛选得到的与噬血细胞性淋巴组织细胞增生症相关的microRNA标志物hsa
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miR
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5p和hsa
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miR
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106a
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5p，其在至少一种靶血清中与在至少一种健康对照血清中差异表达，因此可以反映出在噬血细胞性淋巴组织细胞增生症患者及健康者中的差异表达，体现了对噬血细胞性淋巴组织细胞增生症诊断的高敏感性和高特异性。
[0011]第二方面，本专利技术提供一种用于检测噬血细胞性淋巴组织细胞增生症的试剂盒，所述试剂盒中包括特异性检测第一方面所述的检测噬血细胞性淋巴组织细胞增生症的血清microRNA标志物的试剂。
[0012]优选地，所述试剂包括扩增第一方面所述的检测噬血细胞性淋巴组织细胞增生症的血清microRNA标志物的qPCR上游引物。
[0013]优选地，扩增标志物hsa
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miR
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5p的qPCR上游引物如SEQ ID NO:4所示。SEQ ID NO:4：gccaggcatagcttatcagactg。
[0014]优选地，扩增标志物hsa
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miR
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106a
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5p的qPCR上游引物如SEQ ID NO:5所示。SEQ ID NO:5：atcccacaaaagtgcttacagtg。
[0015]优选地，所述试剂还包括外源内参基因的成熟前体序列和扩增所述成熟前体序列的qPCR上游引物。
[0016]优选地，所述外源内参基因的成熟前体序列如SEQ ID NO:3所示。SEQ ID NO:3：ucaccggguguaaaucagcuug。
[0017]优选地，扩增所述成熟前体序列的qPCR上游引物如SEQ ID NO:6所示。SEQ ID NO:6：cgtcgatcaccgggtgtaaa。
[0018]本专利技术所涉及的hsa
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miR
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5p和hsa
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miR
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5p microRNA的序列以及外源内参基因序列见表1。hsa
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miR
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5p对应的序列为SEQ ID NO:1：uagcuuaucagacugauguuga。hsa
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miR
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5p对应的序列为SEQ ID NO:2：aaaagugcuuacagugcagguag。
[0019]表1
[0020][0021]本专利技术所涉及的2种microRNA标志物hsa
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miR
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5p和本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测噬血细胞性淋巴组织细胞增生症的血清microRNA标志物，其特征在于，所述血清microRNA标志物选自hsa
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miR
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5p和/或hsa
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miR
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106a
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5p。2.根据权利要求1所述的检测噬血细胞性淋巴组织细胞增生症的血清microRNA标志物，其特征在于，所述血清microRNA标志物为hsa
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miR
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5p和hsa
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miR
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5p的组合。3.一种用于检测噬血细胞性淋巴组织细胞增生症的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括特异性检测权利要求1或2所述的检测噬血细胞性淋巴组织细胞增生症的血清microRNA标志物的试剂。4.根据权利要求3所述的用于检测噬血细胞性淋巴组织细胞增生症的试剂盒，其特征在于，所述试剂包括扩增权利要求1或2所述的检测噬血细胞性淋巴组织细胞增生症的血清microRNA标志物的qPCR上游引物；扩增标志物hsa
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miR
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5p的qPCR上游引物如SEQ ID NO:4所示；扩增标志物hsa
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miR
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106a
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5p的qPCR上游引物如SEQ ID NO:5所示。5.根据权利要求4所述的用于检测噬血细胞性淋巴组织细胞增生症的试剂盒，其特征在于，所述试剂还包括外源内参基因的成熟前体序列和扩增所述成熟前体序列的qPCR上游引物；所述外源内参基因的成熟前体序列如SEQ ID NO:3所示；扩增所述成熟前体序列的qPCR上游引物如SEQ ID NO:6所示。6.根据权利要求5所述的用于检测噬血细胞性淋巴组织细胞增生症的试剂盒，其特征在于，所述试剂还包括Poly
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A加尾酶、逆转录酶、dNTPs、逆转录缓冲液、无RNA酶水、氯化镁、DNA聚合酶、SYBR Green PCR预混液中任意一种或至少两种的组合。7.一种检测噬血细胞性淋巴组织细胞增生症的装置，其特征在于，所述装置包括：样品扩增模块：提取待测样本的血清miRNA，使用权利要求3<...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤郡，王大庆，黄晓东，张亚飞，
申请(专利权)人：迈杰转化医学研究苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：